分析頭孢唑林鈉中高分子雜質的檢查法

孫翠玲

【摘要】目的：建立凝膠色譜法測定頭孢唑林鈉的聚合物的方法。方法：采用葡聚糖凝膠SephadexG-10柱（16mm×33cm），流動相：A：0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0），B：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液。流速為1.0mol/min；檢測波長為254nm，進樣量為200uL。結果：頭孢唑林鈉在6.696～29.54mg/mL范圍內，濃度與聚合物的峰面積呈良好線性關系（r=0.9986），可精確對高分子雜質峰進行定量。結論：該方法簡便，準確，重現性好。

【關鍵詞】頭孢唑林鈉；高分子雜質；凝膠色譜法

【中圖分類號】R927 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）02-0024-01

頭孢唑林鈉是由頭孢菌素分解得來，其具有很強的抗菌性，而且使用分為比較廣。在臨床中主要應用于治療敏感細菌所致的中耳炎、支氣管炎、耳鼻喉等各種細菌性感染，具有較強的抗菌活性。但是其對于金葡菌的抗菌活性較低，一般這類型的藥物其物理性狀通常為白色或者是灰白色結晶性粉末，具有無臭，味苦的特點。頭孢唑林鈉很容易溶解于水中，10%的水溶液pH值在4.5-6之間。其水溶液具有不穩定性，在室內溫度為正常值時，只能保存24小時，如果放入冰箱中冷藏保存，則可以保存5天。如果在冷藏的過程中發現有結晶析出，則可以用溫水進行溫熱，使其溶解，然后在進行使用。這樣的冷藏方式會使得藥物的效價降低，一般都會降低10%。

所謂是藥三份毒，每種藥物對于特定的人群都會產生一定的不良反應。但是頭孢唑林鈉出現不良反應的概率則相對較低，這在要去臨床應用中比較少見。一般其所產生的不良反應包括：①靜脈注射時，產生血栓性靜脈炎的概率較低，肌肉疼痛程度也相對較輕；②出現藥疹的概率通常在1.1%左右，而且嗜酸粒細胞增高的發生率為1.7%，偶爾會出現藥物熱的現象；③某些特定病人會出現暫時性血清氨基轉移酶或者是堿性磷酸酶升高的現象，但是這種現象出現的概率比較低；④腎功能不全或者是腎功能衰退患者在大量使用該類藥物后，會出現腦病反應，但是在一定藥量下，腦病反應出現的幾率相對比較低；⑤偶爾會出現白念珠菌二重感染。

頭孢唑林鈉為第一代頭孢菌素，在臨床上廣泛應用。有關物質是藥物質量控制的重要項目，與其他合成藥物類似，頭孢菌素有關物質的引入形式包括：在合成過程中引入（由起始原料、中間體引入，副反應引入）；在制劑生產以及保存過程中降解產生（水解、聚合，異構）等。需要注意的是，部分有關物質即可能是在合成反應過程中引入，也可能是在保存中降解產生，還有可能在體內分解產生。β—內酰胺抗生素中的高分子聚合物是引發β—內酰胺抗生素速發型過敏原，故研究高分子雜質是抗生素藥物分析的重點之一。

1儀器和試藥

BP9300-B高分子雜質分析儀（254nm紫外檢測器，北京匯捷通新技術有限公司）；D100B數顯定時蠕動泵（上海青浦滬西儀器廠）。頭孢唑林（批號：0621-0703，含量99.3%，中國藥品生物制品檢定所）。

2方法與結果

2.1色譜條件

用葡聚糖凝膠G-10（40-120）為填充劑；玻璃柱內徑1.5cm；床體積60ml；流動相A為0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉2.19g和磷酸二氫鈉0.54g，加水1000ml溶解，調節pH至7.0）；流動相B為0.01%十二烷基硫酸鈉溶液；流速為1ml/min；檢測波長為254nm；進樣量200μL。

2.2溶液配制

2.2.1對照品溶液的配制

取頭孢唑林對照品25mg，精密稱定，置250ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2供試品溶液的配制

取本品500mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻（臨用配制）。

2.3線性范圍

取同一批樣品，分別稱取不同量配制成不同濃度的供試液，進樣200uL測定聚合物的峰面積。以頭孢唑林鈉高分子聚合物的峰面積為縱坐標，濃度（mg/mL）為橫坐標，求得回歸方程：Y=0.188548281X-0.106049981，r=0.9986。結果供試液濃度在6.696～29.54mg/mL范圍內對聚合物的峰面積呈良好線性關系。

2.4影響色譜行為的因素的考察

2.4.1流動相A的pH值。頭孢唑林鈉供試液分別以pH6.0，pH7.0，pH8.0三種磷酸鹽緩沖液洗脫時，聚合物的分離情況以pH7.0時較好。

2.4.2流動相A中磷酸酸鹽濃度。分別以0.05mol/L，0.1mol/L，0.2mol/L三種濃度的pH7.0磷酸鹽緩沖液為流動相洗脫時，聚合物的分離情況以0.1mol/L濃度時較好。

2.5樣品測定

取供試品約0.2g，精密稱定，置10mL容量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，立即取200μL注入色譜儀，以流動相A為流動相進行測定，記錄色譜圖；另取對照品溶液200μL注入色譜儀，以流動相B為流動相進行測定，記錄色譜圖，按外標法計算，測定結果6批樣品（070602、070603、070605，070931、070935、070936，）聚合物含量分別為0.002%、0.012%、0.017%，0.008%、0.010%、0.036%。

3討論和結論

3.1在臨床中，頭孢唑林鈉類抗菌藥物被廣泛應用，對于細菌有較強的抵抗和消滅作用。但是其也會出現一定的不良反應，而且頭孢唑林鈉還具有一定的副作用，主要的副作用表現在：①頭孢唑林鈉毒性較低，對造血系統、肝、腎毒性小；②肌肉注射的局部有輕度疼痛。一般會出現過敏性皮疹、要熱、惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀；③與青霉素同時使用時，很容易出現交叉過敏反應；④頭孢唑林鈉不適用于頭孢菌素過敏者及有青霉素過敏性休克或者是即刻反應史者。在應用頭孢唑林鈉抗生素時，要注意其不可以與氨基甙類抗生素混合同時注射，防止藥效的降低。應用在肌肉注射的粉針劑中會含有一定量的利多卡因，含有這種物質的粉針劑不適宜用于靜脈注射。尤其要注意的是在使用頭孢唑林鈉之前一定要進行皮試，這是為了檢驗是否存在過敏體質，從而降低使用的危險。

頭孢唑林鈉之所以會出現一系列的不良反應和帶有副作用，主要原因在于藥物反應。而頭孢唑林鈉等抗生素所致速發型過敏反應主要是與藥物中存在的高分子雜質有關。而高分子雜質按其來源途徑主要可以分為外源性雜質和內源性雜質兩種。其中屬于外源性雜質的物質為蛋白、多肽、多糖類等雜質，這些雜質主要來源于發酵工藝。而內源性雜質主要來源于生產過程，在貯存的過程中也會產生一部分雜質，甚至是在使用不當的時候也會出現雜質。

在頭孢唑林鈉中的高分子雜質類型與青霉素一樣，可以分為只與母核有關的N型聚合反應和側鏈參與反應的L型聚合反應兩種類型，頭孢唑林鈉的反應機理與青霉素反應機理相似，在溶液狀態下，頭孢唑林鈉反應速度與溶液的酸堿度有著密切的關系，堿性條件下，更容易生成高分子雜質。高分子雜質的種類和數量與生產工藝密切相關，完善生產工藝有助于保障藥品的生產質量。以β—內酰胺類抗生素來說，在特定條件下，β—內酰胺類抗生素可以締合形成表觀分子量較大的締合物，締合物在SephadexG-l0凝膠色譜系統中的色譜行為和高分子雜質一樣，都在Kav=0處，表現為單一的色譜峰。

3.2高分子雜質的控制方法。一般來說頭孢唑林鈉中的高分子雜質的分離分析方法主要有反相高效液相色譜，凝膠色譜和離子交換色譜等。在這幾種分離方法中，以分子量差異為根據進行分離的凝膠色譜是一種較為簡便，易操作的分離方法。

雖然很多的高分子雜質具有不同的結構，但是其在生物學上都有著共同的特性。一般都會用相同的方法來控制高分子雜質的總量。如果在頭孢唑林鈉抗生素藥物中有某個雜質與高分子雜質之間有著明確的關聯性，那么就可以將這種雜質視為“信號雜質”，可以通過控制這種信號雜質的總量來進行高分子雜質總量的控制。采用自身對照外標法以頭孢唑林對照品為對照，測定其在特定條件下締合時的峰響應指標，再改變色譜條件，測定供試品中的高分子雜質峰響應指標。方法簡便、快速，且自身對照外標法不需專門制備標準品，又可同外標法一樣精確對高分子雜質峰進行定量，結果直觀。

3.3對兩個廠家6個批號的產品進行高分子雜質測定，用自身對照外標法進行定量，其含量均在0.002%～0.036%范圍。

參考文獻

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