固相萃取—高效液相色譜法測定雞蛋中蘇丹紅染料

馮輝等

摘要 建立了雞蛋中蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ殘留測定的高效液相色譜方法。樣品經蘇丹紅專用SPE小柱凈化、濃縮，Waters SymmetryShield C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱進行分離測定。本方法的檢測限為0.1 mg/kg，4種蘇丹紅染料在濃度1～1 000 mg/L范圍內與峰面積呈線性相關。在空白雞蛋中添加20～600 mg/kg濃度下，4種蘇丹紅的平均回收率為88.6%～101.0%，結果表明，該法簡單、靈敏、特異性強，縮短了分析時間，提高靈敏度，節約試劑，降低成本，適用于雞蛋中蘇丹紅染料殘留的測定。

關鍵詞 雞蛋；蘇丹紅；固相萃取；高效液相色譜

中圖分類號 O652.63；TS207.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2015）14-0291-01

蘇丹紅屬偶氮系列染料，是一種有毒色素，并非食品添加劑，目前已確認了其有機偶氮染料的毒性。“紅心鴨蛋”事件之后，我國已經重點監測包括鮮雞蛋在內的各類蛋制品，而蘇丹紅是其中一項重點檢測的內容[1-5]。迄今為止，主要通過高效液相色譜法、GC-MS分析法檢測食品中蘇丹紅染料，《食品中蘇丹紅染料的檢測方法 高效液相色譜法（GB/T 19681-2005）》主要適用于辣椒及其制品、香腸等肉制品中蘇丹紅染料的檢測。試驗結果顯示，雞蛋中4種蘇丹紅染料的回收率不理想，達不到雞蛋中蘇丹紅檢測的要求。因此，本研究旨在通過改善提取凈化條件，建立一種操作步驟簡單，同時提高雞蛋中4 種蘇丹紅染料回收率的液相色譜測定方法[1-3]。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

1.1.1 供試材料。試驗材料為雞蛋。

1.1.2 儀器與試劑。美國Waters 2695型液相色譜儀帶Waters2475型熒光檢測器，SC-8L-150型固相萃取儀，美國OA-SYS氮吹儀，德國IKA GENIUS 3漩渦混合器，上海科導SK5200H超聲波清洗機，美國梅特勒-托利多ML204電子天平，德國賽多利斯超純水儀，上海安譜公司蘇丹紅專用SPE小柱（500 mg/6 mL）。德國DR.公司蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 標準品（99.6%）。二氯甲烷、正己烷、乙腈為色譜純。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準品配制。具體包括：①標準儲備溶液的配制。精密稱取按其純度折算為100%質量的標準品各0.100 g，置100 mL容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，配成1.00 mg/mL溶液[1-5]。4 ℃冰箱保存。②標準工作溶液的配制：根據需要準確移取相應標準儲備液，用水稀釋成1.0、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/mL的系列標準工作溶液[1-7]。

1.2.2 提取。稱取均勻試樣2 g（精確至0.001 g），加入3 mL正己烷漩渦混合10 s，待凈化。

1.2.3 凈化洗脫濃縮。蘇丹紅專用SPE小柱使用前依次用5 mL二氯甲烷、5 mL正己烷活化。將待凈化液上樣到小柱上，然后再用2 mL正己烷潤洗樣品瓶，也上樣到柱上，保持1.0 mL/min流速過柱。用10 mL正己烷淋洗小柱，流出液棄去。用5 mL二氯甲烷洗脫小柱，收集洗脫液，40 ℃氮氣吹干，1 mL乙腈定容，超聲1 min，漩渦混合10 s，過0.22 μm親水PTTE針式濾器過濾，上機檢測[4-6]。

1.3 色譜條件

Waters SymmetryShield C18 色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫35 ℃，流動相為乙腈，流量1.0 mL/min，檢測波長485 nm，進樣量10 μL[7-9]。

2 結果與分析

2.1 固相萃取小柱的選擇

試驗比較了安譜蘇丹紅專用SPE小柱和人工填裝的中性氧化鋁柱。采用商業固相萃取柱，與自己填裝的氧化鋁柱相比，不需要進行復雜的活度調節和活性測試，節省大量時間，穩定性好，整個檢測操作時間不超過1 h，溶劑使用量少，回收率較高。標準品、空白樣品添加標準品圖譜如圖1所示。

2.2 流動相的確定

采用甲醇—水、乙腈—水、100%乙腈、100% 甲醇等作為流動相，經過試驗比較，最后采用100%乙腈作為流動相。這是因為此條件下流動相配制簡單，分離效果較好，且保留時間適中。

2.3 未知樣品中蘇丹紅的含量測定

利用本方法對市售的10種樣品進行檢測，由分析結果可知，蘇丹紅均未檢出。

2.4 檢出限、線性范圍、回收率和精密度

按3倍信噪比計算，方法的檢出限約為0.1 mg/kg。根據上述色譜條件對系列標準工作溶液進樣分析，以峰面積定量，得到標準溶液濃度與峰面積之間的線性回歸方程，如表1所示。取空白雞蛋樣品8份，按3個加標水平加標，按上述條件前處理和色譜條件上機測試，測定蘇丹紅的加標回收率88.6%～101.0%，相對標準偏差均小于2%，精密度良好，滿足分析要求。

3 結論與討論

本方法采用成品商業固相萃取柱對雞蛋中蘇丹紅染料進行凈化、提取，用高效液相色譜儀進行測定，快速、準確率高、簡便、重現性好，線性關系、精密度和準確度均理想，能更好地滿足實驗室分析檢測，具有較高的實際應用價值。

4 參考文獻

[1] 馬淑玲，劉力，王麗英，等.雞蛋中蘇丹紅的檢測方法研究[C]//科技支撐高產、優質、高效、生態、安全現代畜牧業”論文集.石家莊：河北省畜牧獸醫學會，2012：59-62.

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[3] 謝君紅，馮輝，付曉陸.固相萃取-高效液相色譜法多波長測定食品中的9種合成著色劑[J].食品安全導刊，2013（5）： 29-30.

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[5] 中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.進出口食品中蘇丹Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ檢測方法：SN/T 1590-2005[S].北京：中國標準出版社，2005.

[6] 吳敏，林建忠，鄒偉，等.高效液相色譜法測定食品中對位紅和蘇丹色素等8種脂溶性染料[J].分析測試學報，2006（3）：74-76.

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