羅哌卡因與舒芬太尼對創(chuàng)面愈合的影響

芮睿 程橋 凡浙錄

羅哌卡因與舒芬太尼對創(chuàng)面愈合的影響

芮睿 程橋 凡浙錄

目的 研究羅哌卡因聯(lián)合舒芬太尼對小鼠創(chuàng)面愈合的影響。方法 健康SD小鼠128只，體質(zhì)量20～25 g，應用隨機數(shù)字表法，將128只小鼠均分為4組（n=32）：空白生理鹽水組（NS組），羅哌卡因組（L組），舒芬太尼組（S組），羅哌卡因+舒芬太尼組（L+S組）。于制造創(chuàng)面前10 min，L和L+S組皮下浸潤0.5%羅哌卡因1.0 mL/kg，S和L+S組腹腔注射舒芬太尼3.0 μg/kg稀釋到1.0 mL。分別于第3、7、10天每組取8只小鼠，觀察創(chuàng)面愈合率，ELISA法測定GM-CSF的表達情況，每組另8只小鼠觀察完全愈合時間。結果 L+S組愈合率3、7、10天分別為（39.394±1.164）%，（64.144±1.901）%，（83.543±1.120）%高于其他3組，愈合時間（10.250±0.463）d短于其他3組（P＜0.05），粒-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）的含量高于NS組和S組（P＜0.05），但與L組相比無統(tǒng)計學意義。結論 皮下浸潤0.5%羅哌卡因和腹腔注射舒芬太尼均可促進創(chuàng)面愈合，聯(lián)合用藥效果優(yōu)于單獨使用。

羅哌卡因；舒芬太尼；創(chuàng)面愈合

目前，常用的鎮(zhèn)痛方法包括靜脈持續(xù)鎮(zhèn)痛泵法、局部浸潤麻醉法和硬膜外止痛法，而多模式聯(lián)合鎮(zhèn)痛已表現(xiàn)出多種優(yōu)點。腹部[1]、胸科[2]及骨科[3]手術使用切口局部浸潤聯(lián)合靜脈持續(xù)鎮(zhèn)痛法止痛效果明確，減少術后并發(fā)癥的發(fā)生，減少單一模式鎮(zhèn)痛藥的使用量，縮短住院時間。0.5%羅哌卡因是一種長效局麻藥，切口局部浸潤可以促進傷口愈合[4]，舒芬太尼是一種強效阿片類鎮(zhèn)痛藥，廣泛應用于術后鎮(zhèn)痛。本課題主要研究羅哌卡因局部浸潤聯(lián)合舒芬太尼全身給藥對小鼠傷口愈合的影響及其與粒-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）的關系，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料 健康清潔級SD雄性小鼠128只，體質(zhì)量20～25 g，由山西省腫瘤醫(yī)院動物中心提供。按照完全隨機對照原則，將128只小鼠隨機均分為4組（n=32）：空白生理鹽水組（NS組），羅哌卡因組（L組），舒芬太尼組（S組），羅哌卡因+舒芬太尼組（L+S組），每只小鼠分籠飼養(yǎng)。

1.2 方法 小鼠稱重后，采用0.6%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉（0.1 mL/10 g），8.0%硫化鋇小鼠背部脫毛，常規(guī)消毒后，于小鼠背部脊柱中線近頭側(cè)做一個0.8 cm×0.8 cm創(chuàng)面，剪開全層皮膚至皮下深筋膜。NS組于制作創(chuàng)面前10 min皮下浸潤0.9%生理鹽水1.0 mL/kg，腹腔注射0.9%生理鹽水1.0 mL；L組于制作創(chuàng)面前10 min皮下浸潤0.50%羅哌卡因1.0 mL/kg，腹腔注射0.9%生理鹽水1.0 mL；S組于制作創(chuàng)面前10 min皮下浸潤0.9%生理鹽水1.0 mL/kg，腹腔注射舒芬太尼3.0 μg/kg稀釋到1.0 mL；L+S組于制作前10 min皮下浸潤0.5%羅哌卡因1.0 mL/kg，腹腔注射舒芬太尼3.0 μg/kg稀釋到1.0 mL。首次給藥之后每12小時追加1次，劑量同首次用藥。

分別于第3、7、10天，每組隨機取8只小鼠，處死后采用透明膜法記錄創(chuàng)面面積，計算創(chuàng)面愈合率，創(chuàng)面愈合率=(初始創(chuàng)面面積-各時相點未愈合面積)/初始創(chuàng)面面積×100%[5]。剪取創(chuàng)緣外4 mm包括創(chuàng)面的皮膚組織，清理皮下組織，用液氮處理后搗碎置于-80℃的冰箱中保存，通過ELISA法測定GM-CSF的表達，并且應用BCA蛋白定量法測定總蛋白的含量，計算二者的比值以比較各組標本中GM-CSF的含量[6]。每組剩余的8只小鼠用來觀察創(chuàng)面完全愈合時間，將肉眼觀察創(chuàng)面完全上皮化作為完全愈合的標準[5]。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，處理數(shù)據(jù)，正態(tài)計量資料采用“x±s”進行描述，多組間均數(shù)比較，采用單因素方差分析，進一步組間比較，應用LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 創(chuàng)面愈合率 L組、S組和L+S組創(chuàng)面愈合率分別于制造創(chuàng)面第3、7、10天明顯高于NS組，并且L+S組高于L組和S組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;L組和S組比較，差異無統(tǒng)計學意義。見表1。

2.2 愈合時間 L組創(chuàng)面愈合時間比NS組縮短（2.000± 0.000）d，S組創(chuàng)面愈合時間比NS組縮短（1.875±0.330）d，L+S組比L組和S組分別縮短（2.125±0.330）d，（2.250±0.415）d，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 4組愈合時間的比較(x±s，d)

2.3 GM-CSF檢測 NS組小鼠制造創(chuàng)面第3天，GMCSF占總蛋白比例達到高峰，第7天較第3天稍下降但仍維持較高水平，第10天明顯降低；L組和L+S組分別與NS組和S組對比，變化趨勢相同，各時相點GM-CSF占總蛋白比例均升高，差異分別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；L+S組與L組對比，S組與NS組對比， GM-CSF占總蛋白比例差異無統(tǒng)計學意義。見表3。

表3 4組GM-CSF含量的比較(x±s，/10萬)

3 討論

由本研究結果可以認為腹腔注射舒芬太尼聯(lián)合創(chuàng)面局部浸潤0.5%羅哌卡因可以促進愈合；單純創(chuàng)面局部浸潤0.5%羅哌卡因和單純腹腔注射芬太尼也可促進傷口愈合，但是沒有聯(lián)合用藥明顯。L組小鼠愈合加快可能與GM-CSF占總蛋白比例增高有關，而S組加快傷口愈合可能與GM-CSF占總蛋白比例無明顯關系。

創(chuàng)面愈合是指某些因素造成皮膚等組織缺損或者斷裂后，機體進行修復的一系列病理生理過程。急性創(chuàng)面愈合包含止血期，炎癥反應期，細胞增殖期，基質(zhì)重建期，4個階段各有特色但又相互協(xié)同，是多種細胞，細胞因子及細胞外基質(zhì)共同參與的復雜的愈復過程。

羅哌卡因一種長效酰胺類局麻藥，0.5%羅哌卡因用于局部麻醉可產(chǎn)生良好的鎮(zhèn)痛效果[4]。由本研究結果可得，0.5%羅哌卡因創(chuàng)面局部浸潤可以加快創(chuàng)面愈合，可能與以下機制有關：（1）羅哌卡因具有抑菌作用，并且表現(xiàn)出濃度依賴性[7]，降低感染機率，促進創(chuàng)面愈合；（2）0.5%羅哌卡因可促進成纖維細胞增殖，膠原生成增多[4]，創(chuàng)面愈合過程中成纖維細胞是主要的修復細胞，由成纖維細胞合成的膠原為表皮細胞爬行提供支架，從而促進愈合；（3）由本研究結果推測0.5%羅哌卡因可促進GM-CSF生成，其在創(chuàng)面愈合過程中發(fā)揮重要作用，可以縮短愈合時間。

而GM-CSF在創(chuàng)面愈合4個階段均產(chǎn)生促進愈合作用：首先止血期，GM-CSF與血小板活化因子聯(lián)合作用，促進組織因子產(chǎn)生，加快止血過程；炎癥期，GM-CSF加強趨化各種炎癥細胞浸潤，促進其分泌多種細胞因子；增生期，GM-CSF直接刺激成纖維細胞及內(nèi)皮細胞增殖，加快再上皮化速度；最后塑形期，促進膠原纖維正常沉積，加快愈合。

舒芬太尼是一種強效阿片類的鎮(zhèn)痛藥，經(jīng)小鼠熱板實驗測得iv 舒芬太尼的鎮(zhèn)痛ED 50為2.8 μg/kg[8]。本研究結果表明，單純腹腔注射3.0 μg/kg舒芬太尼組與舒芬太尼聯(lián)合0.5%羅哌卡因局部浸潤均可以加速創(chuàng)面愈合，且舒芬太尼作用與GMCSF無明顯關系，可能與以下因素有關：（1）舒芬太尼通過作用于下丘及心腦血管中樞，降低交感神經(jīng)興奮性及血漿兒茶酚胺類應激相關激素水平，對應激反應有一定的抑制作用，減輕血糖升高[9]，從而避免應激反應造成的愈合延遲。（2）炎癥是機體對創(chuàng)傷等行為的保護反應，但是過度的炎癥反應可加劇組織損傷，影響創(chuàng)面修復。各種炎癥細胞因子在免疫和炎癥反應中發(fā)揮重要作用，在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)解下，促炎細胞因子和抗炎細胞因子維持一定的平衡，而創(chuàng)傷，疼痛等造成的應激狀態(tài)時，該平衡被打破。IL-6是一種促炎細胞因子，參與急性期的炎癥反應，與傷口愈合有關；IL-10阻斷炎癥發(fā)展過程中的多個環(huán)節(jié)，抑制急性炎癥反應，維持各種細胞因子平衡。舒芬太尼產(chǎn)生有效鎮(zhèn)痛，可以延遲IL-6分泌，降低其峰值濃度，促進IL-10分泌，減輕機體過度炎癥反應，從而促進創(chuàng)面愈合[10]。（3）有研究表明，人體皮膚局部使用阿片類藥物，激活μ受體，促進NO產(chǎn)生，刺激角質(zhì)形成細胞遷移，可能會促進傷口愈合[11]。另外有研究認為，小鼠皮膚局部應用阿片類鎮(zhèn)痛藥，通過誘導stat 3表達，降低IL-6和TNF表達，促進腸道粘膜角質(zhì)細胞遷移，可以促進腸道粘膜愈合[12]。還有研究表示，小鼠腹腔注射嗎啡可以刺激TGF-β 1和MMP-2表達顯著增加，促進組織膠原沉積，增加切口拉伸強度，加快傷口愈合[13]。

由此可見，3組給藥小鼠創(chuàng)面愈合均加快，羅哌卡因聯(lián)合舒芬太尼組創(chuàng)面愈合最快，效果優(yōu)于單純給予0.5%羅哌卡因組和腹腔注射舒芬太尼組。0.5%羅哌卡因局部浸潤麻醉促進愈合與GM-CSF增多有關，腹腔注射舒芬太尼促進小鼠創(chuàng)面愈合與GM-CSF無明顯關系，可能通過其他機制發(fā)揮作用，有待進一步研究確定。

[1] 王錦玉,王菊香.開腹手術后切口局部持續(xù)浸潤麻醉療效的隨機對照研究[J].肝膽胰外科雜志,2013,25(3):207-209.

[2] 丁浩,王智珊,高其厚,等.羅哌卡因局部浸潤聯(lián)合舒芬太尼靜脈鎮(zhèn)痛用于胸科術后鎮(zhèn)痛[J].中國美容醫(yī)學,2012,21(18):388-389.

[3] 趙誠,田志海.舒芬太尼自控靜脈鎮(zhèn)痛復合傷口局部浸潤在全麻骨科手術患者中的應用[J].醫(yī)學臨床研究,2013,30(2):398-399.

[4] 商曉磊,孟葉.不同濃度羅哌卡因浸潤麻醉對大鼠切口愈合的影響[J].中華麻醉學雜志,2012,32(12):1453-1456.

[5] 張贇.GM-CSF對糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合過程中BCL-2表達水平的影響[D].大連醫(yī)科大學,2011.

[6] 王文璽,程橋,凡浙錄,等.局麻藥物對粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子表達及皮膚愈合的影響[J].中國藥物與臨床,2014(6):756-758.

[7] 李秀澤,譚玲.羅哌卡因的研究近況及臨床應用[J].實用醫(yī)藥雜志,2004,21(6):554-555.

[8] 徐露,李元海.舒芬太尼的藥理作用和臨床應用研究進展[J].安徽醫(yī)藥,2011,15(3):375-377.

[9] 張寧平.舒芬太尼的藥理學特點及自控鎮(zhèn)痛的應用進展[J].西南軍醫(yī),2010,12(6):1151-1153.

[10] 董瑤,董飛君,李幼華.脂肪干細胞調(diào)節(jié)創(chuàng)面炎癥反應并促進創(chuàng)面愈合[J].醫(yī)學研究雜志,2012,41(3):100-103.

[11] Goldsmith JR,Uronis JM,Jobin C.Mu opioid signaling protects against acute murine intestinal injury in a manner involving Stat 3 signaling[J]. The American Journal of Pathology,2011,179(2):673-683.

[12] Kuchler S,Wolf NB,Heilmann S,et al.3 D-wound healing model:influence of morphine and solid lipid nanoparticles[J].Journal of Biotechnolo gy,2010,148(1):24-30.

[13] Chang PJ,Chen MY,Huang YS,et al.Morphine enhances tissue content of collagen and increases wound tensile strength[J].Journal of Anesthesia,2010,24(2):240-246.

Objective To study the effect that ropivacaine combined with sufentanil on wound healing in mice. Methods There are 128 health of SD mice, 20-25 G body weight, according to the random number table, 128 mice were divided into 4 groups (n=32): blank Group (NS group) and ropivacaine Group (L group), sufentanil Group (S group), ropivacaine with sufentanil Group (L+S group). Used in manufacture of 10 min,L+S group were subcutaneous injected 0.5% ropicacaine by 1.0 mL/kg, S and L+S groups were abdomainal injected sufentanil solution 1 mL, contains sufentanil 3 μg/kg. Choosing 8 mice in each group at 3, 7 and 10 days after the ops to check its wound healing rate and measure the expression of GM-CSF by the ELlSA method, the 8 left mice in each group were made to check its time of complete healing. Results The healing rate of L+S group that is (39.394±1.164)%, (64.144±1.901)%, (83.543±1.120)% in the 3 th, 7 th and 10 th day of a manufacture wound respectively is higher than the left three groups and the healing time (10.250±0.463)d is also shorter than them (P＜0.05), the expression of GM-CSF is higher than NS group and S group (P＜0.05), but shows no statistical differences with L group. Conclusion Subcutaneous infiltration of 0.5% ropivacaine and intraperitoneal injection of sufentanil may promote the wound healing, combination therapy is better than the alone.

Ropivacaine; Sufentanil; Wound healing

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.8.003

山西 030001 山西醫(yī)科大學麻醉學系 （芮睿） 山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院麻醉科（程橋） 山西醫(yī)科大學麻醉科 （凡浙錄）

程橋 E-mail：490676346@qq.com