兩種血糖儀與全自動血生化儀測量糖尿病大鼠血糖的比較

王　藝, 彭國慶, 江新泉, 董靈芝, 宋文剛, 張秋玲

（泰山醫(yī)學(xué)院1. 附屬醫(yī)院眼科, 2. 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院, 3. 公共衛(wèi)生學(xué)院,

4. 免疫研究所, 5. 實(shí)驗(yàn)動物中心, 泰安　271000）

兩種血糖儀與全自動血生化儀測量糖尿病大鼠血糖的比較

王藝1, 彭國慶2, 江新泉3, 董靈芝2, 宋文剛4, 張秋玲5

（泰山醫(yī)學(xué)院1. 附屬醫(yī)院眼科, 2. 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院, 3. 公共衛(wèi)生學(xué)院,

4. 免疫研究所, 5. 實(shí)驗(yàn)動物中心, 泰安271000）

目的比較兩種不同型號血糖儀與全自動生化分析儀檢測由鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的糖尿病大鼠血糖的差異。方法SD大鼠60只隨機(jī)分成空白對照組（12只）和 STZ造模組（48只），后者又分為3組（各16只），并在造模前3 d及造模后72 h、第4、8、12周分別用A、B兩種血糖儀及全自動生化分析儀測量各組大鼠空腹血糖（FBG）值。鑒定糖尿病大鼠造模成功率，進(jìn)而判定三種不同儀器的準(zhǔn)確性。結(jié)果對同時間同一采血部位同一抽血樣品血糖測量結(jié)果表明，A、B血糖儀，全自動生化分析儀測定值間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； A血糖儀測量值更接近于全自動生化分析儀（γ=1.00，P=0.000）。結(jié)論兩種血糖儀測量結(jié)果均是有效測量結(jié)果，A血糖儀測量值更近似全自動生化分析儀測量值。

糖尿病大鼠； 血糖儀； 全自動生化分析儀

糖尿病（DM）模型主要可分為化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)性模型、自發(fā)性遺傳性動物模型、胰腺部分切除模型和轉(zhuǎn)基因模型等4種［1］。化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)性模型相對其他三種模型而言，方法簡單、成模所需時間短、效果顯著、符合臨床發(fā)病機(jī)理。其中鏈脲佐菌素（STZ）能夠選擇性破壞胰島β細(xì)胞，對機(jī)體組織毒性相對較小，動物存活率高，一次性大劑量腹腔注射成模率高，是最為常用的糖尿病大鼠模型構(gòu)建方法。化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)性糖尿病大鼠模型尚未確定成模血糖執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，目前多以空腹血糖（FBG）＞11.1 mmol/L、16.7 mmol/L等作為參考。本實(shí)驗(yàn)采用給大鼠一次性大劑量（60 mg/kg） 腹腔注射STZ （2%檸檬酸緩沖液, pH=4.4）, 構(gòu)建大鼠T1DM模型，以研究兩種不同型號（A、B）血糖儀與全自動生化分析儀對STZ造模大鼠模型FBG測量值的差異。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物

7周齡清潔級雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量180～220 g，購自斯貝福（北京）實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司［SCXK（京）2011-0004］，適應(yīng)性飼養(yǎng)（室溫保持20～23℃, 相對濕度50%左右, 明暗周期12 h, 普通飲水與飲食）一周用于實(shí)驗(yàn)［SYXK（魯）2012-0005］。

1.2主要試劑、器材

鏈脲佐菌素（streptozotocin, STZ），Sigma公司生產(chǎn)，批號： WXBB2432V，干燥避光，4℃冰箱保存。血糖測定試劑盒（葡萄糖氧化酶法），購自上海橋杜生物科技有限公司。3K30高速冰凍離心機(jī),美國Sigma公司生產(chǎn)。小動物專用吸入麻醉機(jī)，美國Matrx品牌, VIP3000系列。pH值測定儀,Thermo奧立龍ORION3-STARPH/ORP測量儀。A血糖儀及試紙, 國產(chǎn)產(chǎn)品； B血糖儀及試紙, 進(jìn)口產(chǎn)品； 全自動生化分析儀, 日立全自動生化分析儀-7600。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)記及分組將60只SD大鼠分成2組，第一組設(shè)置為空白對照組，共12只，每籠6只； 第二組設(shè)置為糖尿病模型組，共48只，每籠6只。用苦味酸分別將其編號標(biāo)記。

1.3.2糖尿病大鼠模型建立對模型組大鼠行一次性腹腔注射60 mg/kg STZ（配制2%檸檬酸緩沖液溶解STZ粉劑，pH為4.4）0.6 mL，對照組予以等量檸檬酸鈉緩沖溶液，30 min內(nèi)完成注射。

1.3.3采血方法大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后（造模前3 d）內(nèi)眥靜脈采血, 另分別于造模后3 d、4周、8周和12周采血。大鼠空腹8～12 h，開啟吸入麻醉機(jī)，蒸發(fā)器定量為0.5%，將大鼠置于呼吸麻醉盒，氣體異氟烷濃度由4 L/min到2 L/min緩慢下調(diào)，蒸發(fā)器控制在1.5%～2%, 2 min后進(jìn)入麻醉狀態(tài)（四肢緊張度明顯減低，活動性下降，角膜反射遲鈍，皮膚痛覺消失，肌腱反射消失）。仰面固定大鼠，快速行心臟取血2 mL，其中0.5 mL置于已標(biāo)記的EDTA抗凝管，顛倒2～3次，混勻。1.5 mL置于已標(biāo)記的促凝管，抽血后棉棒蘸取碘伏在進(jìn)針處給予消毒。快速離心（3 000 r/min, 15 min, 4℃）分離上清，取上清液后置于-80 ℃低溫保存，低溫1 h內(nèi)葡萄糖氧化酶法測量大鼠血糖值。

1.3.4血糖測定分別用A、B血糖儀及全自動生化分析儀測量各組大鼠FBG值。

2　結(jié)果

2.1動物基本情況

正常大鼠活潑好動, 反應(yīng)敏捷，形體勻稱，毛發(fā)健康有光澤，糖尿病模型組大鼠可見明顯的多食、多飲、多尿、體質(zhì)量增長速度明顯降低的“三多一少”癥狀，消瘦癥狀逐漸明顯，體溫低，并且毛色漸枯、發(fā)黃、脫落, 舌質(zhì)和口唇呈紫暗，耳廓發(fā)白，部分大鼠出現(xiàn)大便稀溏，移動遲緩。

2.2血糖測定結(jié)果

不同時間點(diǎn)空白對照組血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。不同時間點(diǎn)糖尿病組血糖值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=696.656，P＜0.001）。糖尿病組同一時間點(diǎn)不同儀器測量的血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.817, P=0.165）（表1）。

A、B血糖儀，全自動生化分析儀測定值間均有相關(guān)意義，而A血糖儀測量值更接近于全自動生化分析儀（表2）。生化儀與B血糖儀的相關(guān)系數(shù)γ=1.00（P=0.000），A血糖儀與B血糖儀的相關(guān)系數(shù)γ=1.000（P=0.000）。

表 1　不同時間點(diǎn)三種儀器測量兩組大鼠血糖值分析　　　　　　　　　　　　　　　　mmol/L

表 2　三種測量儀器應(yīng)用于糖尿病大鼠測量值Pearson相關(guān)性分析

3　討論

血液中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下與鐵氰化鉀發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生葡萄糖酸和亞鐵氰化鉀, 亞鐵氰化鉀發(fā)生電化學(xué)反應(yīng), 產(chǎn)生氧化還原電流。氧化還原電流的大小與血液中的葡萄糖濃度成正比。血糖儀通過檢測氧化還原電流的大小即可得出血液中葡萄糖濃度的數(shù)值, 此即為A血糖儀的工作原理。B血糖儀原理與前者相同，兩者的主要區(qū)別在于：測試環(huán)境溫度（前者為5～40℃，后者6～44 ℃）, 測試時間（前者為25 s, 后者5 s）, 測試范圍（前者為2.2 ～27.8 mmol/L, 后者1.1～33.3 mmol/L），且A血糖儀及試紙市場售價遠(yuǎn)低于B血糖儀，但A血糖儀采血針針頭大，造成創(chuàng)面大，使用后要嚴(yán)格消毒皮膚。

本次實(shí)驗(yàn)所用三種測量方法重復(fù)性較好, 符合美國相關(guān)的院內(nèi)床旁檢驗(yàn)（POCT）葡萄糖C30-A文件的要求［5］。便攜式血糖儀具備使用靈活，攜帶方便，結(jié)果顯示快等特點(diǎn)，與血生化分析儀檢測有差異主要有幾個原因： 校準(zhǔn)調(diào)碼不當(dāng)，采血部位殘存酒精，未能同時同步進(jìn)行，試紙條過期等。另外，操作者的技術(shù)與儀器的分析性能［6］以及血的來源（靜脈血或末梢血）［7］與采血方式等因素的影響, 也可能使血糖的檢測結(jié)果有很大差異。本實(shí)驗(yàn)中避免上述影響因素，將三種不同方法測量的空腹血糖值進(jìn)行比較，進(jìn)而得知對于同時間同一樣抽血樣品血糖測量結(jié)果：A血糖儀與B血糖儀相比，后者測量結(jié)果低1.1～1.5 mmol/L，而B血糖儀與全自動生化分析儀測量結(jié)果相比低1.4～1.8 mmol/L，并且血糖值越高，其測量值差距越小。A血糖儀與全自動生化分析儀相比，測量結(jié)果高度相似。因此，A血糖儀與醫(yī)院檢測用的全自動生化儀測量結(jié)果基本無異,其準(zhǔn)確率遠(yuǎn)高于B血糖儀。

［1］Internal Diabetes Federation. Diabetes Atlas 5th edition. International Diabetes Federation［C］. Brussels： Belgium. 2011.

［2］Wilson RD, Islam MS. Fructose-fed streptozotocin-injected rat： an alternative model for type 2 diabetes［J］. Pharmacol Rep, 2012, 64（1）：129-139.

［3］陳舒懌, 吳強(qiáng). 糖尿病動物模型及其在DR的應(yīng)用［J］.國際眼科雜志, 2008, 8（2）：355-357.

［4］張瑜, 張敬法, 雷霞, 等. Exendin-4類似物對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜電圖的保護(hù)作用［J］. 國際眼科雜志, 2008, 8（8）：1573-1575.

［5］National Committee for Clinical Laboratory Standards. Ancillary （bedside） blood glucose testing in acute and chronic care facilites； approved guideline C30-A［C］. Villanov： NCCLS, 2002.

［6］Solnica B, Naskalski JW, Sieradzki J. Analytical performance of glucometers used for routine glucose selfmonitoring of diabetic patients［J］. Clin Chim Acta, 2003, 331（1-2）：29-35.

［7］Stahl M, Brandslund I. Measurement of glucose content in plasma from capillary blood in diagnosis of diabetes mellitus ［J］. Scand J Clin Lab Invest, 2003, 63（6）：431-440.

Q95-33

B

1674-5817（2015）05-0411-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2015.05.015

2014-12-25

泰安市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（20123031）和山東省教育廳科技計(jì)劃項(xiàng)目（J05L08）

王藝（1984-）, 男, 碩士, 主治醫(yī)師、講師, 從事糖尿病性視網(wǎng)膜病變的臨床與基礎(chǔ)研究。E-mail： 346048368@qq.com