益生菌對潰瘍性結腸炎小鼠TNF—α表達的影響

耶緒龍　宦欣　于慶功

【摘要】 目的 探討益生菌對潰瘍性結腸炎（UC）小鼠結腸黏膜腫瘤壞死因子-α表達的影響及可能作用機制。方法 隨機將20只雄性BALB/C小鼠分為實驗組與對照組各10只。兩組小鼠均給予100mg/Kg的三硝基苯磺酸乙醇（TNBS）溶液灌腸誘導潰瘍性結腸炎。隨后分別給予空灌胃針，對照組行生理鹽水灌胃0.3ml/次，2 次/日。實驗組行益生菌菌液0.6×106CFU/ml灌胃，觀察兩組小鼠的體重、糞便性狀及隱血。1周后行結腸組織病理學評分；ELISA方法檢測TNF-α表達。結果 TNBS灌腸后2組小鼠均不同程度出現腹瀉、粘液便、血便等癥狀。實驗組疾病活動指數為（3.02±0.72）；組織學損傷評分為（2.87±2.01）；結腸組織TNF-α的表達情況為（18.57±3.63）pg/ml；低于對照組（4.35±0.36）；（4.03±1.28）；（22.25±2.06）pg/ml（P<0.05）。結論 益生菌對急性UC有治療作用，其機制可能與益生菌能抑制TNF-α的表達有關。

【關鍵詞】潰瘍性結腸炎；益生菌；腫瘤壞死因子-α

【中圖分類號】R574.62 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）02-0090-02

潰瘍性結腸炎（Ulcerative Colitis，UC）是一種慢性非特異性炎癥，病變呈彌漫性，其主要在黏膜和黏膜下層累計。近年UC的發病率逐年上升。有統計其發病率在西方國家可高達10～15/10萬，患病率已超過200/10萬[1]。有研究表明腸道內菌群的改變在UC發病中起重要作用。益生菌可能在調節腸道黏膜免疫和恢復腸上皮屏障功能上起到重要作用。

1、材料與方法

1.1一般材料： 健康20只雄性BALB/C小鼠，6-8 周齡，體重18.0±2.0g。飼養小鼠1周左右后，隨機分為實驗組與對照組各5只。

1.2方法：2組小鼠按照100mg/Kg體重的TNBS灌腸誘導結腸炎造模方法[2]：灌腸后分別給予空灌胃針。對照組小鼠進行生理鹽水灌胃0.3ml/次，2 次/日。實驗組給予益生菌菌液0.6×106CFU/ml灌胃。觀察2組小鼠體質量改變和糞便性狀，采用糞便隱血試劑盒檢測糞便隱血，評估小鼠疾病活動指數=（體質量下降分數+糞便性狀分數+便血分數）/3[3]。灌腸1周后處死小鼠，采用HE染色后按黏膜潰瘍程度、上皮細胞增生程度、炎性細胞浸潤程度、隱窩萎縮和壞死程度每項（0-2分）進行組織學損傷評分。距肛門4cm處取0.5cm長結腸組織2塊，低溫PBS溶液沖洗，組織勻漿并離心，取上清液用ELISA法檢測結腸組織TNF-α表達。

1.3 統計學處理 數據結果以均數±標準差表示，計量資料進行方差齊性檢驗后，各組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），經SPSS13.0統計軟件處理，以P<0.05為差異有統計學意義。

2、結果

2.1 2組小鼠TNBS灌腸后均出現體質量降低、排黏液稀便數量增多，糞便隱血陽性等。實驗組疾病活動指數（3.02±0.72）低于對照組疾病活動指數（4.35±0.36）（P<0.05）。

2.2 結腸組織病理學結果顯示2組小鼠結腸上皮有不同程度損傷，細胞壞死，腺體破壞，黏膜下均可見炎性細胞浸潤。實驗組組織學評分：（2.87±2.01）明顯低于對照組（4.03±1.28）（P<0.05）。

2.3 通過ELISA方法檢測小鼠結腸組織中TNF-α的濃度。結果顯示實驗組為（18.57±3.63）pg/ml明顯低于對照組（22.25±2.06）pg/ml（P<0.05）。

3、討論

益生菌在腸道內黏膜的能量代謝、組織再生修復和腸道內免疫平衡過程中起重要作用， 腸道內腸黏膜所需能量的約60%以上來源于益生菌的氧化與吸收。有研究表明， 益生菌能通過改善UC腸黏膜的通透性使其恢復正常，同時抑制NF-κB的表達。Lührs等[4]證實， 用一種叫酪酸鹽的益生菌灌腸治療UC患者， 其臨床癥狀可改善， 腸黏膜中NF-κB的表達也下調。有實驗證實：腸道內益生菌可能是直接阻斷TNF-α的過度表達， 進而消除腸道內炎癥，并且可以促進腸上皮組織的再生和修復，可對潰瘍性結腸炎達到治療效果。

本實驗結果顯示：用益生菌治療TNBS誘導的UC小鼠時，實驗組結腸黏膜中TNF-α的表達低于對照組。可見益生菌能通過某種機制有效地抑制TNF-α的表達，進而減輕腸道的炎癥反應，緩解UC的臨床癥狀，起到治療UC的作用。

參考文獻

[1] Jiang XL， CUi HF. An analysis of 10218 ulcerative colitis cases in China.World J Gastroenterol. 2002， 8（1）：158-161.

[2]Mane J， Loren V， Pedrosa E， et al. Lactobacillus fermentum CECT 5716 prevents and reverts intestinal damage on TNBS-induced colitis in mice.Inflamm Bowel Dis， 2009，15： 1155-1163.

[3]Peran L， Camuesco D， Comalada M， et al. Preventative effects of a probiotic， Lactobacillus salivarius ssp. salivarius， in the TNBS model of rat colitis.World J Gastroenterol， 2005，11：5185-5192.

[4] Lührs H，Gerke T，Müller JG，et al.Butyrate inhibits NF-kappaB activation in lamina propriamacrophages of patients with ulcerative colitis. Scand J Gastroenterol， 2002，37：458-466.