白毒鵝膏菌復(fù)合煙草毒素粗品對花斑皮蠹的毒效

趙瑩等

摘要：為開發(fā)環(huán)境友好型生物殺蟲劑，找到一種生物防治花斑皮蠹的方法，利用白毒鵝膏菌和煙草的毒素粗品對花斑皮蠹幼蟲進(jìn)行誘殺試驗。結(jié)果表明：白毒鵝膏菌復(fù)合煙草的毒素粗品對花斑皮蠹幼蟲有一定的誘殺作用，并表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)。施藥后5 d，煙草提取物對花斑皮蠹幼蟲的平均引誘率達(dá)40%以上，效果明顯；在3種大型真菌毒素粗品中，白毒鵝膏菌毒素粗品對花斑皮蠹幼蟲的毒殺效果最明顯；白毒鵝膏菌復(fù)合煙草毒素粗品的誘殺效果隨著白毒鵝膏菌毒素濃度的增大而越來越明顯，且二者具有協(xié)同作用。當(dāng)濃度達(dá)到12%時，花斑皮蠹幼蟲的誘殺率為7925%，效果顯著。說明作為一種生物源復(fù)合殺蟲劑的白毒鵝膏菌復(fù)合煙草的毒素粗品防治花斑皮蠹幼蟲效果顯著。

關(guān)鍵詞：白毒鵝膏菌；煙草；花斑皮蠹；毒素粗品；生物防治

中圖分類號： S433.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2015）09-0175-02

花斑皮蠹（Trogoderma variabile）屬鞘翅目（Coleoptera）皮蠹科（Dermestidae）昆蟲，是世界性的儲藏物害蟲，主要危害糧食、織物、電纜、家居裝潢材料及動植物標(biāo)本，少數(shù)傳播動物炭疽桿菌和微粒子病等[1]。其幼蟲破壞性大，活動隱蔽，耐寒、耐熱、耐餓，繁殖力強(qiáng)，是斑皮蠹屬在國內(nèi)分布最廣、危害最嚴(yán)重的種類；加之其隱藏于蛀成“隧道”的貯藏物中難以發(fā)現(xiàn)，也給其防治帶來了不小的難題。目前，對花斑皮蠹的防治主要使用化學(xué)藥物，由于殺蟲劑的抗性及生態(tài)環(huán)境和食品安全問題，使大型真菌源農(nóng)藥的研究開發(fā)具有重要的意義。白毒鵝膏菌為常見毒菌，但它對花斑皮蠹是否有活性鮮為人知，與植物源毒素粗品復(fù)合使用殺蟲國內(nèi)外尚無報道。因此，本研究用上述材料研究其對花斑皮蠹幼蟲的活性，為大型真菌復(fù)合植物源誘殺劑的研發(fā)和花斑皮蠹的防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試蟲體花斑皮蠹幼蟲捕捉于遼寧省沈陽市木材加工場，由中國科學(xué)院動物研究所王劍鋒博士鑒定。以木料、麥麩為飼料飼養(yǎng)，溫度26～28 ℃，相對濕度70%～80%，自然光照。試驗選取3～4齡幼蟲。

1.1.2供試菌種白毒鵝膏菌、白黃蓋鵝膏菌、紅網(wǎng)牛肝菌，采自遼寧省本溪市五女山、沈陽市棋盤山風(fēng)景區(qū)、鞍山市千山風(fēng)景區(qū)。參照相關(guān)資料[2-3]，經(jīng)遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所劉俊杰研究員鑒定。

1.1.3供試植物馬尾松（Pinus massoniana Lamb.）、魚腥草（Houttuynia cordata Thunb.）、茉莉花[Jasminum sambac （L.） Ait]、煙草（Nicotiana tabacum L.）、側(cè)柏[Platy cladusorentalis （L.） Franco]，購自國大藥房中藥店，分別將上述植物材料洗凈，放入烘箱中于50 ℃烘干，用電動粉碎機(jī)粉碎，過40目篩后密封備用。

1.1.4試驗儀器與設(shè)備FA-2004精密電子天平，LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌器，PRX-205B智能人工氣候箱，SW-CJ-2F（D）型醫(yī)用凈化工作臺，JY99-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，GL-161X箱式高速冷凍離心機(jī)，BS-1EH數(shù)顯振蕩培養(yǎng)箱，F(xiàn)160電動粉碎機(jī)，R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，DHG-9146A鼓風(fēng)干燥箱。

1.2方法

1.2.1毒素粗品的制備將采集的3種大型真菌的子實體分別進(jìn)行固體菌種擴(kuò)繁，接種于PDA液體培養(yǎng)基中，于26 ℃液體發(fā)酵搖床上培養(yǎng)7 d，再進(jìn)行超聲波細(xì)胞破碎、離心，取上清液，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濃縮液經(jīng)40 ℃恒溫干燥，得毒素粗品[4-6]。毒素粗品分別溶解于不同體積的無離子水中，用超聲波破碎，再3 000 r/min離心制成濃度為2%、5%、8%、10%、12%的上清液。

1.2.2植物提取物的制備用電子天平分別稱取植物干粉各30 g，加入無水乙醇120 mL，25 ℃下120 r/min振蕩培養(yǎng)24 h，過濾，無水乙醇定容至100 mL，所得即為濃度為 0.3 g/mL的提取液（1 mL含有0.3 g植物干粉粗提物）。

1.2.3植物提取物對花斑皮蠹幼蟲的引誘性篩選引誘試驗采用濾紙藥膜法[7]。將直徑為9 cm的培養(yǎng)皿洗凈、烘干，把直徑為9 cm的圓形濾紙對半剪開，其中一半在0.3 g/mL植物提取液中浸漬5 min，另一半在無水乙醇中浸漬5 min。待乙醇自然揮發(fā)后，用透明膠帶將對應(yīng)的兩半處理過的濾紙粘在一起，用固體膠將粘貼后的濾紙固定在培養(yǎng)皿底部，接入花斑皮蠢4齡幼蟲20頭/皿，使其自然分散，放入木料、麥麩正常飼養(yǎng)，蓋上皿蓋，放入26～28 ℃、相對濕度70%～80%、無光照的培養(yǎng)箱中。設(shè)A1（側(cè)柏）、A2（煙草）、A3（馬尾松）、A4（魚腥草）、A5（茉莉花）組；另取直徑為9 cm的培養(yǎng)皿，其中只放入木料、麥麩作為空白對照（A0）組；接蟲后每12 h檢查1次，2 d后每24 h檢查1次兩半濾紙上的幼蟲分布情況。

1.2.4真菌毒素粗品對花斑皮蠹幼蟲的毒性篩選取10%上清液與木料、麥麩按1 ∶5的比例混合分布于直徑為 9 cm 的培養(yǎng)皿內(nèi)，接入花斑皮蠢4齡幼蟲20頭/皿，使其自然分散，蓋上皿蓋，試驗條件同“1.2.3”節(jié)。設(shè)B1（白毒鵝膏菌）、B2（白黃蓋鵝膏菌）、B3（紅網(wǎng)牛肝菌）組；另取直徑為 9 cm的培養(yǎng)皿，其中只放入木料、麥麩作為空白對照（B0）組；觀察花斑皮蠹幼蟲生長情況，5 d后記錄死亡數(shù)。

1.2.5不同濃度的白毒鵝膏菌復(fù)合煙草毒素粗品誘殺效應(yīng)的測定將篩選出的0.3 g/mL煙草提取液分別與2%、5%、8%、10%、12%白毒鵝膏菌上清液混合，與木料、麥麩混合，并分別取20頭花斑皮蠹幼蟲放入直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，試驗條件同“1.2.3”節(jié)。設(shè)C1（2%）、C2（5%）、C3（8%）、C4（10%）、C5（12%）組；另取直徑為9 cm的培養(yǎng)皿，其中只放入木料、麥麩作為空白對照（C0）組；觀察花斑皮蠹幼蟲存活情況，5 d后記錄誘殺數(shù)。

1.2.6數(shù)據(jù)處理 （1）引誘率計算。引誘率=（對照邊蟲數(shù)-處理邊蟲數(shù)）/對照邊蟲數(shù)×100%；平均引誘率=同一引誘材料各次檢查時的引誘率之和/檢查次數(shù)。（2）死亡率計算。死亡率=死亡蟲數(shù)/總蟲數(shù)×100%；平均死亡率=同一觸殺材料各次檢查時的死亡率之和/檢查次數(shù)；校正死亡率=（處理組死亡率-對照組死亡率）/（1-對照組死亡率）×100%。（3）誘殺率計算。誘殺率=（引誘處理邊死亡蟲數(shù)/總蟲數(shù)）×100%。（4）統(tǒng)計分析。采用DPS 2000軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行LSD分析。

2結(jié)果與分析

2.1植物提取物粗品對花斑皮蠹幼蟲的引誘性篩選

由表1可知，5種植物的提取液對花斑皮蠢幼蟲均具有一定的引誘作用，處理3 d后引誘效果均有明顯的下降趨勢。其中，煙草的提取液對幼蟲的引誘作用最強(qiáng)，煙草提取液處理后3 d內(nèi)引誘率一直保持在75%以上，4 d內(nèi)保持在40%以上。魚腥草提取液在處理后2 d內(nèi)引誘率也在80%以上，但隨后急劇下降。茉莉花提取液在處理后2 d內(nèi)引誘率在70%以上，但3 d后迅速降到30%以下。側(cè)柏和馬尾松的提取液表現(xiàn)出的引誘活性較差，除馬尾松提取液在12 h的引誘率達(dá)到70%以上外，其余均在65%以下。表15種植物粗品毒效試驗中花斑皮蠹幼蟲的引誘情況

2.2真菌毒素粗品對花斑皮蠹幼蟲的毒性篩選

由表2可知，在大型真菌毒素粗品的毒性篩選試驗中，白毒鵝膏菌毒素粗品對花斑皮蠹幼蟲有明顯的致死效應(yīng)。此外，白黃蓋鵝膏菌和紅網(wǎng)牛肝菌也表現(xiàn)出輕微的毒性，但效率較低，致死效應(yīng)重復(fù)性較差，因此筆者只對致死效應(yīng)最好的白毒鵝膏菌進(jìn)行研究。

2.3白毒鵝膏菌煙草復(fù)合粗品對花斑皮蠹幼蟲誘殺效應(yīng)的測定

由表3可知，在不同濃度的白毒鵝膏菌復(fù)合煙草毒素粗品對花斑皮蠹幼蟲的毒效試驗中，當(dāng)煙草粗品濃度一定時，隨著白毒鵝膏菌毒素粗品濃度的增大，對花斑皮囊幼蟲的誘殺效果越來越明顯，當(dāng)濃度達(dá)到12%時，平均誘殺率達(dá)到了79.25%，效果顯著。

3結(jié)論與討論

大型真菌殺蟲劑和植物源殺蟲劑由于其獨特的優(yōu)勢，在害蟲防治上越來越受關(guān)注，其誘殺效率高，對人畜無害，無藥物殘留，不污染環(huán)境。用植物提取物將花斑皮蠹引誘到有毒蕈粗品的場所，使花斑皮蠹接觸或食用致死，能達(dá)到以菌治蟲的目的[8-9]。有研究表明，白毒鵝膏菌毒素粗品對花斑皮蠹幼蟲的毒殺效果明顯，與0.3 g/mL煙草毒素粗品聯(lián)合使用且濃度達(dá)到12%時，平均誘殺率達(dá)到79.25%，是一種誘殺效果較理想的生物源殺蟲劑，具有廣闊的前景和利用空間，探索最佳誘殺蟲模式是降低生產(chǎn)成本、保障農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要措施。

今后還應(yīng)該深入研究不同使用方法和不同發(fā)育階段的生物活性等方面，為大型真菌復(fù)合植物源誘殺劑的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]鄧天福，王霞.兩種防蛀劑對花斑皮蠹的熏蒸活性研究[J]. 河南科技學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2013，6（6）：18-20.

[2]卯曉嵐.中國大型真菌[M]. 鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000：1-17.

[3]圖力古爾，包海鷹，李玉. 中國毒蘑菇名錄[J]. 菌物學(xué)報，2014（3）：517-548.

[4]張揚(yáng)，趙陽，范克勝，等. 紅絨蓋牛肝菌發(fā)酵培養(yǎng)基篩選及液體培養(yǎng)條件[J]. 林業(yè)科技開發(fā)，2013，27（4）：111-114.

[5]陳琳，孟美嬌，楊紹斌，等. 豹斑毒鵝膏菌液體培養(yǎng)及產(chǎn)物毒性的初步研究[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（10）：93-96.

[6]汪夢筱，王偉，汪維云.羊肚菌液體深層發(fā)酵工藝優(yōu)化研究[J]. 包裝與食品機(jī)械，2014（1）：15-18.

[7]毛寧，丁珊珊，余宗鐘.裸蓋菇L-001菌株液體培養(yǎng)及其產(chǎn)毒素初探[J]. 福建師范大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2009，25（6）：77-81.

[8]王霞，范腕腕，鄧天福.四種植物精油對花斑皮蠹的熏蒸作用[J]. 河南科技學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2013，3（3）：75-78.

[9]鄧天福，姜雪曉.大蒜生姜提取物對花斑皮蠹幼蟲的驅(qū)避作用[J]. 河南科技學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2011，39（1）：47-50.王豐，郭道友，范余娟. 毒蠅鵝膏菌有效成分的提取工藝及抗菌特性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（9）：177-179.