RSP全自動(dòng)加樣器改造后一次性加樣針的選擇及加樣過程的優(yōu)化

李永珍　甄志軍

【摘要】 目的 評(píng)估帝肯RSP150全自動(dòng)加樣儀上針系統(tǒng)改造后使用1000、200、20μl三種不同容量規(guī)格的一次性加樣針，在不同工作模式下對(duì)Anti-HCV酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的影響。方法 利用萬分之一的分析天平采用重量法對(duì)3種規(guī)格加樣針，在不同模式下的加樣情況進(jìn)行校驗(yàn)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行精密度對(duì)比分析。結(jié)果 20、200μl兩種一次性加樣針在單吸單分模式下，RSP 8根針測(cè)試蒸餾水10 mg（10p1）的CV<3%，均通過精密度試驗(yàn)測(cè)試；1000μl單吸單分模式和200與1000μl一吸多分模式的CV>3.0%，8根針精密度都沒有通過測(cè)試。結(jié)論 應(yīng)用全自動(dòng)加樣儀進(jìn)行微量加樣時(shí)，應(yīng)選用滿足微量樣本移取精度需要的一次性加樣針，并采用合適的加樣模式，避免因使用不當(dāng)容量規(guī)格的一次性加樣針而導(dǎo)致血液檢測(cè)質(zhì)量事故的發(fā)生。

【關(guān)鍵詞】Tip；全自動(dòng)加樣儀；ELISA

【中圖分類號(hào)】R466 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2015）02-0105-02

我站在2010前，先后共采購了兩套瑞士帝肯RSP150型加樣儀，為了滿足衛(wèi)生部對(duì)于加樣系統(tǒng)的要求，同時(shí)也為了節(jié)約成本，我站聯(lián)系TECAN公司對(duì)我站的RSP加樣儀進(jìn)行了上針系統(tǒng)的升級(jí)改造，因?yàn)槿詣?dòng)加樣儀的加樣精度與選用不同容量規(guī)格的一次性加樣針以及加樣程序密切相關(guān)，特別是對(duì)抗-HCV酶免檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，因其加樣量只有10μl，樣本的加樣準(zhǔn)確性對(duì)其最終檢測(cè)結(jié)果影響頗大[1]。針對(duì)上述情況，筆者對(duì)Anti-HCV檢測(cè)試劑使用不同規(guī)格的加樣針進(jìn)行了加樣效果的評(píng)估，選擇最適合的一次性加樣針以及最佳加樣方式，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

RSP150全自動(dòng)加樣儀，Metlter AL104分析天平.儀器序列號(hào)為1231441134，最小刻度為0.1mg，Tecan LOGIC軟件（版本為2.52 均為瑞士TECAN公司產(chǎn)品；蒸餾水（本中心血站檢驗(yàn)科自制，密度為1.000）。

1.2 環(huán)境條件 溫度20～25℃，濕度50%～80%。

1.3 測(cè)試方法

在RSP工作臺(tái)面上固定設(shè)置好分析天平，調(diào)整分析天平的底座使其平衡：在程序菜單中設(shè)定好分析天平的加樣位置以及單吸單分的10mg（約10μ1）加樣程序和一吸多分的10mg（約10μ1）加樣程序，打開分析天平，選擇不同規(guī)格的測(cè)試針，分別運(yùn)行兩種加樣程序.測(cè)試從加樣通道l開始，共8個(gè)通道，每個(gè)通道都對(duì)不同規(guī)格的加樣針循環(huán)測(cè)試15次，記錄分析天平的稱量數(shù)據(jù)，求出平均值和變異系數(shù)。

1.4 測(cè)試標(biāo)準(zhǔn) RSP全自動(dòng)加樣儀加液10mg（約10μ1） 的CV<3%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS V13.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，以全自動(dòng)加樣儀使用20μl一次性加樣針的單吸單分模式下的結(jié)果為對(duì)照組，其他各組檢測(cè)結(jié)果分別與對(duì)照組結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

按照1.3的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)后，具體結(jié)果見表1。

3 討論

全自動(dòng)加樣儀是血站檢驗(yàn)科最為重要的檢驗(yàn)設(shè)備[2]，它的應(yīng)用，解決了血站在大量標(biāo)本加樣和數(shù)據(jù)傳輸中的問題，使加樣操作過程標(biāo)準(zhǔn)化，減少了人為誤差，提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確度和特異性，實(shí)現(xiàn)了加樣過程的可追溯性，有效的保證了血液檢測(cè)質(zhì)量。但是，使用永久加樣針的全自動(dòng)加樣儀不可避免的會(huì)導(dǎo)致陽性標(biāo)本拖帶現(xiàn)象[3，4]，因此，衛(wèi)生部在《血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范》中規(guī)定血液標(biāo)本如需分樣完成多項(xiàng)目檢測(cè)需避免分樣或加樣過程中樣品被污染或稀釋[5]。

在RSP全自動(dòng)加樣儀更換為一次性加樣針后，選擇什么規(guī)格的一次性加樣針，就成為保證血液檢測(cè)質(zhì)量的重中之重。每種規(guī)格的加樣針均有其最佳分配范圍和相應(yīng)的分配誤差，在應(yīng)用全自動(dòng)加樣儀時(shí)，就需要根據(jù)各檢測(cè)項(xiàng)目樣本加樣量選用合適容量規(guī)格的一次性加樣以求最佳加樣精度，在血站的實(shí)際工作中，由于RSP全自動(dòng)加樣儀如更換使用不同容量規(guī)格一次性加樣針時(shí)，都需對(duì)儀器和操控軟件的加樣參數(shù)重新進(jìn)行調(diào)整設(shè)置，為了避免更換不同一次性加樣針后反復(fù)調(diào)整設(shè)置的麻煩，有些血站就直接采用1000μL容量規(guī)格的一次性加樣針用于上述所有酶免檢測(cè)項(xiàng)目的樣本分樣或加樣操作。但是我們認(rèn)為，這樣做是有很大的風(fēng)險(xiǎn)的，尤其是對(duì)于HCV實(shí)驗(yàn)，因抗-HCV酶免檢測(cè)的樣本加樣量為微量10μL，在更換加樣針中，所受影響最大，因此，我站在對(duì)RSP全自動(dòng)加樣儀上針系統(tǒng)改造后，重點(diǎn)對(duì)不同規(guī)格一次性加樣針對(duì)Anti-HCV的微量樣本分配結(jié)果的影響進(jìn)行評(píng)估。

由表1可知，使用20、200、1000μL一次性加樣針進(jìn)行10μL加樣單吸單分模式檢測(cè)，20、200μL一次性加樣針分配試劑實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果CV<3%，且各通道P>0.05；精密度無差異，表明選用20、200μL規(guī)格加樣針加樣準(zhǔn)確度符合實(shí)驗(yàn)要求。但1000μL一次性加樣針分配試劑實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果孔間CV均>3%，各通道的分配結(jié)果與20μL加樣針分配結(jié)果差異較大。這就表明1000μL規(guī)格一次性加樣針后在移取10μL微量樣本時(shí)加樣精度難以保證，導(dǎo)致加樣時(shí)各孔間精密度變化極大，影響酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)正確結(jié)果。同樣，在使用200、1000μL一次性加樣針進(jìn)行10μL加樣一吸多分模式檢測(cè)時(shí)，200、1000μL一次性加樣針一吸多分實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與20μL一次性加樣針單吸單分實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果比較，CV均>3%，各通道的分配結(jié)果與20μL加樣針分配結(jié)果差異較大（P<0.05）；精密度有明顯差異。這同樣表明200、1000μL規(guī)格一次性加樣針后在一吸多分模式下移取10μL微量樣本時(shí)加樣精度難以保證，會(huì)導(dǎo)致加樣時(shí)各孔間精密度變化增大，影響酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)正確結(jié)果。

根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并參考我站采購耗材的實(shí)際情況，我科在應(yīng)用升級(jí)改造后的全自動(dòng)加樣儀進(jìn)行抗-HCV酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)加樣時(shí)，堅(jiān)持使用200μL一次性加樣針采用單吸單分的模式對(duì)Anti-HCV進(jìn)行加樣，雖然這樣做，會(huì)增加加樣針的消耗，延長(zhǎng)加樣工作時(shí)間，但是，我們認(rèn)為，只有這樣，才能滿足10μL微量樣本移取的精度要求，保證檢驗(yàn)質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國國家計(jì)量檢定規(guī)程（JJG 464—2006）

[2] 李榮，龐麗麗，杜新風(fēng).全自動(dòng)加樣儀的應(yīng)用[J].中國醫(yī)藥指南，2011.9（20）：171-172.

[3] 段友斌，寸偉，裘俊海，等.全自動(dòng)加樣系統(tǒng)抗-HIV陽性樣本拖帶現(xiàn)象對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響及其解決方案[J].中國輸血雜志，2007.20（5）：385.

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[5] 中華人民共和國衛(wèi)生部，血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范[S].2006.