T細胞亞群及炎性因子對乙型病毒肝炎的診斷價值及相關性分析

馬鵬

[摘 要] 目的：探究T細胞亞群、炎性因子IL-32、IL-6等對乙型病毒肝炎的診斷及相關性。方法：隨機選取我院收治的乙型肝炎患者138例為觀察組，以同期健康體檢人員32例為對照組，對所有受試者進行T細胞亞群比例、IL-32和IL-6水平的檢測，并對肝功能相關指標進行檢測，探究其相關性。結果：乙肝患者的CD4+T細胞比例降低，CD8+T細胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，各組與對照組相比，差異具有統計學意義（P<0.05）；乙型肝炎患者的IL-32和IL-6水平高于對照組，且急性乙肝組患者與輕度、中度和重度乙型肝炎組各組之間具有統計學差異（P<0.05）。而HBV DNA（+）組與HBV DNA（-）組在T細胞亞群比例和IL-32、IL-6水平方面不具有統計學差異（P>0.05）。IL-32和IL-6水平與ALT、TB均呈正相關，與AlB水平呈負相關。結論：CD4+/CD8+比值及細胞因子IL-32和IL-6水平的變化直接影響乙型肝炎的發病，對乙型肝炎的診斷有一定指導意義；IL-32和IL-6水平與病毒復制無關，僅與機體免疫異常有關且與肝臟功能指標呈現一定相關性。

[關鍵詞] T細胞亞群；IL-32；IL-6；乙型病毒肝炎

中圖分類號：R575.1 文獻標識碼： B 文章編號：2095-5200（2015）05-034-04

[Abstract] Objective： To investigate T cell subsets， IL-32， IL-6 for the diagnosis and correlation of hepatitis B. Methods： 138 cases of hepatitis B patients in our hospital and 32 cases of healthy volunteers in the same period were randomly selected for the study， the former of which were regarded as the observation group and the latter were control group. T cell sub-population proportion， IL-32 and IL 6-level of all the subjects were observed， as well as the related indicators of liver function to explore the relevance. Results： For the patients with hepatitis B， the proportion of CD4 +T cells reduced ， CD8 +T cell ratio increased， and CD4 + / CD8 + ratio decreased in all groups compared with the control group， the difference of which statistically significant （P <0.05）； IL -32 and IL-6 levels of hepatitis B patients were higher than the control group， and there was a statistically significant difference （P <0.05） among the groups of patients with acute hepatitis， mild， moderate and severe hepatitis B group. The ratio of T cell subsets， IL-32，and IL-6 levels between the HBV HNA （+） group and HBV DNA （-） group were not statistically different （P> 0.05）. IL-32 and IL-6 levels were positively correlated with the level of ALT， TB，and negatively correlated with Alb level. Conclusions： CD4 + / CD8 + ratio and changes in cytokine IL-32 and IL-6 levels directly affect the incidence of hepatitis B， and are significant to the diagnosis of hepatitis B to some degree . IL-32 and IL-6 levels are independent of viral replication，and maybe be only related with immune abnormalities，which show some correlation with liver function indicators.

[Key words] T cell subsets； IL-32； IL-6； hepatitis B

乙型肝炎病毒（HBV）屬于嗜肝雙鏈DNA病毒，HBV并不會直接損害肝細胞，肝細胞損害及肝功能損害主要是由于細胞免疫在清除病毒過程中發揮作用而引起的 [1]。HBV引起的細胞免疫是體內一系列復雜的免疫應答過程，主要由T細胞介導，包括CD4+T和CD8+T細胞，正常情況下二者相互協調，比例維持正常水平，而CD4+/CD8+T細胞比值降低則是疾病嚴重和預后不良重要指標之一[2]。T細胞產生細胞因子具有廣泛生物學活性，具有影響細胞增殖，調節T細胞分化及調節其亞型比例功能，IL-32能通過多種途徑激活而促進炎性介質釋放[3]，IL-6通過信號傳導增強HBV活性，從而有助于HBV感染建立和發展[4]。現以本院收治138例乙型肝炎患者為研究對象，對T細胞亞群、IL-32、IL-6對乙型病毒肝炎診斷價值及相關性分析如下。

1 資料

1.1 一般資料

隨機選取我院2012年8月至2014年2月收治乙型肝炎患者138例為觀察組，男92例，女46例，年齡19～60歲，平均年齡（42.5±4.7）歲，均為漢族。其中急性乙型肝炎28例，慢性乙型肝炎110例，其中輕度40例，中度36例，重度34例。另外選取同期健康體檢人員32例為對照組，其中男21例，女11例，年齡20～54歲，平均年齡（37.4±4.2）歲，均為漢族，排除HBV感染和肝功能異常者。急性乙型肝炎患者組和輕度、中度和重度慢性乙型肝炎觀察組患者及對照組在性別、年齡等方面不具有統計學差異（P>0.05）。

另根據乙型肝炎患者外周血HBV病毒DNA是否為陽性，將138例乙型肝炎患者分為HBV DNA（+）組和HBV DNA（-）組，HBV DNA（+）組患者共91例，男61例，女30例，HBV DNA（-）組患者共47例，男31例，女16例，兩組患者與對照組患者在性別、年齡方面不具有統計學差異（P>0.05）。

1.2 病例標準

入選標準：（1）所有患者診斷均符合《病毒性肝炎防治方案》[5]診斷標準；（2）患者未接收過抗病毒和免疫調節治療；（3）患者在6個月內未接受保肝治療；（4）同意并簽署知情同意書。排除標準：（1）排除HAV、HCV、HDV和HEV感染；（2）排除脂肪肝、酒精性肝炎和自身免疫性肝炎等其他類型肝炎；（3）排除惡性腫瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病和其他感染性疾病。

2 方法

2.1 研究方法

以EDTA管抽取觀察組和對照組受試者空腹外周靜脈血10mL，檢測項目包括常規肝功能指標：HBV血清標志物，谷丙轉氨酶（ALT）、總膽紅素（TB）、白蛋白（ALB），HBV DNA和細胞因子IL-32、IL-6等。

2.2 檢測方法

采用流式細胞儀（購自美國BD公司）測定外周T淋巴細胞表面標志物，采用ELASA法檢測ALT、TB、ALB和IL-32、IL-6（試劑盒購自Groundwork Biotechnology），以酶標儀（購自BioTek Instruments，Inc）讀取吸光度值，所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

2.3 統計學方法

對采集到數據采用SPSS 19.0軟件進行統計學處理，計量數據以（x±s）表示，組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK檢驗，相關性分析采用直線相關分析，以P<0.05具有統計學意義。

3 結果

3.1 乙型肝炎組與對照組檢測結果對比

138例乙肝患者CD4+T細胞比例降低，CD8+T細胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，乙肝各組與對照組相比，差異具有統計學意義（P<0.05）。急性乙肝組患者與輕度、中度和重度乙型肝炎組患者CD4+T細胞比例，CD8+T細胞比例和CD4+/CD8+比值差異不具有統計學差異（P>0.05）。乙型肝炎患者IL-32和IL-6水平高于對照組，且急性肝炎組患者與輕度、中度和重度乙型肝炎組各組之間IL-32和IL-6水平具有統計學差異（P<0.05）。具體如表1。

3.2 HBV HNA（+）組與HBV DNA（-）組檢測結果對比

HBV HNA（+）組與HBV DNA（-）組T細胞亞群測定結果與細胞因子IL-32、IL-6檢測結果如表2。HBV HNA（+）組和HBV DNA（-）組患者CD4+T細胞比例降低，CD8+T細胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，且IL-32、IL-6水平均升高，與對照組相比，差異具有統計學意義（P<0.05）。而HBV HNA（+）組與HBV DNA（-）組在T細胞亞群比例和IL-32、IL-6水平方面不具有統計學差異（P>0.05）。

對血清IL-32和IL-6水平與肝功能各指標進行直線相關性分析表明，乙肝患者血清IL-32水平與ALT、TB水平正相關（r=0.56、r=0.72），與AlB負相關（r=-0.43）；血清IL-6水平與ALT、TB水平正相關（r=.66，r=0.44），與Alb負相關（r=-0.41）。

4 討論

人體感染HBV后病情和轉歸情況受到宿主和病毒兩方面影響，其中發揮重要作用是宿主免疫功能[6]。人體免疫功能主要由細胞免疫和體液免疫來實現，細胞免疫是以T細胞為主而發揮功能，因此研究外周血T細胞亞群及其比例變化能很好反映機體免疫功能變化[7]。細胞免疫除了T細胞亞群比例有關之外，T細胞是否能充分活化與細胞因子參與有關，因此細胞因子在免疫應答調節中也發揮重要作用。

外周T細胞中CD4+T細胞，主要為Th細胞，CD4+T減少不僅使殺傷細胞激活，同時導致Th1/Th2細胞比例失衡，細胞因子紊亂而使病毒長期存在[8]。CD8+T細胞主要包括殺傷性T細胞（Tc細胞）和抑制性T細胞（Ts細胞），Tc細胞在HBV清除過程起主要作用，這也是HBV感染后引起肝細胞損傷主要原因；Ts細胞靶細胞為CD4+T細胞，可起到抑制免疫應答作用，因此CD8+T功能障礙將導致機體持續被病毒感染[9]。正常情況下，CD4+T和CD8+細胞保持一定比例，維持機體免疫功能。感染HBV時，肝臟發生炎癥，從而導致單核巨嗜細胞產生IL-6，IL-6水平增高誘導毒性T細胞增殖分化，產生肝臟炎癥[10]。研究發現，IL-32具有調節NK細胞功能，促進炎性介質釋放等功能，同時IL-6可由IL-32誘導產生[11]。

該研究結果發現，乙型肝炎患者CD4+T細胞比例降低，CD8+T細胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，與對照組相比差異具有統計學意義（P<0.05），這可能與外周血Ts細胞增多有關，導致CD8+T細胞增多，同時抑制CD4+Th細胞免疫應答，因此乙肝患者不能有效清除HBV。不同程度乙型肝炎患者，HBV DNA（+）與HBV DNA（-）患者之間CD4+/CD8+比值之間不具有統計學差異（P>0.05）。說明HBV DNA復制不影響T細胞亞群比例，對乙肝患者細胞免疫功能影響較小，這與滿昌軍等[12]研究結果一致。

數據顯示，乙型肝炎患者IL-32和IL-6水平高于對照組，且急性肝炎組患者與輕度、中度和重度乙型肝炎組各組之間在IL-32和IL-6水平具有統計學差異（P<0.05）。由于不同程度乙肝患者免疫功能不同，分泌IL-32和IL-6能力也不同，這正是造成不同程度乙肝患者外周血內IL-32和IL-6水平差異較大原因所在。重度乙型肝炎患者免疫功能紊亂，導致IL-32不能正常調節NK細胞功能，也不能誘導單核細胞向巨噬細胞分化，同時IL-32促進其他炎性介質釋放[13]；而乙型肝炎患者存在大量單核巨噬細胞浸潤，引起肝臟炎癥，誘發單核巨嗜細胞長生大量IL-6[14-15]，故IL-32和IL-6水平均升高較多。HBV DNA（+）與HBV DNA（-）患者之間IL-32、IL-6水平差異不具有統計學意義（P>0.05），說明IL-32和IL-6水平與HBV病毒復制無關，也說明HBV并不直接引起感染細胞病變。

由于HBV對肝細胞及肝功能造成損傷，血清中細胞因子水平與肝功能各項目呈現一定相關性。IL-32對IL-6、TNF-ɑ釋放有促進作用，介導免疫損傷，因此會加重肝臟炎癥反應，IL-32和IL-6水平與ALT、TB均呈正相關，與Alb水平呈負相關。HBV感染人體后對肝臟功能造成損傷主要與T細胞亞群及其細胞因子引起免疫應答有關。T細胞亞群CD4+T細胞比例，CD4+/CD8+比值及細胞因子IL-32和IL-6水平變化直接影響乙型肝炎發病，甚至IL-32和IL-6水平影響乙型肝炎發病程度，對乙型肝炎診斷有一定指導意義。值得注意是IL-32和IL-6水平與病毒復制無關，僅與機體免疫異常有關；且與肝臟功能有關指標呈現一定相關性。

參 考 文 獻

[1] 王煜，閆躍武，王海燕，等.乙肝病毒大蛋白在慢性乙型肝炎中檢測臨床意義[J].寧夏醫科大學學報，2012， 34（10）：1005.

[2] Raziorrouh B，Schraut W，Gerlach T，et al.The immunoregulatory role of CD244 in chronic hepatitis B infection and its inhibitory potential on virus specific CD8+ T-cell function[J].Hepatology，2010，52（6）：1934.

[3] Abu-Mouch S，Fireman Z，Jarchovsky J，et al. Vitamin D supplementation improves sustained virologic response in chronic hepatitis C（genotype 1）-na ve patients[J]. World J Gastroenterol，2011（25）：17-19.

[4] Harada K，Shimoda S，Sato Y，et al. Periductal interleukin- 17 production In association with biliary innate immunity contributes to thepathogenesis of cholangiopathy in primary biliary cirrhosis[J]. Clin Exp Immuno1，2009，157（2）： 261-270.

[5] Kang KY，Kim HO，Kwtk SK，et al. Impact of interleukin-21 in the pathogenesis of primary Sjogren's syndrome： increased serum levels of interleukin-21 and its expression in the labial salivary glands[J]. Arthritis Res Ther，2011，13（5） ： 179.

[6] 謝琳琳，李文玉. 拉米夫定和阿德福韋酯聯用與恩替卡韋單藥初治慢性乙型肝炎療效對比 [J].現代儀器與醫療，2014，20（5）：91-92.

[7] Kitagishi Y，Kobayashi M，Yamshina Y， et al.Elucidating the regulation of T cell subsets（review）[J].Int j Mol Med，2012，30（6）：1255.

[8] Bemark M， Holmqvist J， Abrahamsson J， et al. Translational Mini-Review Series on B cell subsets in disease. Reconstitution after haematopoietic cell transplantation-revelation of B cell developmental pathways and linege phenotypes [J].Clin Exp Immunol， 2012， 167（1）： 15-16.

[9] 朱禮堯，周建，朱農，等. HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA病毒載量與ALT水平相關性探討 [J]. 現代儀器與醫療，2013，19（2）：45-47.

[10] Rasool ST， Tang H， Wu J， et al. Increased level of IL-32 during human immunodeficiency virus infection suppresses HIV replication[J]. Immunol lett， 2008， 117（2）：161-167.

[11] 王曉輝，楊堯，雷學忠，等.慢性乙型肝炎患者病情分度與外周血T淋巴細胞亞群關系[J].四川醫藥，2005，26：1087-1088.

[12] 滿昌軍，董香玉.外周血T細胞亞群、IL-32、IL-6水平在乙型肝炎患者表達及相關性分析[J].中國實驗診斷學，2014，18（1）：62-64.

[13] 左維澤，許春梅，沈蘭超.乙型肝炎患者血清白細胞介素-32、白細胞介素-6水平變化及臨床意義[J].臨床肝膽病雜志，2011，27（4）：408-410.

[14] Xiang WQ， Feng WF， Ke W， et al. Hepatis B virus protein stimulates IL-6 expression in hepatocytes via MyD88-dependent pathway[J].J Hepatol， 2011， 54（1）： 26-27.

[15] EI Husseiny NM，Fahmy HM，Mohamed WA，et al. Relationship between vitamin D and IL-23，IL-17 and macrophage chemoattractant protein-1 as markers of fibrosis in hepatitis C virus Egyptian[J]. World J Hepatol，2012，4（8）：242-247.