不同劑量的環磷酰胺誘導小鼠卵巢功能衰退程度的差異

陳云 郭榮

【摘要】目的比較不同劑量的環磷酰胺誘導小鼠卵巢功能衰退的差異，提供適宜的卵巢功能衰退動物實驗模型模型。方法8～10周雌性BALB/C小鼠腹腔注射不同劑量的環磷酰胺，觀察一般情況、動情周期和各級卵泡數量變化。以未注射環磷酰胺的小鼠為對照。結果各模型組與正常組相比動情周期延長（P<0.05），其中90mg/kg組與正常組比較性周期延長更加明顯、無規律（P<0.01）。與正常組相比，各模型組小鼠均出現不同程度的精神萎靡，活動減少，個別小鼠出現易激惹，毛發無光澤，其中90mg/kg組小鼠與正常組相比在造模后3天內體重下降（P<0.05）。各模型組與正常組相比始基卵泡數量明顯減少（P<0.05）。結論一次性腹腔注射環磷酰胺可以不同程度的誘導小鼠卵巢功能衰退，其中一次性注射環磷酰胺90mg/kg引起卵巢功能衰退的程度最大，在高存活率的基礎上能更好的形成卵巢功能衰退動物實驗模型。

【關鍵詞】環磷酰胺；小鼠；卵巢功能衰退；動物模型

【中圖分類號】R155【文獻標識碼】B【文章編號】1005-0019（2015）01-0013-01

環磷酰胺（CTX）為氮芥類雙功能烷化劑，是臨床上常用的抗腫瘤藥物，CTX在提高腫瘤患者生存率的同時，也嚴重影響女性患者卵巢功能，有研究[1]指出環磷酰胺具有高危性性腺毒性作用，可導致女性患者出現卵巢早衰，影響生育能力及日常生活[2]。賴寶玲[3]隨訪了化療后6～120個月（平均24個月）的乳腺癌、淋巴瘤、骨髓移植患者140例，對其卵巢功能進行回顧性分析，在化療過程中/后，85.7%患者曾出現閉經或月經不規則，78.6%患者曾出現過至少一組更年期癥狀，化療后平均24個月，仍有55%患者閉經，25%患者月經不規則，65.7%患者存在至少一組更年期癥狀。化療藥物雖然提高了患者生存率，但對卵巢功能的影響也大大降低了患者的生活質量。如何在化療的同時保護卵巢功能是急需解決的問題。本實驗采用不同劑量的環磷酰胺誘導小鼠卵巢功能衰退，為深入研究卵巢功能衰竭的發病機制和治療方法提供可靠的動物實驗模型。

1材料與方法

1.1藥物注射用環磷酰胺（BaxteroncologyGmbH生產，批號：2K683A），注射時用生理鹽水配置成50mg/kg、70mg/kg、90mg/kg。

1.2動物與分組8～10周齡雌性BALB/C小鼠適應性喂養一周后，觀察動情周期一周，選用32只有正常動情周期的小鼠，隨機分為正常對照組、50mg/kg、70mg/kg、90mg/kg，除正常組外均采用一次性腹腔注射環磷酰胺0.3ml。2周后處死小鼠。

1.3觀察指標

1.3.1觀察小鼠動情周期變化每天早上9：00取小鼠陰道脫落細胞涂片，于光學顯微鏡下觀察動情周期變化。

1.3.2觀察小鼠一般情況變化觀察小鼠精神、活動情況及體重變化情況。

1.3.3觀察小鼠卵巢組織形態學變化取卵巢組織常溫下4%多聚甲醛固定，每隔5張進行切片、HE染色，于光學顯微鏡下計算各組卵泡數量。

1.4統計分析使用SPSS17.0統計軟件進行統計學分析，采用單因素方差分析檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1不同劑量的環磷酰胺對小鼠動情周期的影響。與正常組小鼠比較性周期延長、紊亂（P<0.05），其中90mg/kg組與正常組比較性周期延長更加明顯、無規律（P<0.01），主要表現為動情間期延長，個別表現為持續的動情期（2～3天）。（見表1）

3討論

雌性小鼠性成熟后的動情周期一般為4～5天，分為動情間期、動情前期、動情期及動情后期[4]。陰道上皮細胞的周期性變化反映了卵巢性激素周期性分泌情況，本研究中各模型組與正常組相比動情周期延長，其中90mg/kg組與正常組比較性周期紊亂更加明顯、無規律，表現為動情間期延長或持續的動情期，動情周期紊亂說明了卵巢性激素分泌功能受到損害，這是卵巢功能衰退模型建立成功的證明[5]。通過各級卵泡計數結果發現，各模型組與正常組相比始基卵泡數量減少約一半，90mg/kg組各級卵泡數目均減少，表明原始卵泡被大量殺傷。卵巢中原始卵泡的數量是一定的，當原始卵泡池中的卵泡因募集、凋亡而不斷減少最終耗竭時，卵巢就不會排卵，在人類就會喪失生育力[6]。。通過觀察一般情況發現，各模型組小鼠均出現不同程度的精神萎靡，活動減少，個別小鼠出現易激惹，毛發無光澤，其中90mg/kg組小鼠與正常組相比在造模后3天內體重下降。綜上所述可發現，小鼠出現精神萎靡、皮毛光澤度下降、動情周期紊亂，原始卵泡數量的明顯下降，與文獻報道一致[7]，說明一次性腹腔注射環磷酰胺可以不同程度的誘導小鼠卵巢功能衰退，其中一次性注射環磷酰胺90mg/kg引起卵巢功能衰退的程度最大，在高存活率的基礎上能更好的形成卵巢功能衰退動物實驗模型。

參考文獻

[1]羅璐等.環磷酰胺對成年大鼠卵巢的損傷以及GnRHR在卵巢的表達.[J]南方醫科大學學報，2007；27（11）：1714-1717.

[2]楊岫巖，朱旬.重視在風濕病治療中卵巢的功能.[J]中華風濕病學雜志，2003，7（2）：65-67.

[3]賴寶玲.化療對卵巢功能的影響.中山大學2007屆碩士學位論文.

[4]翟青新，招霞等.小鼠的生殖特性及陰栓.[J]實驗動物科學，2009，26（2）：62-67.

[5]李珂，補腎健脾調肝法治療卵巢早衰及對POF模型大鼠血清INHB、VEGF的影響.廣州中醫藥大學2003屆博士學位論文.

[6]李倩.PIK3p110delta催化亞基在小鼠卵巢卵泡生長中的功能研究.南京醫科大學2010屆博士學位論文.