川芎嗪對高糖致大鼠腹膜間皮細(xì)胞Bim表達(dá)的影響

田婷　甘平

【摘要】 目的 觀察川芎嗪對高糖致大鼠腹膜間皮細(xì)胞Bim表達(dá)的影響。方法 將36只健康雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表達(dá)分成3組：對照組（n=12）：腹腔每天注射生理鹽水25ml；模型組（n=12，HGC組）：腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液25ml，實(shí)驗(yàn)第8、10、12、22、24、26天注射加有脂多糖6mg/L的4.25%葡萄糖腹透液；治療組（n=12，HGM組）：腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液25ml+2%鹽酸川芎嗪溶液（40mg/L），實(shí)驗(yàn)第8、10、12、22、24、26天注射加有脂多糖6mg/L的4.25%葡萄糖腹膜液。8周后分別處死各組大鼠，取腹膜組織及SABC免疫組化學(xué)法檢測腹膜間皮細(xì)胞內(nèi)Bim的表達(dá)。結(jié)果 與對照組比較，HGC組和HGM組腹膜間皮細(xì)胞Bim表達(dá)上調(diào)（P〈0.05），且HGC組顯著高于HGM組（P〈0.05）。結(jié)論 川芎嗪能夠促進(jìn)高糖致大鼠腹膜間皮細(xì)胞Bim表達(dá)下調(diào)，可能存在減輕腹膜纖維化的機(jī)制。

【關(guān)鍵詞】川芎嗪；脂多糖；腹膜間皮細(xì)胞；Bim

【中圖分類號】R446.61 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）02-0123-01

前言：持續(xù)性不臥床腹膜透析（continuous ambulatory peritoneal dialysis，CAPD）是終末期腎病患者腎臟替代治療的手段之一，而腹膜纖維化所致超濾下降是影響患者長期有效透析的重要因素[1] ，目前研究表明腹膜透析時(shí)腹膜炎癥的反復(fù)發(fā)生和腹膜透析液的生物不相容性是導(dǎo)致腹膜纖維化的主要因素，其病理改變主要表現(xiàn)為腹膜壁層單核巨噬細(xì)胞侵潤和腹膜外基質(zhì)的沉積[2] 。Bim是Bcl-2家族的促凋亡因子，是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的，多項(xiàng)研究證明它可以誘導(dǎo)多種細(xì)胞的凋亡。川芎嗪是中藥川芎中提取的有效成分，研究證實(shí)低劑量川芎嗪有提高腹膜透析凈超量，細(xì)胞保護(hù)及抗炎作用[3] 。本文觀察川芎嗪對高糖致大鼠腹膜間皮細(xì)胞Bim表達(dá)的影響，討論其CAPD時(shí)腹膜慢性炎癥發(fā)病機(jī)制中的可能機(jī)制。

材料與方法

1.1 試劑和藥物

4.25%葡萄糖腹膜透析液（百特醫(yī)療公司出品），注射用鹽酸川芎嗪（上海源葉生物技術(shù)有限公司）。兔抗鼠 Bim抗體，即用型SABC 免疫組化染色試劑盒， 5% BSA 封閉液，DAB 顯色試劑盒，紅細(xì)胞裂解液。

1.2 動物分組和實(shí)驗(yàn)方法

36只健康雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表達(dá)分成3組：對照組（n=12）：腹腔每天注射生理鹽水25ml；模型組（n=12，HGC組）：腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液25ml，實(shí)驗(yàn)第8、10、12、22、24、26天注射加含脂多糖6mg/L的4.25%葡萄糖腹膜透液；治療組（n=12，HGM組）：腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液25ml+2%鹽酸川芎嗪溶液（40mg/L），實(shí)驗(yàn)第8、10、12、22、24、26天注射加含脂多糖6mg/L的4.25%葡萄糖腹透液。

1.3 標(biāo)本取材

8周后分別處死各組大鼠，取腹膜組織及SABC免疫組化學(xué)法檢測腹膜間皮細(xì)胞內(nèi)Bim的表達(dá)，并行腹膜組織HE及Masson染色病理學(xué)檢查。取石蠟包埋的壁腹膜組織，作5μm 切片，常規(guī)方法 HE 染色， 光鏡下觀察病理改變。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采取SPSS 19.0軟件數(shù)據(jù)包對于收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和比較，計(jì)量性資料采取均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，組間比較采取t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)性資料采取X2檢驗(yàn)。當(dāng)P<0.05時(shí)，可以認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

與對照組比較，HGC組和HGM組腹膜間皮細(xì)胞Bim表達(dá)上調(diào)（P〈0.05），且HGC組顯著高于HGM組（P〈0.05）。HE染色后光鏡下HGC組和HGM組可見腹膜間皮細(xì)胞由扁平變成圓形、柱形，間皮細(xì)胞肥大脫落，間皮下結(jié)締組織明顯增厚，可見血管生成及纖維素物質(zhì)沉積，還可見纖維細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞侵潤，HGC組表現(xiàn)尤為明顯。

3.討論

臨床治療終末期腎衰竭的主要替代治療之一是采取CAPD，因此腹膜功能和機(jī)構(gòu)的穩(wěn)定性是CAPD治療的物質(zhì)基礎(chǔ)。在CAPD諸多的并發(fā)癥中，腹膜纖維化是其中最為常見的一種，該并發(fā)癥的形成和發(fā)展直接導(dǎo)致了腹膜的結(jié)構(gòu)和功能性的變化，從而導(dǎo)致了透析治療的失敗，超濾失敗是大部分終末期腎衰竭患者退出治療的主要原因。在臨床的治療上，由于治療技術(shù)的不斷提高，由感染引起的急性腹膜炎病例數(shù)明顯下降，而慢性腹膜炎持續(xù)存在。傳統(tǒng)的腹透液主要選擇葡萄糖作為滲透性物質(zhì)，在加熱過程中形成的葡萄糖降解產(chǎn)物對腹膜間皮細(xì)胞具有明顯的細(xì)胞毒性作用，并對損傷后的細(xì)胞復(fù)修存在一定的抑制作用，造成了間皮細(xì)胞的死亡和剝落，死亡細(xì)胞的空隙則由膠原蛋白結(jié)締組織進(jìn)行補(bǔ)充，最后形成了纖維化腹膜。因此可以認(rèn)為腹膜的纖維化是導(dǎo)致透析治療效果下降的主要元兇。

川芎嗪是中藥川芎中提取的有效成分，研究證實(shí)低劑量川芎嗪有提高腹膜透析凈超量，細(xì)胞保護(hù)及抗炎作用。有研究表明，川芎嗪對于透析液所造成的慢性腹膜炎癥反應(yīng)和纖維化反應(yīng)具有較好的抑制作用，其主要機(jī)理是川芎嗪能夠抑制由于透析液所誘發(fā)的P65、NF-KB、PMC等炎癥因子的高表達(dá)。從而起到抗炎的作用，但是過往的研究對于機(jī)理沒有進(jìn)一步的闡述。Bim是Bcl-2家族的促凋亡因子，是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的，多項(xiàng)研究證明它可以誘導(dǎo)多種細(xì)胞的凋亡。本文的研究表明，川芎嗪對于Bim的表達(dá)具有下調(diào)作用。Bim的下調(diào)對于腹膜間皮細(xì)胞的凋亡具有一定的拮抗作用，在Bim的調(diào)解下，腹膜間皮細(xì)胞受損進(jìn)入程序性凋亡，并啟動正常的修復(fù)機(jī)制，能夠有效抑制由于細(xì)胞壞死所釋放出來的大量炎癥因子，從有可能抑制腹膜炎癥的發(fā)生和蔓延，減少了腹膜變性和纖維化的幾率。提升了對腹膜的保護(hù)作用，至于川芎嗪和Bim下調(diào)的具體機(jī)制和作用機(jī)理，還需要進(jìn)一步采取研究證實(shí)。綜上所述，川芎嗪能夠促進(jìn)高糖和脂多糖致大鼠腹膜間皮細(xì)胞Bim表達(dá)下調(diào)，有減輕腹膜慢性炎癥。

參考文獻(xiàn)

[1] 伍軍，陽曉等.腹膜透析與血液透析：哪種透析治療方式具有更好的生存率？[J].中華腎臟病雜志，2008，24（12）

[2]陽 曉，葉任高等.川芎嗪對大鼠腹膜超濾功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志2000；20（9）

[3]劉杰，闞丹，劉立思. IKK/IκB/NF-κB信號通路阻斷及臨床應(yīng)用[J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2008（23）