微柱凝膠法在檢測(cè)孕婦IgG效價(jià)中的應(yīng)用研究

苗伶俐，孫海潮

微柱凝膠法在檢測(cè)孕婦IgG效價(jià)中的應(yīng)用研究

苗伶俐，孫海潮

目的比較微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗(yàn)法檢測(cè)O型RhD陽(yáng)性孕婦血清中IgG抗-A、抗-B效價(jià)的差異，并界定微柱凝膠法檢測(cè)孕婦IgG效價(jià)的陽(yáng)性臨界值。方法選擇2012年8月～2014年9月血型為O型RhD陽(yáng)性孕婦血清標(biāo)本360例，均進(jìn)行微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗(yàn)法檢測(cè)IgG抗-A、抗-B效價(jià)，比較兩種檢測(cè)方法的結(jié)果差異，確定微柱凝膠法檢測(cè)孕婦IgG效價(jià)的陽(yáng)性臨界值。結(jié)果微柱凝膠法測(cè)定的IgG抗-A和IgG抗-B效價(jià)幾何均數(shù)為試管抗人球蛋白試驗(yàn)法測(cè)定的2倍；微柱凝膠法檢測(cè)IgG抗-A和IgG抗-B的陽(yáng)性率為72.8%和67.8%，顯著高于試管抗人球蛋白試驗(yàn)法檢測(cè)的陽(yáng)性率(45.6%和34.4%)(P＜0.05)。微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗(yàn)法測(cè)定IgG抗-A和IgG抗-B效價(jià)結(jié)果均呈高度正相關(guān)（rA= 0.869，rB=0.912,P＜0.05），根據(jù)回歸方程計(jì)算微柱凝膠法具有臨床意義的IgG抗-A和IgG抗-B效價(jià)的陽(yáng)性臨界值分別為128和121。結(jié)論微柱凝膠法檢測(cè)孕婦IgG效價(jià)較試管抗人球蛋白試驗(yàn)法更簡(jiǎn)便、快捷，靈敏度高。對(duì)其陽(yáng)性臨界值的界定，可為臨床診斷提供可靠的依據(jù)。

微柱凝膠法；試管抗人球蛋白試驗(yàn)法；孕婦；IgG；效價(jià)

新生兒溶血病是由于母嬰血型不合，母體血清中的IgG類(lèi)抗體通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內(nèi)，引起胎兒紅細(xì)胞破壞，導(dǎo)致胎兒不同程度溶血的一種免疫性溶血性疾病[1-2]。在疾病的預(yù)防中，動(dòng)態(tài)檢測(cè)孕婦血清IgG類(lèi)抗-A和抗-B效價(jià),是評(píng)估和診斷新生兒溶血病發(fā)生的重要指標(biāo)[3]。傳統(tǒng)檢測(cè)方法是試管抗人球蛋白試驗(yàn)法，但是存在應(yīng)用復(fù)雜、測(cè)定效果不敏感等缺點(diǎn)[4]。微柱凝膠法是一種利用凝膠中的孔徑大小，通過(guò)離心分隔游離紅細(xì)胞與凝集紅細(xì)胞的方法[5]。離心后游離紅細(xì)胞沉降于柱底，凝集紅細(xì)胞浮于上方或分散于凝膠柱中[6]。其具有操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、靈敏度高、結(jié)果易于判斷等優(yōu)點(diǎn)，并且凝膠中含抗人球蛋白，可檢出濃度較低的IgG類(lèi)抗體，可避免冷凝集素對(duì)配血造成的影響[7-8]。但微柱凝膠法檢測(cè)孕婦IgG效價(jià)的參考值目前尚未確定，因此，本研究旨在比較微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗(yàn)法檢測(cè)O型RhD陽(yáng)性孕婦血清中IgG抗-A、抗-B效價(jià)的差異，并界定微柱凝膠法檢測(cè)孕婦IgG效價(jià)的陽(yáng)性臨界值，以期為臨床診療提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選擇2012年8月～2014年9月我院收治的血型為O型RhD陽(yáng)性孕婦為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：妊娠12~40 w；配偶均為非O型RhD陽(yáng)性者；知情同意。共納入360例，年齡23~39(31.92± 4.19)歲；平均妊娠(25.09±4.19)w；丈夫血型為A型180例，B型180例。

1.2 主要試劑與設(shè)備LB-37試劑卡孵育器，XHZ-111A型血小板恒溫振蕩保存箱，KJX-IA冰凍血漿解凍箱，微柱凝膠配血系統(tǒng)抗球蛋白試劑卡，抗人球蛋白試劑(羊免疫血清)、ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒（4%標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞）、ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒（0.8%標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞）均購(gòu)自達(dá)美中國(guó)有限公司。

1.3 標(biāo)本處理抽取360例受檢孕婦血2 ml，置于37℃水浴1 h，離心分離血清與紅細(xì)胞。取400μl血清標(biāo)本與400μl 0.2 mol/L 2-ME應(yīng)用液充分混勻，置37℃水浴3~4 min，充分裂解血清中抗體，并采用單克隆抗-A、抗-B做滅活對(duì)照。將經(jīng)2-ME處理后的血清，用pH 7.0~7.4生理鹽水做倍比稀釋?zhuān)♂尪确謩e為1∶2及其倍數(shù)，直到1∶256。用鹽水法確定1∶2稀釋度管IgM抗體已被破壞，取雙管做平行試驗(yàn)，分別檢測(cè)抗-A、抗-B效價(jià)。

1.4 微柱凝膠法測(cè)定取微柱凝膠配血系統(tǒng)抗球蛋白試劑卡，在微管內(nèi)各加入50μl與孕婦丈夫同型的0.8%標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，再依次加入上述處理的稀釋度為1∶2及其倍數(shù)(直到1∶512)的血清50μl，置專(zhuān)用孵育器內(nèi)37℃孵育15min，再放入專(zhuān)用離心機(jī)內(nèi)離心5min(900 r/min，2min；1500 r/min，3min)，以出現(xiàn)1+凝集的最高稀釋度的倒數(shù)為抗體效價(jià)。

1.5 試管抗人球蛋白試驗(yàn)法測(cè)定取經(jīng)2-ME處理的稀釋度為1∶2及其倍數(shù)(直到1∶512)血清各100μl，用4%A型、B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，抗人球蛋白試劑做IgG抗-A、抗-B效價(jià)的測(cè)定，以出現(xiàn)1+凝集的最高稀釋度的倒數(shù)為抗體效價(jià)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法選擇SPSS14.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，效價(jià)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，陽(yáng)性率采用χ2檢驗(yàn)，同時(shí)行直線(xiàn)相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測(cè)抗-A效價(jià)結(jié)果比較兩種方法測(cè)定180份標(biāo)本IgG抗-A效價(jià)結(jié)果見(jiàn)表1。微柱凝膠法測(cè)定的IgG抗-A效價(jià)幾何均數(shù)為249.87，是試管抗人球蛋白試驗(yàn)法測(cè)定的IgG抗-A效價(jià)幾何均數(shù)120.79的2.07倍(P＜0.05)。

表1兩種方法測(cè)定180例標(biāo)本l gG抗A效價(jià)分布(例）

表2 兩種方法測(cè)定180例標(biāo)本lgG抗B效價(jià)分布(例）

2.2 兩種方法檢測(cè)抗-B效價(jià)結(jié)果比較在180份標(biāo)本中，微柱凝膠法測(cè)定的IgG抗-B效價(jià)幾何均數(shù)為156.03，是試管抗人球蛋白試驗(yàn)法測(cè)定的IgG抗-B效價(jià)均數(shù)75.91的2.06倍(P＜0.05)。兩種方法測(cè)定IgG抗-B效價(jià)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 兩種方法陽(yáng)性檢出率比較以臨床上判斷胎兒及新生兒溶血有意義的IgG抗-A效價(jià)≥64判為陽(yáng)性，微柱凝膠法檢測(cè)出IgG抗-A陽(yáng)性131例，陽(yáng)性率為72.8%，試管抗人球蛋白試驗(yàn)法檢測(cè)出IgG抗-A陽(yáng)性82例，陽(yáng)性率為45.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；以臨床上判斷胎兒及新生兒溶血有意義的IgG抗-B效價(jià)≥64判為陽(yáng)性，微柱凝膠法檢測(cè)出IgG抗-B陽(yáng)性122例，陽(yáng)性率為67.8%，試管抗人球蛋白試驗(yàn)法檢測(cè)出IgG抗-B陽(yáng)性62例，陽(yáng)性率為34.4%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.4 兩種方法相關(guān)性及線(xiàn)性分析微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗(yàn)法測(cè)定IgG抗-A效價(jià)結(jié)果呈高度正相關(guān)（rA=0.869，rB=0.912,P＜0.05），計(jì)算線(xiàn)性回歸方程為YA=1.2047+0.9389X和YB=0.3214+ 1.1012X。以試管抗人球蛋白試驗(yàn)法IgG抗-B效價(jià)64為臨床意義臨界值，根據(jù)回歸方程計(jì)算，微柱凝膠法具有臨床意義臨界值的IgG抗-A和IgG抗-B效價(jià)分別為128和121。

3 討論

在輸血中，準(zhǔn)確的交叉配血是臨床安全、有效輸血的重要保證。而對(duì)于預(yù)防新生兒溶血病，積極進(jìn)行交叉配血檢測(cè)與監(jiān)測(cè)意義重大[9]。由于新生兒溶血病的病情程度與母體血清IgG型抗-A(B)血型抗體效價(jià)存在一定的相關(guān)性，應(yīng)用科學(xué)有效的方法檢測(cè)孕產(chǎn)婦血清IgG抗-A(B)抗體效價(jià)，是臨床上診斷新生兒溶血病的重要檢查手段[10]。目前在臨床上常用試管抗人球蛋白試驗(yàn)法檢測(cè)孕婦血清IgG抗-A、抗-B效價(jià)，雖然應(yīng)用范圍比較廣，但是操作繁瑣，反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)，不適用于大批量樣本的檢測(cè)[11]。

微柱凝膠試驗(yàn)(MGT)由于操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、靈敏度高，已在國(guó)內(nèi)廣泛用于不完全抗體篩查、交叉配血、血型鑒定、抗體鑒定等[12]。本研究對(duì)360例O型RhD陽(yáng)性孕婦血清標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果顯示，微柱凝膠法測(cè)定的IgG抗-A、抗-B效價(jià)幾何均數(shù)為試管抗人球蛋白試驗(yàn)法測(cè)定的2倍；微柱凝膠法檢測(cè)IgG抗-A和IgG抗-B的陽(yáng)性率為72.8%和67.8%，顯著高于試管抗人球蛋白試驗(yàn)法檢測(cè)的陽(yáng)性率(45.6%和34.4%)(P＜0.05)。說(shuō)明微柱凝膠法比試管抗人球蛋白試驗(yàn)法的敏感性高，主要在于其結(jié)果清晰易辨，靈敏度較高，能排除某些局限性干擾，如白細(xì)胞、血小板、纖維蛋白的干擾等。

當(dāng)前臨床上多以試管抗人球蛋白試驗(yàn)法測(cè)得IgG抗-A（B）效價(jià)64作為采取干預(yù)措施的臨界值[13]。而微柱凝膠法檢測(cè)具有更高的靈敏度，若以傳統(tǒng)試管抗人球蛋白試驗(yàn)法的效價(jià)64為臨界值，將會(huì)導(dǎo)致對(duì)患病風(fēng)險(xiǎn)的過(guò)高評(píng)估[14]。因此，應(yīng)用微柱凝膠法測(cè)定IgG抗-A（B）效價(jià)，應(yīng)重新確定其具有臨床意義的臨界值。本研究根據(jù)回歸方程計(jì)算，微柱凝膠法具有臨床意義臨界值的IgG抗-A和IgG抗-B效價(jià)分別為128和121。

總之，微柱凝膠法用于檢測(cè)孕婦IgG效價(jià)，較試管抗人球蛋白試驗(yàn)法更簡(jiǎn)便、快捷，靈敏度高。對(duì)其臨界值的界定，可為臨床診斷提供可靠的依據(jù)。

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Application ofmicro column gelmethod to detection of pregnantwomen's IgG titer

Miao Lingli1,Sun Haichao21.Department of Blood Transfusion;2.Department of Laboratory,Xingyuan Hospital of Yulin City, Yulin,Shaanxi,719000,China

Objective Tomake comparison between the differences in the detection of IgG anti-A and anti-B titer in the serum of pregnant women with O-blood type and positive RhD by the methods of micro column gel and vitro anti-human globulin test respectively,and to define the positively critical values of themicro column gelmethod for the detection of pregnantwomen's IgG titer.Methods Between August2012 and September 2014,there were 360 pregnantwomen with the O blood type and positive RhD whose serum sampleswere chosen to detect the IgG anti-A and anti-B titer by themethods ofmicro column gel and vitro anti-human globulin test respectively.Comparison wasmade between the results of the twomethods.The positively critical value of themicro column gel method for the detection of pregnant women's IgG titer was defined.Results The geometric mean of IgG anti-A and anti-B titer detected bymicro column gelmethod was twice than that detected by vitro anti-human globulin test.The positive rates of IgG anti-A and anti-B titer detected by micro column gel was 72.8%and 67.8%,which were significantly higher than those detected by vitro anti-human globulin test(45.6%and 34.4%)(P＜0.05).The results of IgG anti-A and anti-B titer detected by bothmethod all had a high positive correlation(rA=0.869,rB=0.912,P＜0.05).The positively critical values of the IgG anti-A and anti-B titerwere 128 and 121 according to the regression equation calculationmethod ofmicro column gel.Conclusion As to the detection of pregnantwomen's IgG blood group,micro column gelmethod ismore convenient and quicker and has higher sensitivity than vitro anti-human globulin test.The definition of the positively critical value by the formermethod can provide a reliable basis for the clinical diagnosis.

micro-column gelmethod;vitro anti-human globulin test;pregnantwoman;IgG;titer

R 446.119/714.15

A

1004-0188（2015）08-0859-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2015.08.016

2015-02-10）

719000陜西榆林，榆林市星元醫(yī)院輸血科（苗伶俐），檢驗(yàn)科（孫海潮）