38kD-lgG和TSPOT-TB聯合檢測在結核病診斷中的應用

徐建輝　何燕武　陳海明

38kD-lgG和TSPOT-TB聯合檢測在結核病診斷中的應用

徐建輝何燕武陳海明

目的 探討抗結核抗體（38kD-lgG）和結核感染T細胞斑點試驗（TSPOT-TB）聯合檢測在結核病臨床診斷中的價值。方法 采用上述兩種方法單項或聯合檢測疑結核患者114例，其中結核患者72例，非結核患者42例，對檢測結果進行比較分析。結果 TSPOT-TB及38kD-IgG試驗單項檢測結核菌陽性（菌陽）結核患者的敏感性分別為90.63%和78.13%，二者差異有統計學意義（P＜0.05），聯合檢測敏感性為96.88%。TSPOT-TB及38kD-IgG試驗單項檢測結核菌陰性（菌陰）結核患者的敏感性分別為80.00%和77.50%，聯合檢測敏感性為95.00%，聯合檢測與兩種單項檢測比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。對照組中，TSPOT-TB及38kD-IgG試驗特異性分別為90.48%和78.57%，聯合檢測特異性為66.67%。TSPOT-TB試驗對3種肺外結核的檢測敏感性顯著高于38kD-IgG試驗（P＜0.05）。結論 對于菌陽患者，TSPOT-TB試驗敏感性較高。對于菌陰患者，聯合檢測敏感性較高。38kD-lgG和TSPOT-TB聯合檢測可提高結核病的診斷敏感性。

結核病 抗結核抗體 結核感染T細胞斑點試驗

結核病是一種慢性傳染病，近幾年環境污染日益嚴重，結核病發病率逐年升高［1］。我國是結核病高發國家［2］，由于病因復雜，確診相對較為困難。臨床調查顯示，結核感染T細胞斑點試驗（TSPOT-TB）較抗結核抗體（38kD-lgG）試驗具有更高的特異性和敏感性［3，4］。本文通過對結核病患者及健康對照組進行38kD-lgG檢測和TSPOT-TB斑點試驗，探討兩種方法單項或聯合檢測在結核病診斷中的應用價值。

1　臨床資料

1.1一般資料 選擇本院2012年1月至2014年1月收治的114例疑患結核患者，行涂片檢測、胸部X線或CT、結核菌素試驗及實驗室生化檢查，檢測過程參照中華醫學會結核病學分會頒布的《肺結核診斷和治療指南》［5］。最終確診非結核病患者42例，其中男27例，女15例；平均年齡（45.3±17.4）歲。確診結核病患者72例，男47例，女25例；平均年齡（49.3±20.5）歲。其中，結核性胸膜炎患者27例、結核性腹膜炎患者20例、結核性腦膜炎患者25例。結核菌陰性（菌陰）患者40例，結核菌陽性（菌陽）患者32例。排除合并有心腦血管、造血系統及肝、腎等內臟器官嚴重疾病患者，無免疫抑制劑用藥史及放化療治療史。患者及其家屬均已簽署知情同意書。

1.2方法 （1）結核抗體檢查：真空采血管采集患者靜脈血約5ml，迅速混勻，在最短時間內用玻璃棒剝離纖維蛋白，保證血標本無渾濁沉淀，以免吸入而導致反應膜孔堵塞。利用斑點免疫金滲濾試驗（DIGFA）原理測定檢測血清標本中的38kD-lgG（試劑盒由濰坊市康華生物技術有限公司提供）。（2）結核感染T細胞斑點試驗：真空采血管采集患者靜脈血約5ml，密度梯度離心分離出外周血單個核細胞，保證血標本無渾濁沉淀，采用上海復星科技有限公司提供的TSPOTTB試劑盒對結核菌致敏T細胞進行檢測。隨后顯微鏡觀察并記錄陰性斑點的數量，同時檢測并記錄結合特異性抗原致敏的效應T淋巴細胞的數量。

1.3統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.138kD-lgG和TSPOT-TB對菌陽和菌陰結核患者檢測結果比較 對菌陽結核患者，TSPOT-TB方法的檢測陽性率顯著高于38kD-lgG（χ2=4.217，P＜0.05）。聯合檢測陽性率顯著高于38kD-lgG（χ2=5.113，P＜0.05），而與TSPOT-TB比較，差異無統計學意義（χ2=1.247，P＞0.05）。對菌陰結核患者，聯合檢測陽性率顯著高于單項檢測（χ2=4.927、3.816，P＜0.05）。對照組中，38kD-lgG和TSPOT-TB的特異性分別為78.57%和90.48%，TSPOT-TB的特異性顯著高于38kD-lgG（χ2=3.912，P＜0.05）。見表1。

表1　38kD-lgG和TSPOT-TB對菌陽結核和菌陰結核患者檢測結果比較（n）

2.238kD-lgG和TSPOT-TB對3種肺外結核的檢測結果比較 對結核性腦膜炎患者，TSPOT-TB的陽性率顯著高于38kD-lgG（χ2=3.858，P＜0.05），聯合檢測陽性率顯著高于單項檢測（χ2=6.179、4.029，P＜0.05）。對結核性腹膜炎患者，TSPOT-TB的陽性率顯著高于38kD-lgG（χ2=4.227，P＜0.05），聯合檢測陽性率顯著高于單項檢測（χ2=5.445、3.997，P＜0.05）。對結核性胸膜炎患者，TSPOT-TB的陽性率顯著高于38kD-lgG（χ2=4.568，P＜0.05），聯合檢測陽性率顯著高于38kD-lgG（χ2=6.002，P＜0.05）。見表2。

表2　38kD-lgG和TSPOT-TB對結核性腦膜炎、結核性腹膜炎和結核性胸膜炎檢測結果比較（n）

3　討論

目前全國關于結核病的治療原則是“早期、聯合、適量、規律和全程”，早期診斷對于控制疾病的發展與傳播具有十分重要的作用。38kD-lgG試驗能夠通過檢測人體血液中的結核分枝桿菌抗體，判斷患者體內是否存在結核分枝桿菌［6，7］。本文結果顯示，38kD-lgG試驗對非結核組的檢測陽性率達21.43%，證實38kD-lgG試驗具有較高的交叉反應存在，會導致假陽性反應。TSPOT-TB試驗是利用酶聯免疫斑點法探測結核感染者的特異性T細胞診斷結核的一種新方法［8］，該法特異性好，靈敏度高，在結核病臨床診斷中的應用越來越廣泛。本文中TSPOT-TB試驗對菌陽患者和菌陰患者的檢測敏感性達90.63%和80.00%，對非結核組為9.52%，此結果接近國外文獻報道［9，10］。38kD-lgG試驗聯合TSPOT-TB試驗對菌陰患者的檢測敏感性達95.00%，原因可能是由于患者的免疫狀態不同，通過聯合檢測的互補作用提高了結核病患者的診斷率［11，12］。對25例結核性腦膜炎、20例結核性腹膜炎和27例結核性胸膜炎的檢測結果說明TSPOT-TB試驗對這3種肺外結核的檢測敏感性顯著高于38kD-lgG試驗。對結核性胸膜炎患者，TSPOT-TB試驗的檢測敏感性接近聯合檢測，說明TSPOT-TB試驗在結核性胸膜炎的診斷中具有較高的應用價值，而在結核性腦膜炎和結核性腹膜炎檢測中應優先采用聯合檢測法［13］。

1 Diel R，Loddenkemper R，Nienhaus A. Evidence-based comparison of commercial interferon-gamma release assays for detecting active TB： a metaanalysis. Chest，2010，137（4）： 952～968.

2 全國結核病流行病學抽樣調查技術指導組.第四次全國結核病流行病學抽樣調查報告.中華結核和呼吸雜志，2005，25（1）：3～7.

3 趙靜，蔣彩花，汪運山，等.抗結核抗體及結核感染 T 細胞斑點試驗在結核病診斷中的應用.中國防癆雜志，2011，31（1）：19～21.

4 王立紅，付秀華，張桂芝，等.結核感染T細胞斑點試驗在結核病診斷中的應用價值.國際檢驗醫學雜志，中國防癆雜志，2013，35（12）：992～996.

5 中華醫學會結核病學分會.肺結核診斷和治療指南.中華結核和呼吸雜志，2001，24（2）：70～74.

6 Wilkinson K A，Wilkinson R J，Pathan A，et al. Ex-vivo characterization of early secretory antigenic target 6-specific T cells at sites of active disease in pleural tuberculosis. Clin Infect Dis，2005，40（1）： 184～187.

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10 陶學芳，王建華.結核感染T細胞酶聯免疫斑點試驗在肺結核及肺外結核診斷中的價值.浙江預防醫學，2012，24（11）：4～7.

11 Meier T，Eulenbruch HP，Wrighton-Smith P，et al. Sensitivity of a new commercial enzyme-linked immunospot assay（TSPOT-TB）for diagnosis of tuberculosis in clinical practice . Eur J Clin Microbiol Infect Dis， 2005，24（8）： 529～536.

12 孫海柏，張立，劉佳慶，等.結核分枝桿菌T細胞斑點實驗在肺結核診斷中的應用.山東醫藥，2013，53（43）：75～77.

Objective To evaluate the application value of tuberculosis antibody and enzyme linked immune-spot assay used for Clinical diagnosis of tuberculosis. Methods The two methods were used individually and in combination respectively to 72 active tuberculosis patients and 42 non-tuberculosis in control group. Results For smear positive TB，the sensitivity of TSPOT-TB（90.63%）was significantly higher than that of 38kD-lgG test（78.13%）（P＜0.05），and was epual to the sensitivity of 96.88% of combined detection；for bacteriological negative TB，the sensitivity of combined detection（95%）was significantly higher than that of 85% and 77.50% by TSPOT-TB and 38kD-lgG（P＜0.05）；42 non-tuberculosis control，the sensitivity were 78.57% and 90.48% respectively，the sensitivity of combined detection was 66.67%；the detection sensitivity of extra pulmonary TB by TSPOT-TB were significantly higher than those of 38kD-lgG，and was equal to the sensitivity of combined detection. Conclusion TSPOT-TB test in smear positive patients and tuberculous pleurisy and meningitis in patients with higher sensitivity，in the non tuberculosis population specifi city is good；in the differential diagnosis of smear negative patients，38kD-lgG and TSPOT-TB test and application will improve the greater sensitivity.

Tuberculosis 38kD-lgG TSPOT-TB Diagnosis

315700 浙江省象山縣疾病預防控制中心檢驗科