野菊花中總黃酮的提取

鄧 賀 鐘 政

（國家食品藥品監督管理總局一四六倉庫，河北 石家莊 050071）

野菊花是菊科植物野菊的干燥頭狀花序，其主要成分為總黃酮，具有清熱解毒、降血壓、抗病毒、抑制血小板凝聚等功能[1-2]，野菊花水劑可抑制金葡菌、大腸桿菌、痢疾桿菌等一般致病菌，且對異煙肼、鏈霉素和氨基水楊酸鈉耐藥或敏感的結核桿菌均有明顯的抑菌作用，為了有效地開發和利用藥材資源，充分提取野菊花所含的總黃酮等成分，我們采用正交試驗的方法進行了制備工藝的研究。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：電子萬用爐（天津泰斯特儀器有限公司）；旋轉蒸發儀（上海亞榮生儀器廠）；752N型紫外光譜儀（上海廣照光電科技有限公司）；電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）；高速離心噴霧干燥機（常州市振興干燥設備廠）；蠕動泵（常州科健蠕動泵廠）；微型空氣壓縮機（上海力彪機械制造有限公司）；PHS-2酸度計（上海第二分析廠）；NDJ-1型黏度計（上海天平儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（上海醫療器械五廠）；Olympus-CH 型生物顯微鏡（日本進口）；烘箱（LAB供應集團）；電冰箱（購自青島海爾集團）；棕色瓶、無色瓶（購自安國義通中藥材有限公司）5000 mL圓底燒瓶，冷凝管。

1.2 試劑與樣品：蘆丁對照品。野菊花（為菊科植物野菊的干燥頭狀花序）；乙醇；亞硝酸鈉，硝酸鋁溶液，氫氧化鈉溶液，蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 總黃酮的提取

2.1.1 對照品及供試品溶液的制備：①對照品溶液的制備： 精密稱取經120 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品25 mg，置50 mL容量瓶中，加30%乙醇適量，使充分溶解，放冷，用30%乙醇稀釋至刻度，搖勻備用[2]。②供試液的制備：精密稱取野菊花5 g，加到燒瓶中，加水100 mL，冷浸10 min后，在水浴上加熱回流1 h，分取濾液，藥渣加水80 mL，繼續水浴加熱回流30 min，濾過，合并濾液，濾液置200 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作供試液，待用。

2.1.2 含量測定：①標準曲線的制備：精密量取對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中分別記號1、2、3、4、5、6，各加水12 mL，加5%亞硝酸鈉溶液2mL，使混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液2 mL，搖勻，放置6 min，加1%氫氧化鈉溶液20 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應的試劑溶液為空白。按分光光度法（中國藥典2000年版一部附錄VB），在500 nm波長處測定3次吸收度，以吸收度的平均值為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線。測定的標準液的吸光度和標準曲線如下，得回歸方程：y=20.754x-0.0039（R2=0.9967）。見表1。③供試液的測定：精密量取供試液10 mL，置50 mL容量瓶中，照標準曲線方法進行操作，顯色，在500 nm波長處測定吸收度A1，另精密量取供試液10 mL，置50 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，在500 nm波長處測定吸收度A2，取二次吸收度的差值，由回歸方程計算樣品中總黃酮的含量3.10%[3]。

表1 不同濃度的野菊花提取液的紫外吸光度

2.1.3 提取溶劑的選擇：①乙醇提取：精密稱取野菊花5 g，加到燒瓶中，加乙醇100 mL，冷浸10 min后，在水浴上加熱回流1 h，分取乙醇液，藥渣加乙醇80 mL，繼續在水浴加熱回流30 min，合并乙醇液，濾過，濾液置200 mL量瓶中，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作供試液，待用。②水提取：精密稱取野菊花5 g，加到燒瓶中，加水100 mL，冷浸10 min后，在水浴上加熱回流1 h，分取水，藥渣加水80 mL，繼續在水浴加熱回流30 min，合并提取液濾過，濾液置200 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作供試液，待用。③結果比較：上述供試液通過紫外-分光光度法測定野菊花總黃酮含量，測定結果見表2。 由表1和表2結果可知，乙醇提取略優于水提取。但考慮到在實際生產中，野菊花在提取過程中會吸收2～3倍的溶劑，造成生產成本顯著增加，因此本試驗選擇廉價的水作為試驗提取溶劑。

表2 提取溶劑不同所得的野菊花總黃酮含量

2.1.4 水提取工藝的考察：①考察因素及水平：選擇提取次數、提取溫度、提取時間和用水量等4個因素，每個因素選擇3個水平，編制因素水平表見表3。 ②試驗與結果：準確稱取野菊花5 g，按 表3正交表沒計方案進行試驗，取液稀釋至200 mL作供試液，進行含量測定，以測得野菊花總黃酮含量為指標進行分析。結果見表4。由表3可知，A、B、C、D 4個因素對野菊花總黃酮提取的影響程度不同，各因素的影響程度依次為A＞B＞D＞C，其中A 因素為影響野菊花總黃酮提取的主要因素，B因素為影響野菊花總黃酮提取的次要因素。同時也從結果分析中發現，提取次數超過2次時，提取次數為野菊花總黃酮提取的非主要因素。充分考慮C、D因素為從野菊花中提取野菊花總黃酮的非主要因素，最終確定野菊花提取工藝A2B3C3D1，即野菊花用水提取2次，溶劑用量依次為8、6倍，提取溫度100 ℃，提取時間為40 min、40 min。

表3 野菊花總黃酮提取工藝因素水平表

表4 野菊花水提工藝正交設計表

3 討 論

3.1 野菊花分別用乙醇和水提取，測定野菊花總黃酮含量，前者比后者要高，說明用乙醇提取比用水提取較完全，但考慮到生產實際中野菊花在提取過程中吸收2～3倍的溶劑，造成生產成本顯著提高，因而選用價廉的水作為提取溶劑[4]。

3.2 本次試驗通過正交試驗法對野菊花的提取工藝條件進行優化，并按最佳工藝進行了驗證試驗，結果證明用該工藝提取野菊花總黃酮工藝簡單、提取率高、操作控制容易、穩定性好、適合于工業化生產。

[1] 《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編(上冊)[M].北京:人民衛生出版社,1975:789-790.

[2] 北京市野菊花協作組.野菊花制劑臨床觀察一附454例療效分析[J].中藥通報,1983,8(4):39-40.

[3] 李道中,程村貴.野菊花提取液的藥理及臨床應用[J].藥學進展,1999,23(6):344.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典,2005版,第二部,附錄[S].北京:化學工業出版社,2005.