HPLC法同時測定復方三黃酊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量

★　董寧霞 邊瑞民 成植溫 宋德海 盧立明 （濱州醫學院附屬醫院　山東濱州256603）

HPLC法同時測定復方三黃酊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量

★董寧霞 邊瑞民 成植溫 宋德海 盧立明 （濱州醫學院附屬醫院山東濱州256603）

目的：建立復方三黃酊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量測定方法。方法 ：采用反相高效液相色譜法，選擇Agilent ZORBAX SB-C18柱 （4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動相梯度洗脫，檢測波長265nm。結果：鹽酸小檗堿、黃芩素均得到較好分離，分別在0.092～2.3mg/mL，0.064～1.6 mg/mL范圍內呈良好的線性關系，平均回收率為98.96%、98.18%。結論：該方法簡便、準確，可用于復方三黃酊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量測定。

復方三黃酊；鹽酸小檗堿；黃芩素；高效液相色譜

復方三黃酊由黃連、黃芩、黃柏、冰片等藥材組成，具有抗菌消炎、止痛消腫、祛腐生肌的功效，用于治療各期褥瘡和慢性皮膚潰瘍、軟組織損傷、Ⅱ度以下燒燙傷等［1］，在我院應用20多年，臨床療效顯著。本實驗采用高效液相色譜法同時測定復方三黃酊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量，為工藝改進和質量控制提供科學的方法依據。

1　儀器與試藥

Agilent 1260（DAD檢測器）；KQ-300V臺式超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

乙腈為色譜純，磷酸、乙醇、十二烷基硫酸鈉等均為分析純；復方三黃酊由濱州醫學院附屬醫院藥學部制劑室提供 （批號20130422、20131007、20140307）；鹽酸小檗堿對照品（批號110713-20121 2）、黃芩素對照品（批號111595-201306）均購于中國食品藥品檢定研究院。

2　方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：A乙腈-B 0.1%磷酸水溶液（每100mL加十二烷基硫酸鈉0.1g），梯度洗脫：0～10min 10%～45%A，10～15min 45%A，15～30min 45%～90%A；流速：1.0mL/min；檢測波長：265nm；柱溫：室溫。

2.2對照品溶液制備精密稱取鹽酸小檗堿對照品9.20mg、黃芩素對照品6.41mg置于2mL量瓶中，用50%乙腈-水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備將樣品搖勻后，精密量取10 mL，超聲處理5min，放冷后轉移至10 mL容量瓶內，加乙醇至刻度，搖勻。臨用前用0.45μm微孔濾膜濾過。

2.4線性關系考察精密量取對照品溶液20，50，100，200，500μL分別置于5個1mL量瓶中，用50%的乙腈-水溶液稀釋至刻度，搖勻，分別進樣2μL，按上述色譜條件進行測定。以峰面積y對進樣濃度x進行回歸處理，結果見表1。

表1　鹽酸小檗堿和黃芩素的線性回歸方程

2.5精密度試驗精密吸取對照品溶液，連續進樣6次，每次進樣2μ L。計算鹽酸小檗堿含量的RSD為0.65%，黃芩素的RSD為1.24%，精密度良好。

2.6穩定性試驗取同一供試品溶液，分別于0，4，8，16，24h進樣測定。結果：鹽酸小檗堿含量的RSD 為1.09%，黃芩素的RSD為1.53%，表明供試品溶液在24h內基本穩定。

2.7重復性試驗取同一批樣品（批號20130422）共6份，分別精密稱定，按照2.3項下的方法制備供試品溶液，分別進樣2μL，測定峰面積，鹽酸小檗堿、黃芩素的RSD為1.69%，1.72%，表明該測定方法的重復性良好。

2.8加樣回收試驗精密量取已知含量的樣品6份，每份10mL，分別加入鹽酸小檗堿和黃芩素對照品適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液并測定含量，計算回收率，結果見表2。

表2　加樣回收試驗結果（n=6）

2.9樣品測定取樣品3批，按”2.3”項下方法制備供試品溶液，分別進樣2μL，記錄色譜圖（圖1），計算鹽酸小檗堿、黃芩素含量，結果見表3。

表3　樣品含量測定結果（n=3）　mg·mL-1

3　討論

圖1　對照品（A）及樣品（B）的HPLC圖譜

復方三黃酊是以黃連、黃芩、黃柏為君藥的中藥復方制劑。小檗堿是黃連、黃柏的主要有效成分，具有抗菌、抗炎等作用［2］；黃芩素是黃芩抗菌的有效成分，并可通過多種環節影響花生四烯酸代謝，抑制組胺釋放，減輕炎性反應［3］。二者的藥理作用與復方三黃酊的功效一致，可作為該制劑工藝改進和質量控制中的指標成分。

采用HPLC法同時測定鹽酸小檗堿和黃芩素含量時，小檗堿的有明顯的拖尾現象，峰形對稱性差，且較難與鄰近化學成分分離，故在流動相0.1%磷酸水溶液中加入十二烷基硫酸鈉作掃尾劑，顯著改善了小檗堿的峰形。

供試品溶液未經過精制，成分復雜，等度洗脫的效果不理想，故改為梯度洗脫，可較好地分離各化學成分。該高效液相色譜法可同時測定復方三黃酊中鹽酸小檗堿、黃芩素的含量，準確快速，具有實際應用意義。

［1］成新蓮，王玉，王洪巖，等.復方三黃酊和地榆酊的制備與臨床應用［J］.中華護理雜志，2001，36（9）：706-707.

［2］侯家玉.中藥藥理學［M］.北京：中國中醫藥出版社，2007，3.

［3］高燕，顧振綸，蔣小崗，等.黃芩素藥理學研究新進展［J］.時珍國醫國藥，2010，21（7）：1765-1767

R284.1

A

*第一作者：董寧霞（1983-），女，碩士，主管藥師。研究方向：醫院藥學。E-mail：dongnx@163.com。

（2014－11－07）編輯：曾文雪