降低中藥斑蝥刺激性的實驗研究

楊辛欣，潘 雪，李超英，王書丹，莊 碩

（長春中醫藥大學，長春 130117）

降低中藥斑蝥刺激性的實驗研究

楊辛欣，潘 雪，李超英*，王書丹，莊 碩

（長春中醫藥大學，長春 130117）

目的 研究降低中藥斑蝥對結直腸的刺激性的方法和技術。方法 本實驗對斑蝥的不同提取方法和采用包合技術前后斑蝥素含量進行比較，考察其對大鼠結腸組織的刺激性作用。結果 斑蝥經乙醇提取物中斑蝥素含量大于經水提取物中斑蝥素含量，并且2種提取物對大鼠結腸組織均有刺激性，但是斑蝥乙醇提取物采用環糊精包合后，對大鼠結腸無刺激性作用。結論 斑蝥乙醇提取物經環糊精包合后可以降低斑蝥的刺激性，且不影響藥效。

斑蝥;提取物;環糊精包合;結腸組織

斑蝥，能破血消髒，攻毒蝕瘡，引赤發泡，辛，熱，有大毒［1］。現代研究［2-7］表明，中藥斑蝥含有斑蝥素及其衍生物等物質，具有誘導癌細胞凋亡的功效，對多種原發性癌癥具有明顯的療效。但是斑蝥素也具有較大的毒性，用量不當能對機體產生較大的不良反應，因此中醫應用斑蝥，多采用炮制后應用。目前，許多學者［8-10］對斑蝥炮制方法及其機理等進行了深入研究，但是對斑蝥提取和制劑后毒副作用毒性研究較少［11］。本實驗利用中藥提取和制藥新技術，觀察炮制后的斑蝥不同提取方法、包合技術對其斑蝥素含量的影響，且對大鼠結直腸刺激性進行比較研究，從而在保證斑蝥臨床安全應用基礎上，并降低其對機體產生的刺激性。

1 材料

1.1 樣品 炮制斑蝥、斑蝥水提物、斑蝥醇提包合物，本研究室自制。斑蝥素對照品（購自中國藥品生物制品檢定院）。

1.2 動物 Wistar大鼠80只，雌雄各半，動物合格證號:SCXK（吉）2010-0001，體質量220 ～240 g。

1.3 儀器 1260安捷倫高效液相色譜儀（上海天美科學儀器有限公司）;KQ3200DB型速控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

2 方法

2.1 炮制方法 取凈斑蝥與大米拌炒，至米呈黃棕色，取出，除去頭、翅、足。每100 kg斑蝥，用米20 kg。

2.2 提取方法

2.2.1 乙醇提取方法 取炮制斑蝥適量，用10倍量75%乙醇提取3次，每次1.5 h，合并濾液。50℃低溫揮干，研成粉末，備用。

2.2.2 水提取方法 取炮制斑蝥適量，用10倍量的純凈水提取3次，每次1.5 h，合并濾液，50℃低溫揮干，研成粉末，備用。

2.3 乙醇提取和β-環糊精包合方法 本實驗取上述斑蝥乙醇提取物，加入適量的β-環糊精和蒸餾水，保持70℃溫度，磁力攪拌400 r/min，4 h。50℃低溫揮干，研成粉末，備用。

2.4 含量測定 采用測定方法:色譜條件與系統適應性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水（23∶77）為流動相，檢測波長為230 nm，柱溫30℃，流速1 mL/min，進樣量10 μL。理論板數按斑蝥素峰計算應不低于3 000。

斑蝥素對照品的配制:精密稱量斑蝥素對照品適量，置容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得斑蝥素對照品儲備液。其濃度為2.14 mg/mL，備用。

供試品的制備:分別取每種供試品3分，每分0.5 g，置于錐形瓶中，加氯仿 20 mL，超聲 20 min，2次，過濾，合并濾液，用氯仿少量多次洗滌容器。50℃水浴揮干，加甲醇溶解，定容至2 mL容量瓶，過0.22 μm濾膜，備用。測定結果見表1。

表1 斑蝥提取和研制樣品中斑蝥素含量測定結果（n=3）

2.5 刺激性實驗方法 參照《中藥藥理研究方法學》［12］進行。

2.5.1 單次給藥刺激性試驗 禁食不禁水36 h后，取40只雌雄各半大鼠，隨機分為斑蝥水提組、斑蝥乙醇提組、斑蝥乙醇提并包合組、空白組，斑蝥的用量按《中華人民共和國藥典》［13］斑蝥標準，并且各種斑蝥的用量相同。空白組給予同體積的生理鹽水。分別經直腸給予各組藥液0.2 mL，至結腸8 cm處。于24 h后處死大鼠，取出直腸組織，觀察有無充血、水腫、黏膜下出血等現象。按局部黏膜刺激性反應分級標準進行評分，并根據黏膜刺激性強度評價標準，按平均分值判定受試藥物的黏膜刺激性強度;如有變化應作病理組織學檢查，并與空白對照組比較。

2.5.2 多次給藥刺激性試驗 禁食不禁水36 h后，取40只雌雄各半大鼠隨機分為斑蝥水提組、斑蝥乙醇提組、斑蝥乙醇提并包合組、空白組。1次/d，分別經直腸給藥各組藥液0.2 mL（按照1.08 mL/kg），連續7 d。空白組給藥同體積的生理鹽水。

末次給受試藥物后1 h處死動物，觀察指標和要求同單次刺激性試驗。

3 結果

3.1 單次給藥刺激性試驗結果 斑蝥水提組、斑蝥乙醇提組、斑蝥乙醇提并包合組大鼠結腸組織均正常，黏膜刺激性評分為0分（形態無改變或無明顯改變），分別證明斑蝥水提物、斑蝥乙醇提物、斑蝥乙醇提并包合物對大鼠結腸組織無刺激性。

3.2 多次給藥刺激性試驗結果 斑蝥乙醇提取組對大鼠結腸具有強刺激性，結腸黏連、黏膜水腫、充血嚴重，并且大鼠體質量有明顯下降;水提取組大鼠，大部分狀態良好，尤其雌性大鼠臟器與結腸均無異常，但有2只雄性大鼠結腸末端有輕微黏連，1只雄性大鼠腸組織充血水腫，1只狀態不好、體質量明顯減輕，斑蝥水提物對雄性大鼠有輕度刺激性;而乙醇提取并包合組大鼠均狀態良好，臟器與結腸均無異常。

4 小結

多次給藥刺激性試驗結果發現:炮制斑蝥乙醇提取物對大鼠結腸具有強刺激性，結腸黏連、黏膜水腫、充血嚴重，并且大鼠體質量有明顯下降。而炮制斑蝥經過水提取不但斑蝥素提取含量低，而且對雄性大鼠有一定的刺激性。將炮制斑蝥乙醇提取物進行環糊精包合，結果對大鼠臟器與結腸均無異常，大鼠狀態良好，顯著降低了斑蝥的刺激性，且保留其藥效成分。

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［13］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2010.

Reducing of Chinese medicine Mylabris stimulation

YANG Xinxin，PAN Xue，LI Chaoying*，WANG Shudan，ZHUANG Shuo
（Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China）

ObjectiveExperimental study on reducing of Mylabris stimulation.MethodsThe experiment of Mylabris different extracting method and the inclusion technology cantharidin content before and after comparison，and investigation of its irritating effect on rat colon tissue.ResultsCantharidin content in Mylabris approved by ethanol extract than the water extract，and both extract had irritation on rats colon tissue，but Mylabris ethanol extracts using cyclodextrin inclusion had no irritation on rats colon tissue.ConclusionMylabris ethanol extract by cyclodextrin inclusion irritability tends to decrease，and does not affect the efficacy.Therefore，this experimental study for the clinical safety and application of Mylabris provided the scientific basis and reference.

Mylabris;extraction;inclusion;colon tissue

R285.5

A

2095－6258（2015）04－0688－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2015.04.010

吉林省科技發展計劃項目（20120927）。

楊辛欣，碩士，講師，主要從事炮制與中藥制劑方向研究。

李超英，博士，教授，電話－13504417829，電子信箱－ chaoying li@126.com

2014－11－05）