鵝源大腸桿菌免疫鵝抗體水平的研究

秦淑美鄒建香

(1.江蘇金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 2.江蘇金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600)

鵝源大腸桿菌免疫鵝抗體水平的研究

秦淑美1鄒建香2

(1.江蘇金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600; 2.江蘇金湖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇金湖 211600)

鵝的各年齡段都易感大腸桿菌病,給鵝的養(yǎng)殖造成很大的損失。本試驗(yàn)通收集不同血清型的大腸桿菌等量混合滅活后免疫鵝,通過檢測鵝血清中抗體的水平及對同血清型細(xì)菌的抵抗能力,尋找預(yù)防和控制鵝大腸桿菌病方法。

鵝源大腸桿菌 ;免疫;抗體;抵抗力

大腸桿菌是動(dòng)物腸道中的常在菌，10～15%的大腸桿菌屬于有致病力的血清型。鵝大腸桿菌病是鵝感染致病性大腸桿菌引起的一種急性或慢性的細(xì)菌性傳染病。鵝感染大腸桿菌后，由于其年齡、抵抗力以及大腸桿菌的致病力、感染途徑等不同因素，會(huì)產(chǎn)生許多癥狀和病變不同的病。如急性敗血癥、氣囊炎、肝周炎、心包炎、卵黃性腹膜炎、輸卵管炎、眼炎、關(guān)節(jié)炎、肉芽腫。

本試驗(yàn)共搜集6株（編號(hào)為1#～6#）來自安徽、江蘇地方的雛鵝、青年鵝、產(chǎn)蛋的母鵝的O1、O2、O6、O39等六株不同血清型大腸桿菌的菌株，將這6菌株分別用液體培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)后，再用涂布法固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，18h后，收集細(xì)菌，分2份，一份加入0.5%福爾馬林搖勻37℃放置72h后離心濃縮后置4℃保存。另一份直接離心濃縮后置4℃保存。

1 材料和方法

1.1 材料

（1）免疫抗原：每ml含滅活細(xì)菌數(shù)各株各10億（共60億）的5%Al（OH）3的生理鹽水，100ml。

（2）攻毒液：每ml含活細(xì)菌數(shù)各株各20億的的生理鹽水，50ml。

（3）檢測抗原：每株分別配成滅活細(xì)菌數(shù)為60億/ml作為檢測抗原，30ml。

（4）18日齡的鵝18只。

1.2 方法

（1）第1d，采取18只2ml 18日齡的鵝血，分離血清，檢測血清中檢測抗原的抗體。檢測抗體的方法為：用U型96孔微量板分別加入30μl的生理鹽水，倍比稀釋待檢血清至第11孔，最后1孔為生理鹽水對照，每份待檢血清各稀釋6排，每排分別加入30μl1#～6#檢測抗原。震蕩混勻抗原血清后，用封板膜封板，置37℃恒溫箱，24h后觀察結(jié)果。從出現(xiàn)有凝集現(xiàn)象的孔做為有抗體效價(jià)的依據(jù)。同時(shí)設(shè)置陽性血清、陰性血清和生理鹽水對照。

（2）用免疫抗原肌肉注射12只18日齡的鵝，每只鵝1ml，其余6只作為攻毒對照和空白對照。（3）第6d，采2ml鵝血，分離血清，檢測各抗原的抗體。（4）第10d，采2ml鵝血，分離血清，檢測各抗原的抗體。（5）第10d下午配攻毒液，攻毒，攻毒情況如下：

是否免疫是否攻毒量(m1)0.51.00.50數(shù)量(只)6633編號(hào)1～67～1213～1516～18

（6）第11d，觀察鵝群整體狀況，包括死亡情況，精神狀態(tài)，采食、飲水，是否拉稀等糞便的情況，運(yùn)動(dòng)及羽毛的整潔情況。及時(shí)做好記錄并對死亡鵝進(jìn)行剖解及細(xì)菌分離、鑒定。

（7）第12～15d，繼續(xù)觀察鵝群狀況并及時(shí)做好記錄。

（8）第16d，采2ml鵝血，分離血清，檢測各抗原的抗體。

3 結(jié)果

（1）第1d，18日齡的鵝血清用檢測抗原檢測均沒有1#～6#菌株的抗體：

（2）第6d，接種1周后的鵝血清檢測的1#～6#菌株抗體，12只鵝明細(xì)情況如下：

1#（2，2，2，1，2，2，1，4，3，2，3，3）log2，平均抗體滴度2.3 log2；2#（2，2，4，3，2，3，1，2，2，2，2，2）log2，平均抗體滴度2.3log2；

3#（2，3，2，2，3，2，2，3，2，2，2，2），平均抗體滴度為2.3log2；

4#（2，2，1，1，2，2，2，2，2，1，2，2）log2，平均抗體滴度為1.8 log2，

5#（2，3，1，1，2，2，2，3，2，3，2，3）log2，平均抗體滴度為2.2log2；

6#（2，3，2，2，3，3，3，3，3，2，3，2）log2，平均抗體滴度為2.6log2。

（3）第10d，接種10d后，18只鵝血清檢測1#～6#菌株抗體，12只鵝明細(xì)情況如下：

1#（4，3，3，4，3，4，3，4，3，3，2，3）log2，平均抗體滴度3.3 log2；2#（3，3，3，3，3，4，4，5，4，4，3，3）log2，平均抗體滴度3.5log2；

3#（3，4，3，3，5，3，4，4，3，3，3，4）log2，平均抗體滴度為3.5log2；

4#（2，3，3，3，3，3，3，3，3，3，2，4）log2，平均抗體滴度為2.9log2，5#（4，3，4，3，3，4，3，3，4，4，4，3）log2，平均抗體滴度為3.5log2；6#（3，3，4，4，4，4，3，3，4，3，4，4）log2，平均抗體滴度為3.6log2。

（4）攻毒1d后，2只攻毒對照的雛鵝死亡。剖檢，各臟器呈敗血癥狀，血液不凝結(jié)。心包積液，心包膜增厚，肝、氣囊表面有滲出物。肝、脾腫大，腸道無明顯病變。用麥康凱分離肝、脾、血液，可見粉紅色菌落。分離得到的細(xì)菌進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)。

（5）其余攻毒鵝精神狀態(tài)沉郁，羽毛松亂，采食量明顯下降，臥地不動(dòng)，糞便呈白色，較稀薄，泄殖腔下方羽毛潮濕、污穢、粘連。12只免疫鵝中，攻毒1ml的6只鵝精神狀態(tài)及采食量均較攻毒0.5ml的6只鵝差。空白對照的3只鵝精神狀態(tài)、飲食均正常。

（6）第12～15d，攻毒的12只免疫鵝逐漸恢復(fù)正常采食量和精神狀態(tài)，生長發(fā)育與空白對照一致。攻毒對照組的1只鵝，生長緩慢，較其他鵝瘦小，采食量少，喜臥，精神狀態(tài)差。空白對照的3只鵝精神狀態(tài)、飲食正常。

（7）第16d，免疫、攻毒的12只鵝及3只空白對照在確認(rèn)發(fā)育正常后，采血淘汰。鵝血清檢測1#-6#菌株抗體，明細(xì)如下：

1#（5，3，6，4，4，5，4，4，3，5，4，5）log2，平均抗體滴度4.3 log2；

2#（4，5，5，5，5，5，4，6，4，5，5，5）log2，平均抗體滴度4.8log2；

3#（5，5，5，4，5，5，5，5，3，4，5，5）log2，平均抗體滴度為4.7log2；

4#（3，4，4，4，5，5，4，4，3，4，5，5）log2，平均抗體滴度為4.2log2，5#（4，4，5，4，6，5，4，6，4，5，4，6）log2，平均抗體滴度為4.8log2；6#（5，6，4，4，4，6，4，5，5，6，4，5）log2，平均抗體滴度為4.8log2。

（8）攻毒對照的1只鵝撲殺，內(nèi)臟無明顯病變，用麥康凱培養(yǎng)基分離培養(yǎng)肝、脾、血，無細(xì)菌生長。

4 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)通過收集不同血清型菌株的細(xì)菌進(jìn)行滅活后，給雛鵝接種。接種滅活細(xì)菌6d后，鵝的體內(nèi)已產(chǎn)生這幾種血清型細(xì)菌的免疫抗體。鵝血清中各菌株抗體水平在一定時(shí)間里，呈現(xiàn)上升趨勢。而攻毒對照組死亡鵝體內(nèi)器官和血液里分離到不同血清型的大腸桿菌，細(xì)菌在未免疫鵝體內(nèi)快速繁殖，釋放毒素，引起敗血癥，導(dǎo)致鵝死亡。

本試驗(yàn)等量混合制成的多價(jià)的抗原注射試驗(yàn)鵝，10d后就可保護(hù)加倍量活細(xì)菌的攻擊，可有效的防止相同血清型大腸桿菌病的發(fā)生。免疫鵝攻毒試驗(yàn)后，這幾種血清型的大腸桿菌抗體在鵝體內(nèi)再次上升，在一定時(shí)間內(nèi)能有效保護(hù)鵝群，抵抗相同或有交叉抗原的大腸桿菌再次感染。本試驗(yàn)不使用抗生素，可防止大腸桿菌耐藥菌株的產(chǎn)生。

[1] 王永坤.水禽病診斷與防治手冊[M].上海科學(xué)技術(shù)出版社，2002.