兩種復方磺胺嘧啶混懸液體外等效性研究

李朋朋 張繼穎 張 聰

(國家獸用藥品工程技術研究中心,河南洛陽 471003)

兩種復方磺胺嘧啶混懸液體外等效性研究

李朋朋 張繼穎 張 聰

(國家獸用藥品工程技術研究中心,河南洛陽 471003)

目的:為了評價自制復方磺胺嘧咤混懸液與進口制劑速服寧是否具有體外等效性。方法:通過測定不同時間點(5、15、30、60、90、120、180、240、300、360min)兩種制劑在四種溶出介質(pH=1.4、pH=4.5、pH=6.8及純化水)中的累積溶出量,計算二者在不同介質中的相似因子(f2),考察二者體外溶出曲線的一致性,從而判斷二者是否具有體外等效性。結果:自制復方磺胺嘧咤混懸液與速服寧在四種溶出介質中的溶出曲線具有一致性。結論:自制復方磺胺嘧咤混懸液與速服寧具有一致的體外溶出度表現(xiàn),說明二者具有體外等效性。

復方磺胺嘧咤混懸液;溶出度;一致性

磺胺嘧啶是一種磺胺類抗菌藥物，其抗菌譜較廣，可用于革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和許多原核生物感染。甲氧芐啶屬抗菌增效劑，其抗菌譜與磺胺類相似而效力較強。復方磺胺嘧啶混懸液是磺胺嘧啶和甲氧芐啶的復方制劑，它不僅能提高療效，縮短療程，同時還能減少耐藥菌株產生，獸醫(yī)臨床上主要用于防治雞大腸桿菌、沙門氏菌感染[1]。

仿制制劑與參比制劑的溶出曲線相似并不意味著二者一定具有生物等效性，但該法可降低二者出現(xiàn)臨床差異的風險。本文通過4種介質溶出曲線的研究，采用合理數(shù)據(jù)分析，充分證明仿制制劑（洛陽惠中獸藥有限公司研制的復方磺胺嘧啶混懸液）與參比制劑（法國維克制藥集團生產的速服寧）的體外溶出曲線具有同等性。

1 材料與方法

1.1 器材

溶出度測定儀，型號：RC-8DS，天津市新天光技術開發(fā)有限公司；透析袋，規(guī)格8000-14000；高效液相色譜儀，型號：e2695，美國Waters公司；酸度計，型號：SenenEasy，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；電子分析天平，型號：Ab-265S，梅特勒-托利多集團公司。

1.2 藥品與試劑

速服寧，批號：4EUV，規(guī)格：100ml：磺胺嘧啶40g+甲氧芐啶8g，法國維克制藥集團；

復方磺胺嘧啶混懸液，批號：20140901，規(guī)格：100ml：磺胺嘧啶40g+甲氧芐啶8g，洛陽惠中獸藥有限公司；

鹽酸、冰醋酸、醋酸鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、吐溫80等均為分析純。

1.3 試驗方法

1.3.1 溶出介質

各溶出介質[2]及配制方法見表1。

表1 溶出介質

1.3.2 半透膜前處理

將透析袋剪成10cm段，用純化水洗滌后煮沸10min，冷卻后放4℃保存，做為試驗用半透膜。

1.3.3 體外溶出度試驗方法

精密稱取1g速服寧與自制復方磺胺嘧啶溶液，分別置透析袋中，并加入9ml溶出介質，透析袋兩端用透析夾夾緊，放入已預熱至37℃的溶出介質中，溶出介質體積為900ml，攪拌槳轉速為100r/min，分別于5、15、30、60、90、120、180、240、300、360min（pH1.4的溶出介質采樣時間點為5、15、30、60、90、120min）取樣1ml，高效液相色譜法測定磺胺嘧啶含量。

1.3.4 色譜條件

Agilent HC-C18（150×4.5mm，5μm）色譜柱；以0.025mol/ L磷酸溶液-乙腈-甲醇=70：25：5為流動相；流速0.75ml/min；檢測波長235nm；柱溫30℃；進樣量10μl。

各時間點采集的樣品過濾，精密量取10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取磺胺嘧啶對照品，制成濃度為0.16mg/ml的溶液，精密量取10μl，注入液相色譜儀。以外標法按峰面積計算樣品中磺胺嘧啶的含量。

1.3.5 溶出曲線相似性的比較與判定

自制復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧溶出曲線相似性的比較用非模型依賴法中的相似因子（f2）法，將自制復方磺胺嘧啶混懸液中磺胺嘧啶的平均溶出量與速服寧中磺胺嘧啶的平均溶出量進行比較，計算公式如下。

Rt為t時間參比制劑平均溶出量；Tt為t時間仿制制劑平均溶出量；n為取樣時間點的個數(shù)。

自制復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧的溶出曲線只要滿足下列（1）中任何一個評判標準[3]，即可判定二者的溶出曲線具有“相似性”，但至少在其中的一個溶出介質中，參比制劑在規(guī)定的時間內平均溶出率達85%以上；只要滿足下列（2）中的任何一個評判標準，即可判定二者溶出曲線具有“同等性”。

（1）相似性

參比制劑在規(guī)定時間內平均溶出率達85%以上時，f2因子大于42；

參比制劑在規(guī)定時間內平均溶出率達50%以上但未達85%時，f2因子大于46；

參比制劑在規(guī)定時間內平均溶出率未達50%時，f2因子大于53；

（2）同等性

參比制劑在規(guī)定時間內平均溶出率達85%以上時，f2因子大于50；

參比制劑在規(guī)定時間內平均溶出率達50%以上但未達85%時，f2因子大于55；

參比制劑在規(guī)定時間內平均溶出率未達50%時，f2因子大于61；

2 結果與分析

自制復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧在四種溶出介質中的溶出試驗結果見表2，二者在四種溶出介質中溶出曲線的相似性判定結果見表3。復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧中磺胺嘧啶在四種溶出介質中的溶出曲線見圖1。

表3 自制復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧的溶出曲線在四種介質中的相似性判定結果

由試驗結果可知，復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧中磺胺嘧啶在pH=6.8的溶出介質中，溶出曲線具有相似性，在其余三種溶出介質中，溶出曲線均具有同等性，因此二者體外具有等效性。

3 討論

3.1 加藥方法設計

自制復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧均為混懸液體制劑，不能將藥物直接加入溶出杯中，因此采用半透膜法，將混懸液加入透析袋內，通過測定一定時間內從透析袋中擴散出的藥量來考察兩制劑的溶出度，結果表明該方法可用于檢測混懸劑的溶出度。

3.2 溶出介質及轉速的選擇

《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則》中提到在多種介質中至少要有一種溶出介質中的溶出量要達85%以上，在前期試驗摸索過程中，磺胺嘧啶在四種溶出介質中的溶出量均達不到規(guī)定。之后嘗試通過添加表面活性劑及酶物質來提高溶出量，結果顯示溶出介質中加入酶物質未能提高磺胺嘧啶的溶出量，而加入0.05%的吐溫-80后溶出量提高了56.6%，之后調整攪拌槳轉速為100r/min，在純水中溶出6h后，磺胺嘧啶的溶出量可達87.2%，大于85%，符合上述指導原則規(guī)定，因此選定的溶出介質及攪拌槳轉速可用于測定自制復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧溶出曲線的測定。

3.3 體外等效性評價方法探索

仿制藥是與被仿制藥具有相同的活性成分、劑型、給藥途徑和治療作用的替代藥品，能降低用藥成本，提高藥物普及性及社會經濟效益。國內制劑與國外參比制劑無論在原料來源還是工藝上都有一定的差異，因此進行二者的等效性評價能確保自研制劑的有效性與安全性，在制劑效果不明確的情況下直接進行動物體內的生物等效性評價易造成試驗失敗及浪費，若能在生物等效性之前用體外的方法評價二者的等效性，可以提高制劑研究的成功率及工作效率，但此部分工作仍無明確標準指導，因此筆者參考人用普通口服固體制劑的評價方法[4][5]，通過對比溶出曲線的一致性，對自制復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧進行了體外等效性評價，結果顯示二者具有體外等效性。但這并不意味著其生物等效，需要進一步進行生物等效性研究。

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圖1 自制復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧在四種溶出介質中的溶出曲線

表2 自制復方磺胺嘧啶混懸液與速服寧在四種溶出介質中的溶出率結果

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