HPV L1殼蛋白檢測(cè)聯(lián)合細(xì)胞學(xué)、HPV檢測(cè)診治宮頸病變的臨床價(jià)值

劉 越，梁武鳳*，王世進(jìn)，楊 君，華方方（. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003；. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科，河南 新鄉(xiāng) 45300）

HPV L1殼蛋白檢測(cè)聯(lián)合細(xì)胞學(xué)、HPV檢測(cè)診治宮頸病變的臨床價(jià)值

劉 越1，梁武鳳2*，王世進(jìn)2，楊 君2，華方方2
（1. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003；2. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科，河南 新鄉(xiāng) 453100）

【摘要】目的 探討HPV L1殼蛋白檢測(cè)聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢查、HPV檢測(cè)在宮頸病變?cè)\治中的臨床價(jià)值。方法：收集2014年7月～2015年6月期間，在新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科門診因體檢或發(fā)現(xiàn)宮頸異常就診的符合入組條件的女性1052例，進(jìn)行TCT篩查、HPV分型檢測(cè)，對(duì)一項(xiàng)或兩項(xiàng)結(jié)果異常者進(jìn)行子宮頸組織活檢術(shù)，并對(duì)TCT結(jié)果異常患者采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測(cè)HPV L1殼蛋白的表達(dá)。結(jié)果 156例TCT結(jié)果異常中，意義未明確的非典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASCUS）、低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）、高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）、鱗狀細(xì)胞癌（SCC）的HR-HPV陽(yáng)性率，分別為19.1%（13/68）、35.3%（18/51）、77.8% （21/27）、100%（10/10）。各組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。TCT異常結(jié)果中ASCUS、LSIL、HSIL、SCC在病理組織學(xué)CIN及以上陽(yáng)性率分別為54.4%（37/68），60.8%（31/51），85.2% （23/27），100%（10/10）。各組之間的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。隨著組織病理學(xué)診斷病變級(jí)別越高，HPV L1殼蛋白陽(yáng)性表達(dá)率逐漸下降。結(jié)論 TCT和HPV分型檢測(cè)在宮頸癌篩查中必不可少。HPV L1殼蛋白檢測(cè)可以預(yù)測(cè)宮頸癌前病變的進(jìn)展趨勢(shì)。三者聯(lián)合應(yīng)用可以及早發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，并對(duì)病變進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行合理的評(píng)估。

【關(guān)鍵詞】人乳頭瘤病毒；HPV L1殼蛋白；TCT檢測(cè)；宮頸上皮內(nèi)瘤變

宮頸癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，人乳頭瘤病毒（HPV）是宮頸癌的主要致病因子。HPV持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生的必要前提。宮頸癌是由宮頸上皮內(nèi)瘤變-早期浸潤(rùn)癌-浸潤(rùn)癌這個(gè)量變到質(zhì)變過(guò)程發(fā)展而來(lái)。因此，早期檢查發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變并早期干預(yù)可以明顯降低宮頸癌的發(fā)病率和病死率。TCT和HPV分型聯(lián)合檢測(cè)能夠有效提高宮頸病變的檢出率及準(zhǔn)確率[1]。近幾年相關(guān)研究表明，HPV L1殼蛋白檢測(cè)可以預(yù)測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）的發(fā)展趨勢(shì)[2]。本研究將薄層細(xì)胞學(xué)檢查、HPV分型及HPV L1殼蛋白檢測(cè)三者聯(lián)合應(yīng)用，將其結(jié)果對(duì)比分析，探討其在宮頸病變?cè)\治中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科門診2014年7月～2015年6月因體檢或發(fā)現(xiàn)宮頸異常的女性患者1052例作為研究對(duì)象。入選標(biāo)準(zhǔn)：懷疑宮頸癌病變者；性生活史≥3年；排除有宮頸術(shù)史者、子宮切除者、腫瘤者、妊娠婦女和產(chǎn)后≤6個(gè)月者。患者年齡25～62歲，平均年齡（41.7±10.7）歲。

1.2 方法

1.2.1 薄層細(xì)胞學(xué)檢查

常規(guī)收集宮頸口及頸管的脫落上皮細(xì)胞送檢，制作液基薄層細(xì)胞片2張。1張采用全自動(dòng)超薄液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。另一張用于HPV L1殼蛋白檢測(cè)。細(xì)胞學(xué)診斷采用2001年國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)（NCI）推薦的TBS分級(jí)系統(tǒng)進(jìn)行診斷分為：正常細(xì)胞（NILN），意義未明確的非典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASC—US），低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL），高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL），鱗狀細(xì)胞癌（SCC）。由兩名資深病理科專家讀片。

1.2.2 HPV分型檢測(cè)

采用深圳亞能生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的人乳頭瘤病毒基因分型（23型）檢測(cè)試劑盒，可以檢測(cè)出23種HPV亞型（包括18種高危型及5種低危型）。確定能穩(wěn)定檢出的HPV病原體最低檢測(cè)限為1.0×103copies/mL。結(jié)果按膜條上HPV亞型分布的相應(yīng)著色位點(diǎn)進(jìn)行判讀。操作步驟由檢驗(yàn)科醫(yī)師嚴(yán)格指導(dǎo)下完成。

1.2.3 HPV L1殼蛋白檢測(cè)

先將液基薄層細(xì)胞片放入96%乙醇中固定，然后采用美國(guó)Advance公司生產(chǎn)的賽泰-細(xì)胞／組織人乳頭瘤病毒檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，此檢測(cè)以免疫組織／細(xì)胞化學(xué)和非同位素標(biāo)記核酸分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)，能識(shí)別HPV病毒28種亞型的殼蛋白。具體操作嚴(yán)格按公司提供的操作指南進(jìn)行。HPV L1殼蛋白為核蛋白質(zhì)，細(xì)胞核呈紅色染色為特異性陽(yáng)性染色，如出現(xiàn)≥1個(gè)被紅染的細(xì)胞核即可診斷HPV L1殼蛋白陽(yáng)性。

1.2.4 病理組織學(xué)診斷

經(jīng)患者知情同意，至少1項(xiàng)結(jié)果異常者行子宮頸活檢術(shù)。根據(jù)細(xì)胞異型性的程度和范圍分為:正常或慢性炎癥、輕度不典型增生（CINⅠ）、中度不典型增生（CINⅡ）、重度不典型增生及原位癌（CINⅢ）、宮頸鱗癌（SCC）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)本組研究的數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果與HPV分型比較

156例TCT結(jié)果異常患者中，其中ASCUS、LSIL、HSIL、SCC的HR-HPV陽(yáng)性率，分別為19.1%（13/68）、35.3%（18/51）、77.8%（21/27）、100%（10/10）。隨著TCT級(jí)別越高，HR-HPV陽(yáng)性率越高。各組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。LR-HPV陽(yáng)性主要見(jiàn)于低度宮頸病變。見(jiàn)表1。

表1 TCT檢測(cè)結(jié)果與HPV分型比較 [n（%）]

2.2 細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果與組織病理學(xué)比較

受檢婦女共1052例，其中896例患者檢查結(jié)果為無(wú)宮頸上皮內(nèi)瘤變及良性病變，占85.2%；156例患者為TCT結(jié)果異常，占14.8%。在TCT異常結(jié)果中ASCUS、LSIL、HSIL、SCC在病理組織學(xué)CIN及以上陽(yáng)性率分別為54.4%（37/68），60.8%（31/51），85.2%（23/27），100%（10/10）。各組之間的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。隨著細(xì)胞學(xué)級(jí)別越高，TCT結(jié)果與病理組織學(xué)結(jié)果越符合。見(jiàn)表2。

表2 TCT檢測(cè)結(jié)果與病理組織學(xué)比較

2.3 HPV L1殼蛋白表達(dá)情況與組織病理學(xué)比較

在不同病理組織學(xué)結(jié)果中，HPV L1殼蛋白的陽(yáng)性率分別為58.2%（32/55）、61.2%（30/49）、25.7%（9/35）、12.5%（1/8）、0（0/9）。其中正常/炎癥組與CINⅠ組、SCC組之間的HPV L1殼蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CINⅠ組與CINⅡ/Ⅲ組、SCC組之間的HPV L1殼蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），SCC組無(wú)HPV L1殼蛋白表達(dá)。隨著組織病理學(xué)診斷病變級(jí)別越高，HPV L1殼蛋白陽(yáng)性表達(dá)率逐漸下降。見(jiàn)表3。

表3 HPV L1殼蛋白在各級(jí)別宮頸病變中的表達(dá)情況 [n（%）]

3 討 論

宮頸癌是女性僅次于乳腺癌的第二大惡性腫瘤[3]。HPV是導(dǎo)致宮頸癌主要的致病因子。16～28歲年輕性活躍婦女HPV感染率最高（20%～40%）[4]，但大多為一過(guò)性感染。在HPV感染后8～12個(gè)月后可發(fā)展為CIN，在經(jīng)過(guò)8～10年可發(fā)展為宮頸癌[5]。國(guó)際上公認(rèn)的宮頸癌篩查有兩種方法，即宮頸薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）和HPV檢測(cè)。本研究中，156例TCT異常結(jié)果中ASCUS、LSIL在病理組織學(xué)CIN及以上陽(yáng)性率分別為54.4%、60.8%，HSIL、SCC分別為85.2%、100%。可見(jiàn)，TCT檢查可以作為宮頸癌初篩方法。但其在宮頸低度病變中仍然存在一定的假陽(yáng)性率及假陰性率。

HPV病毒感染，可分為高危型（HR-HPV）和低危型（LR-HPV）。HR-HPV主要有HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33型等，LR-HPV主要有HPV-6、HPV-11、HPV-34、HPV-42型等。本組資料中顯示，隨著TCT級(jí)別越高，HR-HPV陽(yáng)性率越高。這說(shuō)明，在TCT檢查基礎(chǔ)上，同時(shí)進(jìn)行HPV分型檢測(cè)，能夠濃縮高風(fēng)險(xiǎn)人群，并可根據(jù)分型檢測(cè)結(jié)果預(yù)測(cè)受檢者的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，在宮頸疾病篩查中必不可少，具有重要的指導(dǎo)意義。

HPV病毒屬于乳頭瘤病毒科，是由DNA核心和蛋白衣殼組成，衣殼由主要（L1）和次要（L2）衣殼蛋白組成。HPV L1殼蛋白是HPV主要的衣殼蛋白。在宿主體內(nèi)，HPV感染分為兩個(gè)階段，即復(fù)制和轉(zhuǎn)化階段。HPV L1殼蛋白陽(yáng)性表明HPV病毒處于早期復(fù)制狀態(tài)，同時(shí)可以誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，清除感染。當(dāng)病毒整合到宿主DNA基因中，即處于轉(zhuǎn)化階段時(shí)，HPV L1殼蛋白表達(dá)呈陰性，此時(shí)機(jī)體免疫應(yīng)答被減弱，異常細(xì)胞大量增殖導(dǎo)致未經(jīng)治療的病變進(jìn)展到微浸潤(rùn)和浸潤(rùn)癌[6]。在本組資料中，HPV L1殼蛋白表達(dá)陽(yáng)性率隨著組織病理學(xué)診斷級(jí)別加重而呈下降趨勢(shì)，各組級(jí)別之間HPV L1殼蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這與王偉[7]等研究結(jié)果一致。這表明檢測(cè)HPV L1殼蛋白表達(dá)可以預(yù)測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）惡性發(fā)展的趨勢(shì)及病變嚴(yán)重程度。因此，在TCT結(jié)果異常的基礎(chǔ)上檢測(cè)HPV L1殼蛋白，可以用于指導(dǎo)宮頸病變患者的分流管理及個(gè)體化治療。

綜上所述，TCT檢查聯(lián)合HPV分型檢測(cè)能夠濃縮高風(fēng)險(xiǎn)人群，HPV L1殼蛋白檢測(cè)可以預(yù)測(cè)宮頸病變發(fā)展趨勢(shì)和HPV病毒感染狀態(tài)。三者聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)于宮頸病變患者，可以依據(jù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行更加合理的分流管理和個(gè)體化治療。

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本文編輯：吳 衛(wèi)

【中圖分類號(hào)】R737.33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B

【文章編號(hào)】ISSN.2095-8803.2015.12.079.03

作者簡(jiǎn)介：劉越（1989-），女，河南安陽(yáng)人，醫(yī)師，碩士研究生在讀，研究方向：婦科腫瘤

通訊作者：梁武鳳，Tel：15137305669，E-mail：1026730394@qq.com