乳腺癌手術前后血液中Rab5a基因表達與其預后復發的相關性

張 鋒 宋張駿 陸建榮 汪存濤 陳 楠 韓丕華

·基礎研究·

乳腺癌手術前后血液中Rab5a基因表達與其預后復發的相關性

張 鋒 宋張駿 陸建榮 汪存濤 陳 楠 韓丕華

目的探討乳腺癌手術前后血液中Rab5a基因的表達與預后復發的相關性。方法選擇乳腺癌患者100例，予乳腺單純切除術或乳腺癌改良根治術，檢測手術前后血液中Rab5a基因的表達情況，隨訪調查術后復發情況。結果100例患者術前Rab5a基因表達陽性67例，陽性率為67.0%。Rab5a基因陽性表達與術前乳腺癌患者的T分期、組織學分級、淋巴結轉移情況有明顯相關性(P<0.05)。在術后6個月進行隨訪，復發16例，復發率為16.0%。Spearman等級相關分析顯示Rab5a基因表達與預后復發存在明顯的正向相關性(γ=0.459,P<0.05)。多元回歸logistic分析顯示腫瘤T分期、組織學分級、淋巴結轉移與Rab5a基因表達是影響乳腺癌患者預后復發的主要獨立危險因素(P<0.05)。結論Rab5a基因在乳腺癌中呈現高表達狀況，與T分期、組織學分級、淋巴結轉移有明顯相關性，能影響術后患者的復發。

乳腺癌；復發；Rab5a基因；相關性

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:1581～1583)

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，北方的發病率多于南方，近年來國內乳腺癌的發病率呈逐年上升且發病年齡更趨年輕化的趨勢[1]。目前認為乳腺癌的病因包括遺傳、 吸煙、飲酒、空氣污染等因素有關，隨著醫學診斷技術的提高，乳腺癌多在早期就可以被檢出，但是死亡率一直沒有明顯降低[2-3]。研究顯示，早期乳腺癌治療后的五年生存率為75%左右，主要死亡原因是術后復發，從而影響患者生命健康和生活質量[4-5]。任何腫瘤的發生與發展涉及多中心、多環節、多通路，目前乳腺癌侵襲和轉移的分子機制研究逐漸受到重視[6]。Rab5a蛋白是囊泡運輸的早期效應蛋白，參與胞內物質運輸、蛋白分選,與信號轉導、受體下調、病原體吞噬、細胞遷移及腫瘤侵襲性等密切相關[7-8]。本文旨在探討乳腺癌手術前后血液中Rab5a基因的表達與預后復發的相關性，為乳腺癌的生物治療策略提供理論依據。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2013年7月到2014年7月在我院接受治療的乳腺癌患者100例，納入標準：術前經活組織病理學檢查確診為乳腺癌；年齡<70歲；預計生存期大于6個月；具有手術指征，行乳腺單純切除術或乳腺癌改良根治術；患者及家屬知情同意。排除標準：合并嚴重內外科疾病或多器官功能衰竭、重度營養不良；既往惡性腫瘤病史者；標本損壞患者。年齡23～69歲，平均年齡(51.33±6.33)歲；病理類型：浸潤性導管癌73例，導管內癌12例，髓樣癌5例，浸潤性小葉癌10例。T分期：T1 期34例，T2 期56例，T3 期10例；組織學分級：Ⅰ級(高分化)20例，Ⅱ級(中分化)60例，Ⅲ級(低分化)20例；淋巴結轉移情況：轉移40例，未轉移60例。

1.2 標本取材

根據患者分期予乳腺單純切除術或乳腺癌改良根治術，據診療規范相應的病例選擇術后化療及放療。選擇瘤體組織與瘤旁組織進行取材，新鮮標本立即用10%甲醛固定，石蠟包埋得到標準。

1.3 血液中Rab5a基因的表達

所有患者在手術前后采集空腹靜脈血5～10 ml，4 ℃下3 000 rpm/min離心10 min，取上層血清。采用RT-PCR方法檢測Rab5a基因的表達情況，每次檢測均設陰性和陽性對照，陽性對照：用已知Rab5a基因的表達PCR實驗作對照及做預試驗。陰性對照：用不表達Rab5a基因的樣本進行實驗。嚴格按照RT-PCR試劑盒要求步驟進行操作。

1.4 統計方法

應用SPSS 14.00軟件進行數據分析，采用χ2檢驗分析Rab5a表達水平與乳腺癌患者相關指標的關系，相關等級資料對比采用軼和檢驗，P<0.05代表差異顯著。單因素分析及多因素分析均采用Spearman等級相關分析與logistic回歸分析。

2 結果

2.1 Rab5a基因表達情況

經過RT-PCR分析，100例患者術前Rab5a基因表達陽性67例，陽性率為67.0%。

2.2 Rab5a基因表達與臨床病理特征的相關性

經過判定，Rab5a基因陽性表達與術前乳腺癌患者的T分期、組織學分級、淋巴結轉移有明顯相關性(P<0.05)，見表1。

表1 Rab5a基因陽性表達與乳腺癌病理特征的相關性/例

2.3 預后情況

所有患者都順利完成手術，在術后6個月進行隨訪，復發轉移16例，其中局部復發5例，遠處轉移11例，復發率為16.0%。同時在術后6個月對所有患者進行Rab5a基因表達檢測，陽性12例，陽性率為12.0%，而復發患者中Rab5a基因表達陽性為11例，陽性率為68.9%。

2.4 Rab5a基因表達與預后復發的相關性

經過Spearman等級相關分析，Rab5a基因表達與預后復發存在明顯正向相關性(γ=0.459,P<0.05)，見表2。

表2 Rab5a基因表達與乳腺癌預后復發的相關性/例

2.5 影響預后復發的多因素分析

在多元回歸logistic分析中，把乳腺癌患者的臨床資料、Rab5a基因表達情況作為自變量，把預后復發作為因變量，結果顯示T分期、組織學分級、淋巴結轉移與Rab5a基因表達是影響其預后復發的主要獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

3 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發病率逐年提高[9]。具有局部浸潤和遠處轉移的能力是惡性腫瘤最重要的特點并且是其致患者死亡的主要原因，腫瘤的局部浸潤與轉移在腫瘤轉移的每一個環節上都有不同的作用因素，也涉及到不同基因的參與[10]。Rab5a是1種原癌基因，基因的突變或表達異常導致其編碼蛋白數量或功能異常可引起細胞生長調控紊亂，最終導致細胞癌變。目前發現Rab5a蛋白表達于肺臟、腦、肌肉、骨髓、胸腺、脾臟、胰腺心臟、肝臟、前列腺和腎臟等組織中[11]。Rab5a蛋白的一級結構通過螺旋和片層相互折疊圍繞而形成近似球形的空間結構，Rab5a蛋白的獨特結構與其功能密切相關。

表3 影響預后復發的多因素分析

本研究中經過RT-PCR分析，100例乳腺癌患者術前Rab5a基因表達陽性67例，陽性率為67.0%，也表明Rab5a基因在乳腺癌中呈現高表達狀況。而Rab5蛋白為RAB家族成員之一，作為細胞內囊泡運輸的調控因子，結合GTP時表現出GTP酶的活性，調節早期囊泡的形成、運輸，參與膜成分的運輸及分選。Rab5a蛋白的功能異常可使生長因子持續作用于細胞，引起細胞增生，形成腫瘤[12]。Rab5a基因已經在多個其它腫瘤中證實為腫瘤轉移相關基因，并且是與腫瘤的浸潤轉移呈正相關。相關研究表明Rab5a在具有高轉移潛能的肺腺癌細胞系Anip973中高表達，并且在轉移的非小細胞肺癌組織和轉移灶中均有不同程度的表達，且轉移程度越高表達越強[13]。本研究顯示Rab5a基因陽性表達與術前乳腺癌患者的T分期、組織學分級、淋巴結轉移情況有明顯相關性(P<0.05)。也有研究顯示Rab5a基因在宮頸良性病變組織中表達最低，隨著宮頸病變惡性程度的增加和浸潤轉移的發生，其表達量呈上升趨勢。

早期乳腺癌的治療效果均比較好，但是在術后6個月內，有約10.0%的患者出現復發或轉移。而細胞癌變的多基因協同理論認為至少有兩個或兩個以上功能不同的癌基因的激活才會引起細胞的癌變，乳腺癌的發生發展是一個多因素多步驟逐漸累積的過程。本研究所有患者都順利完成手術，在術后6個月進行隨訪，復發16例，復發率為16.0%。Spearman等級相關分析，Rab5a基因表達與預后復發存在明顯的正向相關性(γ=0.459,P<0.05)。有學者研究顯示Rab5a基因在人大腸癌細胞的侵襲及轉移特性的形成中具有重要的作用。在胃癌中也發現此基因的表達與胃癌的分化程度及轉移程度有關[14]。Rab5a蛋白可參與膜成分的分選，調節早期囊泡的形成、運輸，Rab5a蛋白的激活依賴于EGFR羧基端的酪氨酸殘基，Rab5a蛋白可能是調控受體內化和某些信號轉導的中間環節，從而對于術后復發有一定的影響[15-16]。本研究多元回歸logistic分析顯示T分期、分化程度、淋巴結轉移與Rab5a基因表達是影響乳腺癌患者預后復發的主要獨立危險因素(P<0.05)。也表明乳腺癌的復發與基因密切相關，癌基因的激活和抑癌基因的失活在乳腺癌的復發中起著重要的作用。

總之，Rab5a基因在乳腺癌中呈現高表達狀況，T分期、分化程度、淋巴結轉移情況有明顯相關性，能影響術后患者的復發。

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(編輯：吳小紅)

Relation between Prognosis and Recurrence and Blood Rab5a Gene Expression in Breast Cancer before and after Surgery

ZHANGFeng,SONGZhangjun,LUJianrong,etal.

Objective To investigate the relation between prognosis and recurrence and blood Rab5a gene expression in breast cancer before and after surgery.Methods 100 cases of breast cancer

simple mastectomy or modified radical mastectomy,the expression of Rab5a gene in the blood before and after operation were detected and postoperative relapse was followed up.Results Before surgery,Rab5a gene positive expression were 67 cases,and positive rate was 67.0%.The positive expression of Rab5a gene had obvious relation with T stage,histological grade,lymph node metastasis of breast cancer before operation.After 6 months of followed-up,16 cases had recurrence,the recurrence rate was 16.0%.Spearman rank correlation analysis showed that the Rab5a gene expression was positively correlated with prognosis and recurrence (γ=0.459,P<0.05).Multivariate logistic regression analysis showed that T stage,histological grade,Rab5a gene expression and lymph node metastasis in breast cancer were the major independent risk factors for prognosis and recurrence (P<0.05).Conclusion Rab5a gene has high expression levels in breast cancer,it is related with T stage,histological grade,and lymph node metastasis,and it can affect recurrence after surgery.

Breast cancer;Recurrence;Rab5a gene;Correlation

社會發展攻關計劃(編號：2014k11-01-01-05)

710061 陜西省腫瘤醫院

10.3969/j.issn.1001-5930.2015.11.001

R737.9

A

1001-5930(2015)11-1581-03

2015-03-29

2015-08-31)

ShanxiTumorHospital,Xi'an,710061