健康人與慢性牙周炎患者唾液蛋白質量濃度及白蛋白與球蛋白比值的變化

崔博淼 余宇 袁雯雯 周聞捷 周學東 張平

口腔疾病研究國家重點實驗室 華西口腔醫院（四川大學），成都 610041

唾液在維護口腔健康和微生態平衡的同時，也存在很多在疾病發生中起重要作用的成分。唾液作為人體自身分泌的一種生理物質，組成成分復雜多樣，可以在唾液中穩定存在的蛋白質有90多種[1]。目前已經分離出40余種唾液蛋白，其中白蛋白和球蛋白是較重要的唾液功能蛋白，也是體液免疫的重要成分[2]。已知有多種口腔疾病都會在唾液中得以體現，如甲狀腺炎、糖尿病、牙周炎、慢性腎炎等疾病都可以影響唾液蛋白成分[3-5]。

近幾年，人們對唾液有了新的認識，并試圖通過檢測唾液成分作為診斷疾病的工具，開發一種無創傷疾病檢測的新方法。唾液成分及量的改變與口腔疾病、機體代謝功能改變密切相關。本實驗對37名健康受試者及24名發生牙周炎患者全唾液中的總蛋白和部分唾液蛋白組分進行定量分析，確定其參考范圍，以便為口腔疾病的診斷治療提供參考。

1 材料和方法

1.1 研究對象

本實驗收集37名健康受試者以及24名慢性牙周炎患者的全唾液。61名研究對象為23～36歲，平均（28.57±0.69）歲。所有對象均無全身系統性疾病。健康受試者要求無口腔疾病，無飲酒吸煙史。

1.2 樣品收集和保存

分別采集37名健康受試者1 d內8:00、9:30、11:30、13:00、16:30、21:00左右的全唾液以及24名牙周炎患者早晨的非刺激全唾液。在收集唾液之前，要求研究對象用清水漱口，5 min后開始收集唾液。

唾液樣品收集完畢后，在10 000 r·min-1、4 ℃條件下離心10 min，所得上清液分裝入兩個EP管中，一管300 μL，另一管100 μL。300 μL用于白蛋白檢測，100 μL用于總蛋白檢測，并加入500 μL PBS液稀釋6倍。標記后分別將上清液-75 ℃冷凍保存[6]。

1.3 實驗方法

1.3.1 儀器與試劑 BCA蛋白濃度測定試劑盒（上海碧云天生物技術有限公司），Varioskan Flash（Thermo公司，美國）。GF-D800型半自動生化分析儀（山東高密彩虹分析儀器有限公司），白蛋白測試盒（長春匯力生物技術有限公司）。

1.3.2 檢測方法 采用BCA法在酶標儀上測定總蛋白的質量濃度。白蛋白的質量濃度使用GF-D800型半自動生化分析儀和白蛋白測試盒采用溴甲酚綠法進行測定，儀器參數按照試劑盒說明書要求設置。得到總蛋白和白蛋白的測定結果后，再由總蛋白減去白蛋白得到球蛋白的質量濃度，然后計算白蛋白與球蛋白比值（albumin/globulin ratio，A/G）。

1.4 統計學方法

使用SPSS 19.0統計軟件進行統計學分析。先對所得的每一組數據進行正態分布檢驗，再對健康組的6組數據進行單因素方差分析，并使用LSD法進行兩兩比較；然后使用秩和檢驗分析牙周炎組與健康組相應時間段的數據之間的差異，檢驗水準為雙側α=0.05。

2 結果

2.1 健康組唾液蛋白含量檢測分析

37名健康受試者在1 d內6個時間段的唾液總蛋白、白蛋白、球蛋白的質量濃度及A/G結果見表1。

表1 健康組各時間段總蛋白、白蛋白、球蛋白質量濃度及A/G測量值Tab 1 The mean concentration of total protein, albumin, globulin and A/G of healthy group in different period of time x±s

經統計學分析，1 d內不同時間段唾液總蛋白、白蛋白、球蛋白的質量濃度有明顯波動（P＜0.05）；但A/G在1 d內的變化無統計學意義（P＞0.05）。

測定的唾液總蛋白、白蛋白、球蛋白質量濃度的范圍（95%可信區間）見表2，經方差分析結果表明：早晨空腹時（即8:00）不同人唾液蛋白成分的質量濃度較為相似，比較穩定，唾液總蛋白為1 197.02～1 511.68 μg·mL-1，白蛋白為128.57～150.53 μg·mL-1，球蛋白為1 066.10～1 357.50 μg·mL-1，A/G為0.094 0～0.143 2。

表2 健康組各時間段總蛋白、白蛋白、球蛋白質量濃度及A/G的95%可信區間Tab 2 95% con fi dence interval of total protein, albumin, globulin and A/G of healthy group in different period of time

2.2 牙周炎組唾液蛋白質量濃度檢測及對比分析

通過對健康組唾液蛋白檢測分析可以確定早晨唾液蛋白成分較為穩定，收集牙周炎患者早晨的全唾液，測定結果見表3。對健康組和牙周炎組相同時段的數據進行秩和檢驗，結果顯示兩組間總蛋白、白蛋白、球蛋白的質量濃度的差異均有統計學意義（P＜0.05），而A/G的差異無統計學意義（P＞0.05），與健康組比較，牙周炎組總蛋白、白蛋白、球蛋白95%可信區間的下限較健康組相應蛋白的上限高，但是牙周炎組與健康組的A/G并無明顯的差異。

表3 牙周炎組早晨唾液總蛋白、白蛋白、球蛋白質量濃度和A/G的均值及95%可信區間Tab 3 The mean concentration and 95% con fi dence in-terval of total protein, albumin, globulin and A/Gof chronic periodontitis group in the morning

3 討論

唾液是由下頜下腺、舌下腺和腮腺分泌的液體與口腔中眾多小黏液腺分泌的黏液在口腔中混合而成的一種無色液體，包含無機物、黏液、糖蛋白、酶和包括分泌型免疫球蛋白與溶菌酶在內的抗菌化合物等。唾液中的酶是淀粉和脂肪消化過程中必不可少的一部分。這些酶在分解截留于牙齒縫隙中的食物顆粒中發揮了重要作用，保護牙齒免受細菌的損壞。此外，唾液還具有潤滑功能，濕潤食物使之易于下咽，并保護口腔黏膜，保持表面濕潤。唾液蛋白濃度變化受多種因素的影響[7]。由于唾液蛋白的緩沖作用，唾液的pH值一般為4～5，pH值降低會導致流率增加，從而導致唾液蛋白濃度下降，即刺激性唾液蛋白的質量濃度較非刺激性唾液有所下降[8]。在患者存在接受放射治療或化學治療、免疫力低下和糖尿病等情況下，唾液白蛋白的濃度會升高，這對糖尿病的診斷有一定幫助[5]；此外，口腔鱗狀細胞癌患者、牙周炎和牙齦炎患者的唾液總蛋白、白蛋白濃度會明顯增加，因此唾液白蛋白水平可作為這些口腔疾病的診斷指標[3,9-10]。有文獻[11]報道，基本已確定的牙周炎生物標志物有基質金屬蛋白酶-8、白細胞介素-1β，這為有效而準確地診斷牙周炎提供了依據。

本研究取37名健康受試者在1 d內6個時間段的非刺激性全唾液，其中8:00、11:30、16:30、21:00為飯前水平，9:30、13:00為飯后水平。對所得數據進行單因素方差分析，結果顯示：1 d內6個時間段唾液總蛋白、白蛋白、球蛋白的質量濃度隨時間呈現出一定的變化（P＜0.05），主要是飯前水平與飯后水平間的差異，但是A/G在1 d內并無明顯改變（P＞0.05）。造成飯前飯后唾液蛋白質量濃度差異的原因是多方面的，如唾液蛋白質量濃度會隨著其pH值的降低而下降。此外，唾液分泌也受到副交感神經和交感神經的支配，以副交感神經為主。人體進食及其后的消化過程中唾液分泌有所改變，主要是因為副交感神經興奮所致，使血管擴張，毛細血管通透性增強，唾液中白蛋白增多，促進腺體分泌黏稠唾液[12-13]。

本研究結果發現，早晨空腹時（8:00）唾液蛋白成分的含量比較穩定，唾液蛋白質量的濃度范圍為總蛋白1 197.02～1 511.68 μg·mL-1，白蛋白128.57～150.53 μg·mL-1，球蛋白1 066.10～1 357.50 μg·mL-1，A/G 0.094 0～0.143 2。這與已報道[7,12-14]的唾液總蛋白、白蛋白量相符合。基于此，24名牙周炎患者的唾液收集時間定為早晨。使用秩和檢驗，對牙周炎組與健康組相應時間段的數據進行對比分析，結果顯示：唾液總蛋白、白蛋白、球蛋白均有明顯差異（P＜0.05），且疾病組較健康組高，但是A/G無明顯差異（P＞0.05）。

目前，醫院檢測疾病的方法主要是采用的血液檢驗，其參考值為總蛋白60.0～83.0 g·L-1，白蛋白35～55 g·L-1，球蛋白19～34 g·L-1，A/G1.20～2.50。白蛋白是最豐富的血清蛋白，由肝臟合成，占血漿總蛋白質的40%～60%。A/G過低一般會考慮是否為肝損傷，而過高一般是因為機體失水過多，血液濃縮或攝入蛋白量過高所致，是評價肝功能重要的生化指標。唾液中的白蛋白被視為超濾液，可由血液擴散成為黏膜分泌物[5]。此外，有報道稱唾液白蛋白含量與血清中白蛋白水平存在顯著相關性[15]。這為使用唾液這種無創的疾病檢測方法的研究提供了科學基礎。但是，唾液白蛋白的濃度會受到很多因素的影響，比如黏膜有損傷的患者的唾液白蛋白濃度會顯著升高[12]；放射治療和牙周炎患者也都已經檢測出較高質量濃度的白蛋白[5,14]。疾病發生引起唾液組分改變的作用機制以及關系還有待進一步研究。近年來，有關唾液的研究已逐漸引起關注，學者們正為開發一種無創檢測方法進行疾病診斷和預防作出努力。

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