Hippo信號轉導通路中Yes相關蛋白在乳腺癌組織中的表達及意義

呂香茹，張小蕓，孫 凱，張 煦

（1.蘭州大學，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅衛生職業學院，甘肅 蘭州 730000；3.西安交通大學，陜西 西安 710000）

Hippo信號轉導通路中Yes相關蛋白在乳腺癌組織中的表達及意義

呂香茹1，2，張小蕓1，孫 凱3，張 煦1

（1.蘭州大學，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅衛生職業學院，甘肅 蘭州 730000；3.西安交通大學，陜西 西安 710000）

目的 探討Hippo信號轉導通路中Yes相關蛋白（YAP）在乳腺癌組織中的表達及意義。方法 應用免疫組織化學方法檢測97例乳腺癌組織、32例癌旁正常乳腺組織中YAP的表達情況，分析其表達與乳腺癌臨床病理特征的關系。結果YAP在正常乳腺組織中的表達率明顯高于乳腺癌組織，兩者差異有顯著性（χ2=17.603，P=0.000）。乳腺癌組織中YAP的陽性表達與組織學分級、腫瘤大小和有無淋巴結轉移之間無明顯相關性（P＞0.05）。結論 Hippo/YAP信號轉導通路在乳腺癌的發生、發展中發揮著重要作用，可能為乳腺癌的早期發現與診療開辟新的途徑。

Hippo信號轉導通路；Yes相關蛋白；乳腺癌

國際癌癥研究機構公布的全球最新癌癥調查數據顯示，乳腺癌的發病率位列第二位（肺癌13.0%，乳腺癌11.9%，結直腸癌9.7%）。此調查覆蓋全球184個國家，其中140個國家中的乳腺癌是女性發病率最高的癌癥。與2008年的數據相比，2012年全球乳腺癌發病率增長20%以上，死亡率增長14%。在我國，1990—2010年，男性癌癥發病率總體呈下降趨勢，而女性癌癥發病率呈上升趨勢，這主要與乳腺癌等癌癥發病率顯著升高有關。僅2012年，我國就新增18.7萬例乳腺癌患者，因乳腺癌死亡的人數達4.8萬，全國共69.7萬人患乳腺癌。

目前研究表明，信號轉導通路異常導致的細胞增殖和凋亡間動態平衡的破壞與乳腺癌發生發展相關。應用免疫組織化學方法檢測相關通路效應因子的蛋白表達水平，并探討其與臨床病理資料間的關系，可以對乳腺癌的生物學行為進行及時有效的評估，為臨床診治提供可靠依據。

YAP（Yes-associated protein）即Yes相關蛋白，是一種連接蛋白和轉錄共激活因子，在正常機體細胞內發揮著信號轉導和基因轉錄調節的作用。YAP是經典的Hippo信號轉導通路的主要效應因子。

YAP在人類多種腫瘤細胞中都存在高表達，如在前列腺癌、胰腺癌、胃癌、結直腸癌、肝癌、食管癌組織中的表達水平均顯著高于正常組織。國內外均有研究報道YAP在乳腺癌組織中也存在高表達［1］，但亦有研究顯示，YAP在乳腺癌中的表達明顯下調甚至缺失［2］。所以，YAP是癌基因還是抑癌基因，身份還不是很明確。本實驗即探討YAP在乳腺癌組織中的表達及意義。

1 材料和方法

1.1 材料

收集張掖市人民醫院乳腺科2010—2013年乳腺癌行改良根治術患者的病理標本97例，患者術前均未接受放療和化療，全部為女性，年齡31～73歲，平均年齡52歲。組織學分級：Ⅰ級（高分化）12例，Ⅱ級（中分化）63例，Ⅲ級（低分化）22例。腫瘤直徑：＜2 cm 18例，2～5 cm 55例，＞5 cm24例。按有無腋窩淋巴結轉移分為：有轉移58例，無轉移39例。對照組為患者癌旁經病理確診為正常的乳腺組織標本32例。YAP兔抗人多克隆抗體、免疫組織化學SP試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2 方法

YAP檢測采用SP免疫組織化學方法。切片常規脫蠟和水化后，PBS漂洗3次，每次3 min；于濕盒內用3%過氧化氫溶液（A液）室溫孵育10 min，滴加5%～10%封閉用正常動物非免疫血清工作液（B液）。滴加一抗工作液，于37℃培養箱內孵育12 h，PBS漂洗3次，每次3 min，滴加生物素標記二抗工作液（C液）；滴加辣根過氧化物酶標記的鏈酶卵白素工作液，配制新鮮的DAB顯色劑。蘇木精對比染色細胞核，染色時間2 min。

1.3 結果判斷

根據細胞陽性率和染色程度進行半定量分析。（-）：無顯色反應；（+）：陽性細胞數＜25%，染色呈棕黃色；（++）：陽性細胞數占25%～50%，染色呈棕黃或棕色；（+++）：陽性細胞數＞50%，染色呈棕色或深棕色。細胞染色積分=A×B，按照記分分值可以分為：陰性表達或無表達（-），0～3分：陽性表達（+），4～8分：強陽性表達（++）。

1.4 統計學方法

所得數據采用SPSS 17.0軟件進行統計學處理，采用χ2檢驗對兩組YAP陽性表達率之間的差異進行比較，計算χ2值和P值，相關性分析采用Spearman等級相關性分析，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

YAP陽性染色主要為核漿表達，顯示為棕黃色或棕色顆粒沉著。97例乳腺癌組織中有39例為陽性表達，而在32例正常乳腺組織中陽性表達的有27例。YAP在正常乳腺組織中的陽性表達率明顯高于乳腺癌組織，兩者差異有顯著性（χ2=17.603，P=0.000），見表1、圖1。

表1 YAP在正常乳腺組織和乳腺癌組織中的表達（n）

圖1 乳腺癌組織中YAP呈陽性表達（SP×200）

乳腺癌組織中YAP的陽性表達與組織學分級、腫瘤大小和有無淋巴結轉移之間無明顯相關性（P＞0.05），見表2。

表2 乳腺癌組織中YAP的表達與臨床病理學指標間的關系

3 討論

Hippo信號轉導通路是由一系列蛋白激酶及轉錄共激活因子所組成的激酶鏈，通過細胞增生與凋亡之間的動態平衡調控組織器官大小及腫瘤發生發展。在正常生理狀態下，當組織細胞增生密度達到細胞會合程度時，該通路被激活，發生接觸抑制效應；當細胞密度降低時，這種接觸抑制效應即被解除，細胞增生明顯加快［3］。Hippo信號轉導通路中任何因子發生異常，都會打破細胞增生和凋亡之間的平衡，促進腫瘤發生發展。YAP是經典的Hippo信號轉導通路的主要效應因子。在YAP蛋白中存在多個結構域或特異氨基酸序列，通過這些結構域或氨基酸序列，YAP能與多種蛋白質相互作用并參與多條細胞內信號轉導通路。

2006年，國外研究首次發現YAP為癌基因，隨后在肝細胞癌中證實了這一結果，于是Hippo/YAP信號轉導通路與惡性腫瘤的關系逐漸引起人們的關注，研究領域涉及消化系統腫瘤、呼吸系統腫瘤、女性生殖系統腫瘤等。雖然多數研究認為，YAP作為癌基因促進腫瘤發生，但經本實驗研究驗證，YAP在乳腺癌組織中的表達明顯下調甚至缺失，因此，YAP作為癌基因的角色需要重新考慮。

乳腺癌作為女性最常見的惡性腫瘤之一，隨著早期檢測手段及綜合治療方案的實施，其死亡率近年來有所下降，但由于乳腺癌高度異質性及較高的抗藥性和易轉移復發的特點，使它仍為第二大威脅女性生命的惡性腫瘤。因此，尋找個性化的綜合治療方案及有效的、聯合的進展和預后判斷分子標志物是現今乳腺癌研究的重點。

Shyr-Ming等［4］研究顯示，YAP不能獨立作為乳腺癌的預后指標，但YAP缺失的乳腺癌細胞表現出更強的浸潤及轉移能力。說明YAP可與其他因子聯合作為預后指標。Hippo/YAP信號轉導通路在乳腺癌的發生、發展中發揮著重要作用，可能為乳腺癌的早期發現與診療開辟新的途徑。

［1］Xiao dan Wang，Li li Su，Qis hui Ou.Yes-associated Protein promotes tumour development in luminal epithelial derived breast cancer［J］.European Journal of Cancer，2012（48）：1227-1234.

［2］M Yuan，V Tomlinson，R Lara，et al.Yes-associated Protein（YAP）functions as a tumor suppressor in breast［J］.Cell Death and Differentiation，2008（15）：1752-1759.

［3］Bin Zhao，Qun-Ying Lei，Kun Liang Guan.The Hippo-YAP pathway：new connections between regulation of organ size and cancer［J］.Current Opinion in Cell Biology，2008（20）：638-646.

［4］Shyr-Ming Sheen-Chen，Chun-Ying Huang，Ching-Hua Tsai，et al. Yes-associated Protein Is Not an Independent Prognostic Marker in Breast Cancer［J］.Anticancer Research，2012（32）：3321-3326.

R737.9

A

1671-1246（2015）11-0152-02