劉薇芝，胡漢昆，劉萍，劉巍，張覓，鄭保根，2，劉安妮，顏鏘，周麗娟，劉一鳴

(1.武漢大學(xué)中南醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430071；2.武漢大學(xué)第二臨床學(xué)院，武漢 430071；3.武漢大學(xué)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，武漢 430071；4.武漢藥谷生物工程有限公司，武漢 430000；5.Jackson State University，Jackson 39209)

頂空氣相色譜法測定硝酸布康唑中有機(jī)溶劑殘留量*

劉薇芝1，胡漢昆1，劉萍1，劉巍1，張覓1，鄭保根1，2，劉安妮3，顏鏘4，周麗娟4，劉一鳴5

(1.武漢大學(xué)中南醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430071；2.武漢大學(xué)第二臨床學(xué)院，武漢 430071；3.武漢大學(xué)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，武漢 430071；4.武漢藥谷生物工程有限公司，武漢 430000；5.Jackson State University，Jackson 39209)

目的 建立測定硝酸布康唑原料藥中乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺3種有機(jī)溶劑殘留量的分析方法。方法 采用毛細(xì)管氣相色譜法，程序升溫，檢測器：FID；檢測器溫度：250 ℃；進(jìn)樣器溫度：200 ℃；載氣：氮?dú)猓豁斂者M(jìn)樣。結(jié)果 在上述色譜條件下，乙酸乙酯，三氯甲烷，N，N-二甲基甲酰胺分別在0.066～0.588，0.062～0.556，0.896～8.061 μg·mL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。平均回收率分別為99.18%，102.84%，98.71%，RSD分別為3.87%，4.33%，3.71%。結(jié)論 該檢測方法靈敏、準(zhǔn)確、可靠，可用于硝酸布康唑原料藥的質(zhì)量控制。

布康唑，硝酸；色譜法，氣相；有機(jī)溶劑殘留

硝酸布康唑(butoconazole nitrate)是新一代咪唑類抗真菌藥，可用于治療陰道念珠菌感染等婦科炎癥。化學(xué)名：1-{2-(2，4-二氯苯基)-2-[4-(苯硫)苯基]-甲氧}乙基-1H-咪唑硝酸鹽[1]。與現(xiàn)有咪唑類抗真菌藥物相比，療效更佳(對白念珠菌的作用優(yōu)于已上市的同類藥)；用量更小(現(xiàn)有咪康唑類藥物的單次給藥量為400 mg，是本品用量的4倍)。硝酸布康唑已在美國、歐盟等國家注冊上市，國內(nèi)多家企業(yè)正在申報(bào)。本課題組與武漢藥谷生物工程有限公司開發(fā)了3.1類新藥硝酸布康唑，現(xiàn)已取得了國家食品藥品監(jiān)督管理總局授予的原料藥審批件。由于在該藥的合成生產(chǎn)過程中引入了乙酸乙酯、三氯甲烷與N，N-二甲基甲酰胺有機(jī)溶劑，根據(jù)國際人用藥品注冊技術(shù)要求協(xié)調(diào)大會(huì)規(guī)定[2]，乙酸乙酯是第3類溶劑，三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺屬第二類溶劑。上述溶劑可對人體產(chǎn)生危害，因此需控制產(chǎn)品中這些溶劑的殘留量在規(guī)定范圍內(nèi)。乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺控制限度分別為0.5%，0.006%和0.088%。為控制硝酸布康唑原料藥質(zhì)量，本研究采用頂空氣相色譜法對硝酸布康唑原料藥中乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺有機(jī)溶劑殘留進(jìn)行了檢查。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津GC-2014C型氣相色譜儀(FID檢測器)，PEG-20M色譜柱(蘭州化物所色譜中心)。

1.2 試藥 硝酸布康唑原料藥(含量：99.5%，武漢藥谷生物工程有限公司，批號(hào)：20130705，20130718，20130728，20130812，20130821，20130828)，乙酸乙酯(天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20130416)、三氯甲烷(天津市東麗區(qū)銘誠化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20130521)，N，N-二甲基甲酰胺(天津市凱通化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20130325)均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 島津GC-2014C型氣相色譜儀(FID檢測器)，固定液為聚乙二醇(PEG-20M)的毛細(xì)管氣相色譜柱(PEG-20M柱，30 m×0.25 mm，涂布厚度0.25 μm)；載氣為氮?dú)?N2)；柱前壓為80 kPa；柱溫起始溫度為80 ℃，維持5 min，以10 ℃·min-1的速率升溫至180 ℃，維持5 min；進(jìn)樣口溫度為200 ℃；檢測器溫度為250 ℃。頂空進(jìn)樣瓶平衡溫度130 ℃，平衡時(shí)間20 min，頂空進(jìn)樣體積1.0 mL，理論板數(shù)以乙酸乙酯峰計(jì)不低于1 000。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的配制 分別精密稱取乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺各0.25，0.30，4.4 g精密稱定,同置于1 000 mL量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，加蓋，密封，即得。

2.2.2 供試品溶液的配制 取本品1.0 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，精密加入二甲亞砜5 mL，充分搖勻，加蓋，密封，即得。

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn) 分別取對照品溶液、供試品溶液、二甲亞砜空白溶劑在130 ℃平衡20 min，分別抽取頂空氣體1.0 mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，如圖1。結(jié)果表明，乙酸乙酯保留時(shí)間3.505 min、三氯甲烷保留時(shí)間4.325 min、N，N-二甲基甲酰胺保留時(shí)間9.710 min，三者之間分離度均大于2.0。溶劑二甲亞砜出峰在10 min以后，不干擾測定，3種溶劑完全分離，可同時(shí)對它們進(jìn)行測定。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密稱取乙酸乙酯0.326 6 g，三氯甲烷0.308 8 g和N，N-二甲甲酰胺4.478 1 g同置100 mL量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，精密吸取溶液1，3，5，7，9 mL分別至50 mL量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液各5 mL分別置頂空進(jìn)樣瓶中，加蓋，密封，在130 ℃平衡20 min，抽取上部氣體1 mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，其線性關(guān)系見表1。結(jié)果表明，在上述色譜條件下，乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺在各自濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取5份乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的濃度分別為 0.25，0.30與4.40 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液5 mL，分置5個(gè)頂空進(jìn)樣瓶中，加蓋，密封，在130 ℃平衡20 min，各抽取頂空氣體1 mL連續(xù)注入氣相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積。結(jié)果表明乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺RSD分別為3.34%，4.88%，5.83%，精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅧP外標(biāo)測定法的要求(RSD≤10%)。

A.空白溶媒溶液；B.對照品溶液；C.供試品溶液；1.乙酸乙酯；2.三氯甲烷；3.N，N-二甲基甲酰胺；4.二甲亞砜

A.blank solution；B.control solution；C.test solution；1.ethyl acetate；2.chloroform；3.N，N-dimethylformamide；4.dimethy sulfoxide

Fig.1 Gas chromatogram of three kinds of solution

表1 3種有機(jī)溶劑線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1 Results of linear relationship test on three kinds of organic solvent

n=5

2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密稱取1.0 g樣品9份，置9個(gè)頂空進(jìn)樣瓶中，分別精密加入高、中、低濃度對照品溶液5 mL，加蓋，密封，振搖使樣品溶解，在130 ℃平衡20 min，按樣品測定方法計(jì)算回收率，結(jié)果乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺回收率均在95%～106%之間。見表2。

表2 3種有機(jī)溶劑加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.7 檢測限 分別單獨(dú)配制3種溶劑的二甲亞砜溶液，適當(dāng)稀釋直到溶劑的色譜峰高是基線噪音的3倍，作為最低檢測限。乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的檢測限分別是0.65，0.62和8.96 μg·mL-1。

2.8 樣品中溶劑殘留量的測定 取樣品6批，按“2.2”項(xiàng)下分別配制成供試品溶液，在30 ℃平衡20 min，分別抽取頂空氣體1.0 mL注入氣相色譜儀，“2.1”項(xiàng)下相應(yīng)的色譜條件下測定。按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果表明，本品中未檢出乙酸乙酯、三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺，說明樣品中乙酸乙酯、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺基本無殘留。見表3。

3 討論

3.1 溶劑的選擇 為保證其中的殘留有機(jī)物完全釋放，必須選擇適合的溶劑完全溶解待測樣品。隋雪峰等[3]報(bào)道了采用氣相色譜法測定硝酸布康唑中乙酸乙酯等有機(jī)溶劑殘留量的方法，所選用的溶劑為N，N-二甲基甲酰胺。雖然可有效溶解樣品，但是N，N-二甲基甲酰胺是布康唑合成過程中主要反應(yīng)溶劑，也存在殘留問題。因此，如選用N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，則無法檢測N，N-二甲基甲酰胺的殘留。為更好檢測有機(jī)溶劑殘留，課題組經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，原料藥及有機(jī)溶劑在二甲亞砜中溶解性好，且二甲亞砜沸點(diǎn)較高，其溶劑色譜蜂不干擾殘留溶劑測定，故選擇二甲亞砜為溶劑。

表3 樣品測定結(jié)果

Tab.3 Results of sample analysis %，n=5

“-”未檢出

“-” not check out

3.2 色譜柱的選擇 課題組曾選用不同毛細(xì)色譜柱DM-624、OV-1301柱、PEG-20M色譜柱進(jìn)行分離。研究發(fā)現(xiàn)，聚乙二醇PEG-20M分離效果較好。考慮到頂空進(jìn)樣中產(chǎn)生的水蒸氣易造成聚乙二醇色譜柱涂膜性質(zhì)的改變，因此采用程序升溫法進(jìn)行檢測，以達(dá)到色譜柱在線老化，保證較好的分離效果。

本研究建立了頂空氣相色譜法測定硝酸布康唑中有機(jī)溶劑殘留量的方法，該方法精密度好，回收率高，可用于硝酸布康唑原料藥的質(zhì)量控制。

[1] 胡漢昆，顏鏘，劉萍.抗真菌新藥——硝酸布康唑[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29(7)：893-895.

[2] 周海鈞.藥品注冊的國際技術(shù)要求：質(zhì)量部分(ICH指導(dǎo)委員會(huì))[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：88.

[3] 隋雪峰，滕學(xué)厚，曹悅興.氣相色譜法測定硝酸布康唑有機(jī)溶劑殘留[J].齊魯藥事，2009，28(2)：81-83.

DOI 10.3870/yydb.2015.08.022

Determination of Organic Solvents Residue in Butoconazole Nitrate by Headspace Gas Chromatography

LIU Weizhi1, HU Hankun1, LIU Ping1, LIU Wei1,ZHANG Mi1, ZHENG Baogen1,2, LIU Anni3，YAN Qiang4, ZHOU Lijuan4，LIU Yiming5

(1.DepartmentofPharmacy,ZhongnanHospitalWuhanUniversity,Wuhan430071，China； 2.TheSecondClinicalCollegeofWuhanUniversity，Wuhan430071，China； 3.SchoolofEconomics,WuhanUniversity,Wuhan430071，China；4.WuhanYaoguBio-techCo.,Ltd，Wuhan430000，China；5.JacksonStateUniversity，Jackson39209，USA)

Objective To establish a gas chromatograph method for determing Chloroform, ethyl acetate andN,N- dimethyl formamide in butoconazole nitrate. Methods The samples was detected by Headspace Gas Chromatography.Temperature programming method was adpoted and FID was used as detector.The injector temperature was 200 ℃,and the detector temperature was reach 250 ℃.Nitrogen was used as carrier gas in the experiment. Results In the mentioned chromatographic conditions, Chloroform, ethyl acetate andN,N-dimethyl formamide had good linear relationships in the ranges of 0.066-0.588，0.062-0.556 and 0.896-8.061 μg·mL-1respectively.The average recoveries were 99.18%，102.84% and 98.71%.RSD were 3.87%，4.33% and 3.71%. Conclusion The detection method is sensitive, accurate, reliable, and can be used as a quality control for butoconazole nitrate.

Butoconazole, nitrate；Chromatography，gas；Organic solvent residue

2014-05-12

2014-08-13

*2013年湖北省重大科技創(chuàng)新計(jì)劃(2013ACA006)；光谷第七批“3551光谷人才計(jì)劃”創(chuàng)新人才項(xiàng)目

劉薇芝(1982-)，女，湖南邵陽人，主管藥師，碩士，研究方向：新藥研究。電話：027-67813197，E-mail：liuweizhi2001@126.com。

胡漢昆(1970-)，男，湖北武漢人，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：新藥研究。電話：027-67812902，E-mail：whyhlz@163.com。

R978.5；R927.1

B

1004-0781(2015)08-1072-03