電針治療功能性消化不良大鼠海馬體NMDA受體的調節機制＊

李躍兵 張 泓 李鐵浪 曾序求

湖南中醫藥大學針灸推拿學院，湖南省長沙市 410208

功 能 性 消 化 不 良［1～3］（Functional dyspepsia，FD）是以消化道動力與內臟感覺異常為主要病理生理特征，并有多種癥狀重疊、多變或相互轉換以及反復發作、較難治愈等特點的一組消化系統疾病。海馬體［4～6］是大腦邊緣系統的主要組成部分，一方面接受內外環境的刺激，及時做出反應；另一方面接受體內神經遞質的反饋信息，調整其狀態，產生適應性反應。NMDA 受體［7～9］，即為 N－甲基－D－天冬氨酸受體（N－methyl－D－aspartic acid receptor，NMDA），是離子型天冬氨酸受體的一個亞型，分子結構復雜，藥理學性質獨特，不僅在神經系統發育過程中發揮重要的生理作用，而且對神經元回路的形成亦起著關鍵的作用。NMDA受體廣泛分布于突觸后膜，在對輸入海馬體的信號調節中，NMDA受體是唯一的突觸后處理場所。筆者將海馬體NMDA受體調節通路引入對功能性消化不良的研究觀察中，為探索胃腸病發病機制提供了新的研究層面。

1 實驗材料

動物健康SD大鼠60只，湖南中醫藥大學動物實驗中心提供（SPF級）。飼養溫度20～25℃，濕度50%～70%，體重200～250g，雄性。

2 方法

2.1 分組 60只大鼠隨機分為4組，每組15只，分別為空白對照組（A組）、FD模型組（B組）、電針穴位＋模型組（C組）、電針＋MK－801干擾組（D組）（MK－801為NMDA受體拮抗劑）

2.2 造模 采用復合病因造模法［10］，將SD大鼠于每天上午9：00置于束縛盒中限制3h；下午2：00置于溫水（22±1）℃中游泳10min；隔日喂食（隔日禁食，隔日足量給食），連續3周。

2.3 取穴定位 參照“十一五”國家規劃教材《實驗針灸學》（中國針灸出版社，李忠仁主編，2007.1），大鼠標準穴位圖譜定位及擬人對照法定位。足三里：位于小腿外側，膝關節后外側，腓骨小頭下約5mm；中脘：從胸劍聯合至臍中以松緊帶平均分為8等份（每一等份模擬大鼠同身寸1寸），中脘穴為臍上4寸。

2.4 電針方法 所有穴位均用直刺，選擇電針方法。大鼠清醒固定，各穴均用30號1寸針，針刺深度0.2～0.3寸，進針后，接華佗牌SDZ－Ⅱ電針治療儀（蘇州醫療用品有限公司），疏密波（20Hz，波頻率100Hz），強度以針柄輕微抖動為度，每次留針20min，于造模第3天開始針刺，隔日1次，8次為1個療程，共2個療程（16次）。

2.5 MK－801注射方法 微量注射 MK－801溶液0.5μl（大鼠海馬體的注射位點：300～350g SDmale rats：AP＝－2.5L＝±4.4dv＝－7.9）。

3 實驗步驟

造模完成后第2天，C、D兩組電針足三里、中脘穴和阿是穴，每日1次，每次留針20min，共14次，D組于大鼠海馬體微量注射 MK－801溶液0.5μl。造模完成后第36天，每組取8只直接斷頭取腦，無菌剝離海馬CA1區，BLA區，DG區存放于－70℃冰箱做RT－PCR。

4 檢測指標

4.1 胃排空率的測定 治療結束后，各組大鼠禁食24h后，給予每只大鼠按1ml／100g灌胃容積灌服營養性半固體糊 （羧甲基纖維素鈉5g、奶粉8g、糖4g、淀粉4g、活性炭3g、蒸餾水約150ml），30min后處死動物，打開腹腔，分離出胃。沿胃幽門處剪取胃，拭干，稱全重（M1），再沿胃大彎處剪開胃，用生理鹽水洗凈內容物，用濾紙拭干，稱胃凈重（M2），計算胃殘留率。胃殘留率（%）＝（M1－M2）／灌胃量×100%。

4.2 小腸推進率的測定 治療結束后，各組大鼠禁食、灌胃方法同前，30min后處死動物，打開腹腔，分離出腸。量小腸全長（L1）以及幽門至炭末所達最前端的長度（L2），計算腸推進率，小腸推進率（%）＝L2／L1×100%。

4.3 中樞神經系統NMDA 受體通路：用免疫組化、RT－PCR檢測各組大鼠海馬體BLA區的NMDA受體亞基NR1、NR2變化。

5 統計方法

所有數據均輸入計算機，用SPSS19.0windows軟件進行處理。各檢測指標統計數據均用均數和標準差（±s）表示，均數比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

6 結果

C組、D組大鼠胃排空與B組相比，明顯升高且差異有統計學意義（P＜0.05），說明C組對FD的治療有效，詳見表1。

表1 電針對FD大鼠胃排空、小腸推進率和NMDA受體NR1、NR2的影響（±s）

表1 電針對FD大鼠胃排空、小腸推進率和NMDA受體NR1、NR2的影響（±s）

注：C組與A組、B組、D組比較，P＜0.05。

組別 胃排空率（%）小腸推進率（%）NR1含量（μmol／L）NR2含量（μmol／L）A組 89.00±7.59 49.00±2.59 0.14±0.0170.03±0.001 B組 48.20±10.17 48.20±1.17 0.22±0.028 0.02±0.015 C組 58.35±8.71 38.35±1.71 0.19±0.039 0.19±0.03 D組 56.39±17.47 46.39±1.47 0.13±0.0300.04±0.028

7 討論

根據實驗結果進一步明確電針具有改善FD胃腸動力障礙、降低內臟敏感性、良性調節胃腸功能紊亂等作用。也初步闡明電針治療功能性消化不良，可能是通過海馬體的NMDA受體這一通路對認知情感中樞與神經內分泌系統、腸神經系統和免疫系統進行良性平衡調節而實現的。

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