曲札茋苷平衡溶解度和表觀油水分配系數的測定*

方 芳，陳云建，安利貞，龔云麒

（昆明制藥集團股份有限公司，云南昆明650100）

曲札茋苷為拉薩大黃的主要脂溶性成分，是一種二苯乙烯苷類化合物。據文獻報道二苯乙烯類的化合物具有多種藥理活性，如降血脂[1]、神經保護[2]、并能顯著減輕腦梗塞后的缺血再灌注造成的損傷[3-5]。藥物的理化參數與其在生物體內膜滲透性具有很大相關性，有助于預測藥物動力學性狀，本文對曲札茋苷的平衡溶解度、油水分配系數進行測定[6-15]，為曲札茋苷的吸收研究、新劑型的開發及其他藥學研究提供參考。

1 儀器與試劑

日本島津UV－2450 紫外/可見分光光度計，梅特勒－托利多FE20 型實驗室pH 計，德國Julabo SW22 型恒溫水浴振蕩器（Julabo 技術有限公司）。曲札茋苷對照品由昆明制藥集團股份有限公司藥物研究院自制；鹽酸、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、正辛醇等均為分析純，水為自制重蒸水。

2 方法與結果

2.1 最大吸收波長的確定

精密稱取曲札茋苷適量用75%甲醇配制成濃度為（6μg/mL）的對照品溶液，在波長190～700nm 的波長范圍內掃描，曲札茋苷溶液的最大吸收波長為319nm，見圖1。

圖1 曲札茋苷紫外掃描圖

2.2 曲札茋苷標準曲線的建立

精密稱取曲札茋苷儲備液適量，加蒸餾水稀釋至刻度分別制得濃度為3.06，4.08，5.10，8.16，9.18，10.2μg/mL 的一系列標準溶液，照紫外可見分光光度法，用紫外分光光度計在319 nm 波長處測定吸收度。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，以測定結果計算得線性回歸方程為：Y=0.0709x+0.0169，r2=0.9992，表明曲札茋苷在濃度3.06～10.2μg/mL 范圍內吸光度與濃度呈良好線性關系。

2.3 準確度與精密度考察

按“標準曲線的制備”方法，配制濃度分別為4.02，5.12，6.24mg/L 的曲札茋苷水溶液，在319nm處測定各溶液的吸光度，帶入標準曲線技術實測濃度，每個濃度平行測定6 次，各濃度下測定結果的相對標準偏差（RSD）均小于1.0%，低、中、高3 個濃度下的平均回收率分別為99.04%，99.48%，98.06%.結果表明，該測定方法的準確度和精密度良好。

2.4 水溶液穩定性考察

精密稱取曲札茋苷5.0mg 于50mL 容量瓶中，加適量水超聲至溶解，加水并定容至刻度，精密量取2mL 至50mL 容量瓶中，加水稀釋并定容，得到濃度為4.0μg/mL 的對照品溶液。按照紫外分光光度法，分別于0，10，20，30，40min 測定其吸光度，測定結果的RSD 均小于2.0%，表明曲札茋苷水溶液在40min 內有較好的穩定性，結果見表1。

測定結果表明KPC-XM18 水溶液在40min 內有較好的穩定性。

2.5 0.1mol/L HCL 溶液穩定性考察

精密稱取曲札茋苷5.0mg 于50mL 容量瓶中，加適量0.1mol/L HCL 溶液超聲至溶解，加0.1mol/L HCL 溶液定容至刻度，精密量取2mL 至50mL 容量瓶中，加0.1mol/L HCL 溶液稀釋并定容，得到濃度為4.0μg/mL 的溶液。按照紫外分光光度法，分別于0，10，20，30，40min 測定其吸光度，測定結果的RSD均小于2.0%，表明曲札茋苷水溶液在40min 內有較好的穩定性，結果見表1。

表1 不同溶液的穩定性考察結果

2.6 不同pH 緩沖鹽的配制

按《中華人民共和國藥典》2010 年版附錄配制pH 為：3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 的磷酸鹽緩沖液用pH 計驗證，若有偏離，用0.1mol/L 的HCl 或0.1mol/L的NaOH 校正酸度為所需數值。最后校正結果的pH 分別為3.11，4.13，5.00，6.00，7.12，8.05。

2.7 平衡溶解度的測定

稱取曲札茋苷約0.4g 數份，分別置于50mL 具塞三角瓶中，分別加入水、0.1mol/L HCL、生理鹽水、pH3.11 磷酸鹽緩沖溶液、pH4.13 磷酸鹽緩沖溶液、pH5 磷酸鹽緩沖溶液、pH6 磷酸鹽緩沖溶液、pH7.12磷酸鹽緩沖溶液、pH8.05 磷酸鹽緩沖溶液各40mL，置于37±0.5℃的恒溫水浴中，130r/min 勻速震蕩。分別在2，6，10，24h 吸取上清液，用0.45μm 微孔濾膜過濾棄去初濾液，取續濾液做適當稀釋后，按照紫外分光光度法進行測定.每種介質平行操作3 份，結果見下表2。

表2 不同介質中曲札茋苷溶解度結果

取24h 所測得的濃度為平衡溶解度做出不同pH 的平衡溶解度曲線，如圖2。

圖2 曲札茋苷在不同pH 的平衡溶解度

由圖可以看出：隨著pH 的不斷增加，曲札茋苷的平衡溶解度亦呈增加的趨勢。

2.8 表觀油水分配系數的測定

精密稱取曲札茋苷原料藥適量溶解于水飽和的正辛醇中，配成質量濃度約為15μg/mL 的溶液，精密量取該溶液20mL 置于具塞三角瓶中，再分別加入被正辛醇飽和的水、pH2.00 磷酸鹽緩沖溶液、pH3.01 磷酸鹽緩沖溶液、pH4.02 磷酸鹽緩沖溶液、pH5.01 磷酸鹽緩沖溶液、pH6.02 磷酸鹽緩沖溶液、pH7.00 磷酸鹽緩沖溶液、pH8.00 磷酸鹽緩沖溶液20mL，放入37℃恒溫水浴振蕩器中振搖24h，分別取上、下層液體按照紫外分光光度法在319nm 波長處測定其各自的吸光度，根據公式Papp=Co/Cw 計算其油水分配系數。公式中Papp 為各介質中的表觀油水分配系數、Co 為分配平衡時測得曲札茋苷在正辛醇中的濃度，Cw 為分配平衡時測得曲札茋苷在水相中的濃度。曲札茋苷在不同的pH 值緩沖液中的正辛醇/緩沖液表觀分配系數見表3。

表3 不同的pH 值緩沖液中的正辛醇/緩沖液表觀分配系數

圖3 曲札茋苷在不同pH 緩沖液中表觀油水分配系數

圖3 結果表明：在酸性、中性、偏堿性條件下，正辛醇/緩沖液分配系數受緩沖液的pH 值影響不大。

3 討論

①油水分配系數的測定方法有很多，如搖瓶法、HPLC 法和產生柱法，其中以搖瓶法最為簡便。本研究采用紫外分光光光度測定曲札茋苷的濃度，并且用此種方法測得的線性、重復性和回收率均符合要求，表明該測定方法可行。

②人體的生理環境大致在pH3.0～8.0，參考中國藥典及相關專著中緩沖液的pH 范圍，設計并考察曲札茋苷在pH3.11，4.13，5.00，6.00，7.12，8.05 時的平衡溶解度和表觀油水分配系數。為了模擬生物體內藥物在水相和生物相之間的分配情況，許多實驗都曾用多種有機溶劑來模擬生物相，如氯仿、橄欖油和正辛醇等，目前認為正辛醇更近似生物相，其主要原因是由于正辛醇的極性和溶解性比其他惰性溶劑好，其溶解度參數與生物膜的溶解度參數21.07 MPa1/2一致，可以選用正辛醇作為模擬生物膜相的有機溶劑，因此本研究采用正辛醇-水為模擬系統。

③曲札茋苷的水溶性較差，在水中的平衡溶解度僅為5.77mg/mL，油水分配系數P 為3.12（lgP=0.49），因此疏水性強，但這不是限制曲札茋苷口服吸收的重要原因（一般lgP 大于5 的藥物不易吸收）。藥物溶解度較小導致的溶出速度較慢，是導致藥物口服生物利用度低的主要原因之一。所以對曲札茋苷表觀油水分配系數及平衡溶解度的測定，不僅可為曲札茋苷新劑型的處方工藝提供基礎數據，還為曲札茋苷的構效關系、吸收代謝研究提供參考。

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