大腸桿菌兩種檢測方法的比較分析

桂燕華

·論著·

大腸桿菌兩種檢測方法的比較分析

桂燕華

目的 比較2種大腸桿菌培養方法的優劣。方法 取大腸桿菌標準菌株［ATCC25922］在2012年10－11月內分5次，每次20遍適當倍數的稀釋，最終取得10－7、10－8、10－93個合適的稀釋度共300分樣液后，運用方法1取上述陽性對照樣液上清液各1 ml接種單料乳糖膽鹽發酵管3管進行檢測;同時運用方法2測定剩余的上述樣液，倒入雙料乳糖膽鹽發酵培養液中，置(36±1)℃培養24 h，對其進行平行比對實驗。結果 方法1陽性數為229件，方法2陽性數為249件，經χ2檢驗，2種大腸桿菌培養方法差異有統計學意義(P＜0.05)。結論 方法2比方法1簡便、廉價、檢出率高。建議將大腸菌群檢驗標準DB31/8－2004《托幼機構環境、空氣、物體表面衛生要求及檢測方法》中“按方法1:取樣液上清液接種單料乳糖膽鹽發酵管3管”修訂為“按方法2:用測定剩余的檢樣，倒入雙料乳糖膽鹽發酵培養液中”。

消毒管理;檢測方法;大腸菌群

大腸菌群系指一群在37℃培養24 h能發酵乳糖、產酸產氣、需氧的和兼性厭氧的革蘭陰性無芽胞桿菌。該菌群主要來源于人畜糞便，具有指示菌一般特征，故以此作為糞便污染指標評價日常用品用具的衛生狀況。長期以來對大腸桿菌的檢測標準一直沿用DB31/8－2004《托幼機構環境、空氣、物體表面衛生要求及檢測方法》，此方法對幼托機構的衛生消毒管理工作起到了很好的監測作用，但也存在漏檢現象。為了減少漏檢率，提高檢測/監測效果，更好地保障幼托機構小朋友的身體健康，本研究依據多年檢測經驗，對大腸桿菌培養方法在原有的基礎上做了一些改進，并對2種方法做了平行比對實驗，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 取大腸桿菌標準菌株［ATCC25922］在2012年10－11月內分5次，每次20遍適當倍數的稀釋，最終取得10－7、10－8、10－93個合適的稀釋度共300分樣液。單料及雙料乳糖膽鹽發酵管均由本實驗室自行配置，并均在有效期內使用。

1.2 方法 方法1:取陽性對照樣液上清液接種單料乳糖膽鹽發酵管3管，每管1 ml，置(36±1)℃培養24 h［1］。方法2:將測定剩余的陽性對照樣液，倒入雙料乳糖膽鹽發酵培養液中，置(36±1)℃培養箱內培養24 h［2］。

觀察是否產酸產氣，若有變黃和氣體產生，該管推測性檢驗陽性。如不產酸、不產氣則為大腸菌群陰性。自推測性檢驗陽性管中取一接種環培養液，轉種伊紅美藍瓊脂平板上，置(36±1)℃培養箱培養18～24 h，然后取出，觀察菌落形態，并做革蘭氏染色和證實性試驗。在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1～2個進行革蘭染色鏡檢;同時接種乳糖發酵管，置(36 ±1)℃培養24 h。凡乳糖發酵管最終產酸產氣，革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報告檢出大腸菌群。

陽性對照樣液(細菌繁殖體懸液)的制備:取凍干菌種管大腸菌［ATCC25922］，復蘇后轉種至第五代營養瓊脂培養基斜面，0.85%生理鹽水稀釋，比濁測定至0.5的麥氏單位。再用0.85%生理鹽水稀釋至10－7、10－8、10－93個濃度［3］。共比濁測定0.5的麥氏單位20管，每管稀釋5次，分別稀釋至10－7、10－8、10－93個濃度，再取上清液接種單料乳糖膽鹽發酵管3管每管1 ml，將測定剩余的樣液，倒入雙料乳糖膽鹽發酵培養液中，置(36±1)℃培養箱內培養24 h。

1.3 統計學處理 采用SPSS 16.0統計軟件進行分析，采用配對χ2檢驗分析兩方法間陽性率差異是否存在統計學意義。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

結果見表1、2。10－7、10－8、10－93個濃度中，在10－7濃度2種方法陽性檢出率均為100%，10－8濃度方法1和方法2陽性檢出率分別為95%和94%，10－9陽性檢出率分別為34%、55%，可見在10－9這個濃度中方法2陽性檢出率明顯高于方法1，經χ2檢驗，2種方法間總體差異顯著，具有統計學意義(P＜0.05)。經配對χ2檢驗，χ2=17.4，P＜0.05，2種大腸桿菌培養方法陽性率差異有統計學意義。

3 討論

方法1是多年來一直沿用的DB31/8－2004《托幼機構環境、空氣、物體表面衛生要求及檢測方法》的檢測標準，此標準對幼托機構表面物體的日常監測也起到了不錯的效果，但對于一些處于臨界狀態的污染物品還是存在諸多漏檢現象。本研究運用2種方法進行比對，得出方法2對比方法1在臨界狀態下具有高檢出率的優勢，而且方法2較方法1簡便，檢測成本較低，所用檢樣量多，理論上也不易漏檢。為方便實驗操作，減少基層單位工作量，節省時間和成本，建議將檢驗標準DB31/8－2004《托幼機構環境、空氣、物體表面衛生要求及檢測方法》中“按方法1:取樣液上清液接種單料乳糖膽鹽發酵管3管”修訂為“按方法2:用測定剩余的檢樣，倒入雙料乳糖膽鹽發酵培養液中”。

表1 2種方法檢測大腸桿菌的陽性比對結果

表2 2種方法檢測大腸桿菌的陽性數比較

托幼機構是幼兒集聚區域，幼兒時期免疫機制正在發育完善之中，免疫功能低下，是各種傳染病的易感人群，為進一步改進幼兒的衛生生活環境［5］，綜合評估浦東新區幼兒園內用品用具的衛生狀況，衛生機構應盡一切努力做好監管工作，而監管工作的依據主要依靠或憑借實驗室精確的檢測數據，也就是較高的陽性檢出率，避免漏檢。

［1］ DB31/8－2004，托幼機構環境、空氣、物體表面衛生要求及檢測方法［S］.

［2］ GB/T18204.3－2000，公共場所茶具的大腸菌群測定方法［S］.

［3］ 陸嵐，張勇，張勇琪，等.金黃色葡萄球菌定量檢驗方法研究［J］.大家健康，2011，5(11):39－40.

［4］ 舒代蘭，羅霞.食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法探討［J］.現代預防醫學，2009，36(22):4334－4335.

［5］ 金建洪，屠春慧.2003－2005年杭州市拱墅區托幼機構消毒檢測資料分析［J］.預防醫學論壇，2007，13(1):66－67.

Comparison of two detection methods for the sam p les from the kindergarten by comparative tests of positive Escherichia coli

Gui Yanhua

(Pudong New Area Center for Disease Control and Prevention，Shanghai200136，China)

Objective To compare the advantages and disadvantages of2 Escherichia coli culturemethods，so as to establish and improve disinfection and control in all the kindergartens of the area.Methods The standard strain of Escherichia coli［ATCC25922］was collected in October and November of2012，then，was diluted 10 times and each time with a proper ratio.Finally，300 samples of solution were obtained with proper dilution levels of10－7，10－8and 10－9.Then，1ml of the above positive control supernatantwas inoculated in the unblended lactose bile salt fermentation tubes(3 tubes)by usingmethod 1 for later detection.At the same time，detection wasmade in the remaining supernatant by usingmethod 2，then，the test solution was put in the lactose bile salt fermentation culture solution，and was inoculated at a temperature of(36±1)℃ for 24 hours for parallel comparison experiments.Results Positive detection rate ofmethod 1 was 229，while that ofmethod 2 was 249.Byχ2test，statistical difference could be noted in the 2 Escherichia coli culturemethods(P＜0.05).Conclusion Method 2 was simpler and more economic and seemed to have a higher detection rate，when compared with thatofmethod 1.Itwas recommended that testmethod 2 could replacemethod 1 in the Escherichia coli test standard DB31/8－2004.

Kindergarten;Detectionmethod;Escherichia coli

R117

A

10.3969/j.issn.1009－0754.2015.01.016

2014－07－28)

(本文編輯:林永麗)

200136 上海，浦東新區疾病預防控制中心