姜黃素對腸癌細胞的作用效果

肖衡

摘要：目的：研究姜黃素對人類結腸癌Lovo細胞的作用效果。方法：使用不同濃度（0 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L） 的姜黃素對2014年8月——2014年12月由中南大學提供結腸癌細胞株Lovo進行24 h的處理，并且用Real-time PCR來檢測姜黃素對人類結腸癌細胞株血管內皮生長因子VEGF mRNA表達的作用效果，采用Western blot 來檢測姜黃素對結腸癌細胞的VEGF蛋白表達的變化。結果：人類結腸癌Lovo細胞在經過姜黃素治療24小時后，5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 的姜黃素的VEGF mRNA和蛋白表達都出現了顯著降低，這和對照組相比具有明顯的統計學差異（P < 0.05）。結論：姜黃素能夠降低人類結腸癌Lovo細胞VEGF的表達，并且對姜黃素的劑量有一定的依賴性，這是姜黃素抑制結腸癌Lovo細胞增殖和表達的有效方式之一。

關鍵詞：姜黃素；腸癌細胞；作用

姜黃素是從姜科姜黃屬植物提取出來的一種天然活性成分，其具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化等多種藥理作用，其還有較低的毒性，具有非常良好的臨床應用潛力。姜黃素具有一定的抗腫瘤效應，這就引起了國內外的廣泛關注。結腸癌是一種非常常見的惡性腫瘤，盡管近年來許多患者經過手術、化療、放療、免疫和其他綜合治療以后，治療效果取得了一定的進展，但是其死亡率仍非常高。本次實驗是采用2014年8月- 2014年2月由中南大學提供結腸癌Lovo細胞作為研究對象，并且對不同濃度的姜黃素對結腸癌Lovo細胞VEGF表達的影響進行觀察，從多角度研究姜黃素對結腸癌細胞的作用效果，這樣就能夠為結腸癌臨床治療提供一些理論基礎結腸癌，現報道如下。

1.資料和方法

1.1一般資料

人類結腸癌Lovo細胞是由中南大學腫瘤研究所提取出來的，實驗中的姜黃素是從Sigma公司購買的，區3.684mg的姜黃素充分溶解在1毫升的DMSO溶液當中，得到最終的濃度為10 mmol/ L母液，在細胞培養基稀釋到使用時所需的濃度。Trizol、逆轉錄試劑盒都是從大連寶生物公司提供的，引物也是由大連寶生物公司進行合成的。蛋白質提取液和ECL 發光試劑盒是從Pierce公司購買的，兔抗人VEGF多克隆抗體和羊抗兔二抗lgG都是從Santa Cruz公司購買的。

1.2細胞培養和處理

人類結腸癌Lovo細胞接種在含有10%的胎牛血清1640培養基當中，并且在37℃和5%的二氧化碳以及飽和濕度培養箱中進行培養，隔天需要更換液體，保持細胞對數生長期長，用0.25%胰蛋白酶進行消化傳代。在對數期Lovo細胞進行分組，對照組是使用姜黃素0 μmol/L，加入等量DMSO，實驗組為含有姜黃素5 μmol/L，10 μmol/L，20 μmol/L，40 μmol/L 組，在37℃和5%二氧化碳的環境下進行處理后，在飽和濕度中進行細胞培養24h。

1.3 Real-time PCR

采用Trizo1試劑一步法來提取細胞總RNA，利用紫外分光光度計來測定細胞的總RNA濃度，計算OD260/280，RNA的比值在1.8 ～ 2.0的標本能夠進行反轉錄。總RNA需要按照說明書合成cDNA逆轉錄產品cDNA是用于Real-time-PCR進行擴增。VEGF的引物：5 '端：5' 端：5' -GGGGGATCCGCCTCCGAA-ACCATGAACTT -3' 及3' 端：5' -CCCGAATTCTCCTGGTGAGAGA-TCTGGTT-3'，變性、退火溫度分別為94℃和72℃，并且需要進行40個循環，并且根據樣例CT值來計算樣品中模板的數量。

1.4統計方法

使用SPSS13.0軟件對數據進行分析，并且利用方差分析和t進行檢驗，P < 0.05時具有明顯的統計學差異性。

2.結果

2.1不同劑量姜黃素在人類結腸癌Lovo細胞表達的影響

分別使用Primer 3.0 軟件設計VEGF和GAPDHmRNA的引物， 利用Real-time PCR來檢測VEGF mRNA的表達效果，如表1所示。姜黃素5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 組與對照組進行比較，VEGF mRNA的表達出現了顯著降低，具有明顯的統計學差異性（P < 0.05）。

2.2不同劑量姜黃素在人類結腸癌Lovo細胞VEGF蛋白表達的影響

不同劑量姜黃素對Lovo細胞進行處理，并且需要收集細胞的總蛋白質，利用Western Blot 對VEGF 蛋白的表達效果進行檢測，姜黃素5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 組與對照組進行比較，VEGF mRNA的表達出現了顯著降低，具有明顯的統計學差異性（P < 0.05），并且對姜黃素的劑量具有明顯的依賴性。

3.討論

血管內皮生長因子VEGF的表達會隨著腫瘤的增殖、侵襲和轉移而發生顯著增加。VEGF信號還和淋巴管、淋巴結腫瘤細胞入侵和遠端轉移存在密切的關系。VEGF表達水平和結腸直腸癌組織學分化程度、浸潤深度以及TNM分期存在一定的相關性。臨床觀察發現結直腸癌患者術前血清VEGF水平與結直腸癌的入侵和轉移也存在密切的關系。研究人員利用同源重組將結直腸癌細胞系結腸VEGF -A進行敲除以后，發現當細胞VEGF信號消失以后，抑制細胞生長就會比較明顯，而且細胞化療藥物5 -氟尿嘧啶的敏感性也會不斷增強，而且在臨床上通過阻斷VEGF受體來對結腸癌的細胞治療效果也是有限的。

通過目前的研究可以發現，姜黃素可以對消化系腫瘤起到很好的抑制作用，主要的藥理活性就是能夠削減核轉錄因子的活動，這樣就能夠誘導細胞周期停滯和細胞凋亡，還能夠抑制血管生成。在人類結腸癌HCT116細胞中，姜黃素能夠有效抑制結腸癌細胞群體的生長和入侵。不同濃度的姜黃素對人類結腸癌細胞的作用效果也是不一樣的。通過對多個結腸癌細胞株進行分析，研究已經證實，姜黃素能夠有效降低VEGF的表達。

4.總結

VEGF是進行癌癥藥物治療的新靶點，景觀姜黃素作用以后，結腸癌Lovo細胞的VEGF水平也會出現下降，姜黃素能夠有效降低VEGF的表達效果，而且還能夠抑制VEGF促進腫瘤血管生成的作用，這樣就能夠進一步抑制結腸癌的擴散和轉移。本研究對于姜黃素的臨床應用提供一些新的理論依據，其對于姜黃素應用于結腸癌治療中具有很大的指導意義。

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