HPLC測定苗藥半截爛中芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷的含量△

胡志平 杜 江

(貴陽中醫學院藥學院，貴州 貴陽 550002)

半截爛(Arisaema rhizomatum C.E.C.Fisch)為天南星科天南星屬多年生草本，根莖入藥。有大毒，辛、溫，解毒止痛、祛風除濕。苗族民間多用于風濕疼痛、肢體麻木、跌打損傷、無名腫毒、勞傷疼痛、結核性潰瘍、癰疽疔毒初期等癥，并將其列為以毒攻毒的“攻毒藥”范疇。在苗醫著名的“弩藥”處方中半截爛也是常見的主要藥物之一[1]。近年研究發現，半截爛在鎮靜、鎮痛、抗驚厥、抗腫瘤、抗炎、抗心律失常方面均有明顯療效，但因其有毒且活性部位或成分不明確，嚴重制約了半截爛的開發應用，由于半截爛被苗族和土家族廣泛的用于治療風濕和類風濕病且療效確切，因此近年來半截爛在防治風濕和類風濕關節炎等方面的活性受到越來越多的重視，所以對半截爛進行質量及活性方面的研究具有重要的意義[2]。目前的研究提示，半截爛中所含的黃酮類成分可能與其活性緊密相關[3]，而其中的芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷具有抗腫瘤和抗氧化等活性。故選擇芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷作為指標性成分進行含量測定。

本課題組對半截爛有效物質成分進行了較為深入的研究，并從中首次分離出17個單體化合物。我們選擇其中的芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷作為半截爛中的指標成分進行質量研究，采用HPLC法建立其含量測定方法[4]，為其今后的開發利用打下良好的基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:Agilent1100系列高效液相色譜儀(自動進樣器，紫外檢測器，四元泵:美國，安捷倫公司)，梅特勒－托利多New classic型電子天平(梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司)，KQ5200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥:乙腈為色譜純(天津市科密歐化學試劑開發中心)，水為二次蒸餾水，其余試劑均為分析純。芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷對照品由購于西南麥克斯藥品純度大于98%。

半截爛藥材采自貴陽近郊，經貴陽中醫學院孫慶文副教授鑒定為天南星科天南星屬半截爛(Arisaema rhizomatum C.E.C.Fisch)的干燥根。

2 方法與結果

2.1 色譜條件:色譜柱 phenomenex－C18(4.6×150mm，5μm)流動相為乙腈 －0.05%磷酸(20:80);檢測波長為350nm;流速 1.0mL/min;柱溫 35℃;進樣量 20μL;分離度大于 1.5。

2.2 對照品溶液的制備:取芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷對照品適量，精密稱定，置5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品濃度為0.02mg/mL。

圖1 對照品溶液

2.3 供試品溶液的制備:取半截爛生藥約1.0004g精密稱定重量，用甲醇10mL，超聲提取2次，30min/次，放冷，濾過，合并濾液。蒸干，用甲醇定容至1mL，過0.45ul的微孔濾膜即得供試品。

圖2 供試品溶液

2.4 線性關系實驗:精密吸取對照品溶液1ul，2ul，3ul，5ul，7ul，分別進樣，于350nm處測定芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷的峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標(X)，以峰面積為縱坐標(Y)計算回歸方程，芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷的回歸方程為Y=3058927.58X+61.97，結果表明芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷在0.2～0.14μg范圍內線性關系良好。

圖3 線性關系試驗

2.5 精密度實驗:取同一批供試品，按“2.3”法制備供試品溶液，按上述色譜條件連續進樣5次，測得峰面積RSD=1.65%。

2.6 穩定性實驗:取同一批號供試品，按2.3項下法制備供試品溶液，每2h進樣1次，重復5次，RSD=2.79%。

2.7 重復性實驗:按樣品測定方法，對同一批半截爛藥材進行平行實驗5次，測得峰面積RSD=2.98%。

2.8 加樣回收率實驗:稱5份同一批號已知含量的供試品0.5g，分別加入芹菜素 －7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷1mL，濃度為0.02mg/mL對照品溶液配成濃度為0.004mg/mL，進行平行實驗測定5次，RSD=3.4%。

2.9 樣品測定:根據以上方法測定得出芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷的含量為0.0086%。

3 討論

3.1 經過不同系統選擇，甲醇－0.05%磷酸水和乙腈－0.5%磷酸水等一系列的流動相選擇，最終確定乙腈－0.05%磷酸水(20:80)分離度最好，且基線穩定不漂移。

3.2 由于半截爛中芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷的含量不高，對半截爛的提取方法進行了考察，得出超聲提取30min芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷峰面積相對要高一些。

[1]潘永華.土家藥四寶[J].中國民族醫藥雜志，1997.3(4).

[2]郭珅珅，杜江.民族藥雪里見的研究進展[J].中國民族醫藥雜志，2009，(7):49－51.

[3]陳春霞.民族藥材雪里見生物活性及化學成分研究[D].華中科技大學博士論文，2012－05－01.

[4]王麗，馬遠，陳隨清.構樹葉中牡荊素、芹菜素－7－O－β－D－葡萄糖醛酸苷的含量測定[J].安徽農業科學，2011，39(35):21647－21649.