不同栽培年限及采收期對黃芩藥材有效成分含量的影響研究△

繆曉素，宋國虎，劉容秀，李小麗，徐亮，王文全，張學文*，魏勝利*

(1.北京中醫藥大學，北京 100102；2.國藥集團承德藥材有限公司，河北 承德 067000)

·中藥農業·

不同栽培年限及采收期對黃芩藥材有效成分含量的影響研究△

繆曉素1，宋國虎2，劉容秀1，李小麗2，徐亮2，王文全1，張學文2*，魏勝利1*

(1.北京中醫藥大學，北京 100102；2.國藥集團承德藥材有限公司，河北 承德 067000)

目的：研究不同栽培年限及采收月份對黃芩藥材有效成分含量的影響，確定最佳采收時間，為規范化種植和合理開發利用黃芩提供理論依據。方法：采用裂區試驗布置田間試驗，以采收年限為主因素，采收月份為副因素；采用HPLC測定黃芩中黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素及千層紙素A的含量。結果：無論是二年生還是三年生黃芩，其黃芩苷和漢黃芩苷含量最高均出現在春季(5月中旬至6月中旬)，而黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A含量最高峰出現稍晚(6月中旬至7月中旬)。結論：黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A 5種成分含量最高均出現在5月到7月間，而且二年生和三年生黃芩中成分含量變化規律相近。此外，三年生黃芩藥材中各個成分含量在一定程度上均有所提高，但并不明顯。因此，如果以這些成分作為黃芩藥材質量的考核指標，春季是適宜的采收期。

黃芩；栽培年限；采收期

黃芩為唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根，具有清熱燥濕，瀉火解毒，涼血止血，除熱安胎等功效[1]，是臨床最常用的中藥材之一。黃芩含有的活性成分主要是黃酮類化合物，例如黃芩苷，黃芩素，漢黃芩苷，漢黃芩素等[2-4]。現代藥理學研究表明，黃芩具有抗菌抗病毒[5]﹑抗氧化[6]﹑抗腫瘤[7]及對消化﹑神經等系統的保護作用等活性[8-9]。近年來，人工栽培黃芩已成為我國黃芩藥材的主要來源，在黃芩栽培過程中，栽培年限和采收期是影響藥材質量的重要因素。明確不同栽培年限(目前一般栽培2～3年)和采收時間對黃芩藥材質量影響對于確定優質黃芩的合理采收期具有重要的指導意義[10]。

截至目前，對于不同采收時間對黃芩藥用成分含量影響已有報道。然而，從研究栽培年限和采收時間間隔看，還不夠系統，且不同試驗報道的黃芩最佳采收期存在差異[11-14]。此外，對于考察的藥用成分種類也數量偏少，僅針對黃芩苷及總黃酮等成分研究[15-17]。因此，本試驗針對二年生和三年生的黃芩藥材，從春季到秋季，每隔15日定期取樣黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A 5種主要活性成分含量的差異，旨在確定黃芩最佳栽培年限和采收期，為今后黃芩規范化生產提供理論依據。

1 材料和方法

1.1 試驗設計

在黃芩道地產區承德，采用裂區設計試驗，利用1年生苗布置試驗，株行距為15 cm×25 cm。以采收年限為主因素，設置二年生和三年生兩水平，以采收月份為副因素，以采收時間為因素。在2012年和2013年，分別自4月至10月，設置14個水平，取樣時間分別為4月1日、4月15日、5月1日、5月15日、6月1日、6月15日、7月1日、7月15日、8月1日、8月15日、9月1日、9月15日、10月1日和10月15日。試驗期間，各小區采用一致的田間管理措施，且無大旱或長期降雨等極端天氣。

1.2 HPLC含量測定

1.2.1 儀器與試劑 采用Agilent 1100型高效液相色譜儀系統(G1311A四元泵，G1314A紫外檢測器，G132813手動進樣器，Agilent 1100色譜工作站，G1379A在線脫氣器)；黃芩苷(baicalin)對照品購自中國藥品生物制品檢定所)；漢黃芩苷(wogonoside)、黃芩素(baicalein)、漢黃芩素(wogonin)和千層紙素A(oroxylin A)對照品購自上海融禾醫藥科技發展有限公司(HPLC>98%)。

1.2.2 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相甲醇(A)-0.2%磷酸水(B)，梯度洗脫0～10 min，45%A，10～55 min，45%～70%A，55～60 min，70%～45%A；流速1.0 mL·min-1；檢測波長274 nm；柱溫25 ℃；進樣量10 μL，黃芩對照品及樣品見圖1。

1.2.3 供試品溶液制備 取黃芩藥材粉末(過40目篩)0.2 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，量取45 mL 70%丙酮加入，60 ℃水浴超聲60 min，冷卻，加70%丙酮定容至刻度，過濾，精密量取續濾液5 mL于圓底燒瓶，旋轉蒸發儀回收溶劑，殘渣用甲醇溶解到10 mL量瓶，定容至刻度。經0.45 μm濾膜過濾，即得。

1.黃芩苷；2.漢黃芩苷；3.黃芩素；4.漢黃芩素；5.千層紙素A圖1 HPLC色譜圖注：圖中1為黃芩對照品HPLC圖，2 為黃芩樣品HPLC圖。

2 結果

2.1 二年生黃芩不同采收月份藥用成分動態變化

圖2a～2b 二年生黃芩不同月份藥用成分含量動態變化

對二年生黃芩不同月份有效成分含量進行測定，計算其平均值(因當時樣品混合未做重復)。結果發現(圖2a～2b)，各成分含量變化均呈現雙峰曲線，黃芩苷和漢黃芩苷含量最高出現在春季(5月1日至6月15日)，其中黃芩苷含量在5月15日達到18.11%，遠高出《中華人民共和國藥典》(2010版一部)規定的9.0%水平[1]，而同期漢黃芩苷含量達到了最高為4.86%。黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A的含量最高出現在9月1日，分別為2.13%、0.60%和0.29%。

2.2 三年生黃芩不同采收月份藥用成分動態變化分析

圖3a～3b 三年生黃芩不同月份藥用成分含量動態變化(平均值±標準差)

對三年生黃芩不同月份有效成分含量進行測定，計算其平均值和標準差。結果表明(圖3a～3b)，三年生黃芩在不同月份各種藥用成分的含量呈現顯著差異。對不同月份成分變化規律分析發現，黃芩苷和漢黃芩苷含量最高仍然在春季(5月15日至6月15日)，最高在6月1日，兩種成分含量分別達到了17.54%±0.90%和4.33%±0.34%。黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A最高峰則出現在了7月1日，三種成分含量分別為2.88%±0.42%、0.67%±0.13%和0.31%±0.04%。

3 結論與討論

在黃芩生長旺盛的時期，不同采收期的黃芩藥材的化學組成與量的關系有一定的差異[18]。郭曉艷等[13]表明，采自河北承德的黃芩中黃芩苷含量在6-10月總體呈下降趨勢。而趙勝男等[17]發現，赤峰地區秋季采收的黃芩隨著年份的增長，其化學成分含量的比例明顯處于一種動態變化過程，從植物學來說秋季更適宜采收。另外，靳維榮等[14]和張永清等[15]研究發現，山東地區的黃芩最佳采收期分別在9月和10月上旬。以上研究顯示出不同地區栽培的黃芩最佳采收期存在差異。

本試驗選取更大時間跨度(4-10月)和多種成分，試驗結果表明，二年生和三年生的黃芩所含黃芩苷和漢黃芩苷含量最高均出現在春季(5月15日至6月15日)，黃芩素、漢黃芩素和千層紙素A含量變化略有不同，在夏季和秋季含量較高。分析其原因，主要與春季黃芩地上部分萌發導致根中儲存的初生代謝產物質量減小，從而導致各類成分的分布密度(相對含量)增加有關，本課題組已經從甘草等多種根莖類藥材中得到類似規律。綜上所述，如果單從成分含量角度考慮藥材質量，其最佳采收期應該選取春季，而從藥材產量角度考慮，則秋季比較適宜，總之黃芩的采收期應該在確保黃芩藥材質量的基礎上，兼顧產量最大化來綜合選定。

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Effect of different Cultivation Years and Harvesting period ofScutellariabaicalensisonActiveIngredients

MIAO Xiaosu1，SONG Guohu2，LIU Rongxiu1，LI Xiaoli2，XU Liang2，WANG Wenquan1，ZHANG Xuewen2*，WEI Shengli1*

(1.Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China；2.Chengde Pharmaceutical Co.，Ltd.Affiliated to China National phar maceutical gorporation Chengde 067000，China)

Objective：In order to provide a basis for good agriculture practice and exploitation forScutellariabaicalensis，the effect of different cultivation years and havesting period ofS.baicalensison active ingredients was studied.Methods： Split plot was used to design field experiment，the cultivation years was used as a main factor，and harvesting period as factor.The main contents ofS.baicalensiswere determined by HPLC.Results：The highest contents of baicalin and wogonoside of the biennial and three year-oldS.baicalensisappeared in spring (mid-may-mid-June)，and the highest contents of baicalein，wogonin and oroxylin A occurred were later (mid-June-mid-July).Conclusion：The highest content of main compositions appeared from May to July，and the changes between biennial and three year-oldS.baicalensiswere similar.Moreover，the total content of three year-oldS.baicalensisincreased to some extent，but not apparently.Therefore，the suitable time for harvesting was in spring.

ScutellariabaicalensisGeorgi；cultivation period；harvesting period；quality influence

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.8.017

2015-08-05)

國家“十二五”科技支撐計劃項目(2011BAI07B04)

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魏勝利，副教授、碩士生導師，研究方向：中藥資源定向培育及中藥資源綜合開發研究，Tel：(010)84738334，E-mail：wsl7491@126.com 張學文，副研究員，研究方向：中藥材栽培與資源開發研究，Tel：0314-2062209，E-mail：cdyckyb@126.com