卡介菌多糖核酸增進雞體免疫水平試驗

摘要：200只AA肉雞，平均分為4組：卡介菌多糖核酸高、中、低劑量組和生理鹽水對照組。試驗雞分別于給藥前1天、停藥后第4天、停藥后第7天以及第10天采血，進行細胞免疫（外周T淋巴細胞轉化試驗），以研究卡介菌多糖核酸對雞體免疫功能的影響。結果表明，卡介菌多糖核酸可以提高雞體的免疫功能，其中以中劑量組效果最好。

關鍵詞：卡介菌多糖核酸；免疫調節；雞

中圖分類號： R979.5 文獻標識碼： A DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2015.12.031

適時利用疫苗進行預防接種是目前世界范圍內防治畜禽主要疫病的重要手段，但有效的免疫效果受眾多因子的影響，除了疫苗的質量、正確的使用等情況外，畜禽免疫接種時所處的環境和畜禽本身所處的狀態等因素在畜禽獲取良好的免疫力方面也是一項不容忽視的因素。因此，在不斷提高疫苗質量、正確合理地施以免疫接種外，探索能促使畜禽提高對疫苗免疫應答的手段和方法，也是體現預防為主原則的一項新課題。卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）是從卡介菌中提取的菌體成分，能提高機體細胞免疫功能，調節體液免疫水平，具有抗感染、抗變態反應、抗腫瘤等作用。

1 材料和方法

1.1 主要試驗材料

1.1.1 試驗動物 1日齡AA肉雞，由南京市邁皋橋雞場提供。

1.1.2 卡介菌多糖核酸 由瑞普（天津）動物藥業有限公司藥物研究中心提供。

1.1.3 RPMI 1640培養基 GIBCO BRL公司產品。

1.1.4 SP2/0骨髓瘤細胞株 山東醫科院提供。

1.2 試驗設計

隨機將200羽1日齡AA肉雛雞分為BCG-PSN高（0.5毫升/羽）、中（0.25毫升/羽）、低（0.125毫升/羽）劑量組和生理鹽水對照組，共4組，每組50羽。各試驗組于7日齡時開始飲水給藥，連用3天。各組均于10日齡首次免疫接種雞新城疫 （ND）疫苗。

各試驗組雞施以相同的飼養管理，并分別于給藥前1天、停藥后第4天、停藥后第7天以及第10天采血，進行細胞免疫（外周T淋巴細胞轉化試驗）。

1.3 試驗方法

采用李祥瑞介紹的MTT法。雞心臟無菌采血4毫升，肝素抗凝，用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞，用RPMI 1640培養液調整細胞數至2.0 ×106個/毫升；將100微升上述外周血淋巴細胞接種于96孔平底細胞培養板，加入20微升 PHA，并設有不加PHA的對照，每個樣品4個重復。同時設無細胞的RPMI 1640孔，用于調零。37 ℃，培養44小時后，加入20微升MTT，繼續培養4小時，吸去孔內液體，每孔加入100 微升DMSO，振蕩器上振蕩10分鐘，使結晶充分溶解。用酶聯免疫檢測儀檢測OD570納米值。以PHA刺激孔OD570納米平均值減無PHA刺激孔OD570納米平均值表示淋巴細胞的增殖。

2 試驗結果

混飲不同劑量BCG-PSN的試驗組和相應對照組肉雛雞外周血中T淋巴細胞轉化率見表1。

由表1可見，給藥前1天，各組間差異不顯著；停藥后第4天，不同劑量BCG-PSN給藥組與對照組相比，雞外周血中T淋巴細胞活性均有明顯提高，統計學分析表明差異顯著（P<0.05）；停藥后第7天，不同劑量BCG-PSN組雞外周T淋巴細胞轉化率均比對照組雞的T淋巴細胞轉化率高，差異極顯著（P<0.01），中、低劑量組雞的T淋巴細胞轉化率又顯著高于高劑量組雞（P<0.05），中劑量組雞和低劑量組雞的T淋巴細胞轉化率則沒有明顯差異。停藥后第10天，BCG-PSN高、中、低劑量組雞T淋巴細胞轉化率又極顯著地高于對照組雞T淋巴細胞轉化率（P<0.01），中劑量組雞T淋巴細胞轉化率又繼續維持高水平，顯著地高于低劑量組（P<0.01）。

給藥前、后不同時期內，各BCG-PSN給藥組雞和對照組雞外周T淋巴細胞轉化的動態變化見圖1。

由圖1可見，對照組雞外周T淋巴細胞轉化率盡管隨雞日齡的增長略有增高，但3個BCG-PSN給藥組T淋巴細胞轉化率隨給藥后日齡的增長均表現出明顯的增高，其中又以中劑量組明顯高于高劑量組。

3 討論

試驗結果顯示，BCG-PSN具有一定的生物活性，可以促進機體產生良好的免疫效果，增強機體的免疫功能。BCG-PSN給藥組雞T淋巴細胞轉化率呈快速上升趨勢，其中中劑量組尤為明顯。本試驗說明BCG-PSN能夠提高雞體免疫，能加速雞體免疫功能的發育完善，從而增強雛雞免疫應答能力，提高免疫效果，并且這種免疫增強作用與給藥劑量密切相關，臨床上建議采用中劑量的BCG-PSN溶液進行免疫。

參考文獻

[1] 肖登元，曹衡.引起畜禽免疫失敗的原因及防治對策[J].農業與技術，2005，25（6）：78-79.

[2] 閻林海，丁超，王洋，等.養雞場（戶）免疫接種應注意的問題[J].現代畜牧獸醫，2006，（4）：39-40.

[3] 李國江，張喜堂.家禽免疫失敗的原因分析[J].動物保健，2005，（1）：23-24.

[4] 胡北俠，黃艷艷，任素芳，等.獸醫常用免疫佐劑的研究概況與發展趨勢[J].中國畜牧獸醫，2005，32（3）：38-40.

[5] 童巖，邊傳周，鄭純寧.新型免疫佐劑研究進展[J].河南農業科學，2005，（7）：103-104.

作者簡介：呂英然，碩士，廣東科貿職業學院，講師，研究方向：獸醫微生物與免疫。