外周血淋巴細胞免疫分型早期預測結(jié)締組織病并發(fā)間質(zhì)性肺病變的價值

張 亮，侯松萍，王 麗

（吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院呼吸科，吉林長春130033）

外周血淋巴細胞免疫分型早期預測結(jié)締組織病并發(fā)間質(zhì)性肺病變的價值

張 亮，侯松萍＊，王 麗

（吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院呼吸科，吉林長春130033）

細胞免疫是人體免疫系統(tǒng)中非常重要的一部分，由T淋巴細胞各亞群的比例來進行調(diào)節(jié)和維持人體免疫內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)越來越多的疾病發(fā)生和發(fā)展與T淋巴細胞亞群的變化有關(guān)。結(jié)締組織疾病常合并雙肺間質(zhì)性病變，在此基礎(chǔ)上合并肺部感染時，常見的臨床癥狀有發(fā)熱、呼吸困難、咳嗽等，胸部CT表現(xiàn)為雙肺彌漫性間質(zhì)性肺病變，臨床上有時很難將單純結(jié)締組織疾病造成的肺病變與結(jié)締組織疾病合并肺炎時造成的雙肺彌漫性病變鑒別清楚，治療上自然也難以抉擇是否給予糖皮質(zhì)激素治療及是否加大抗感染強度。結(jié)締組織疾病常伴有體內(nèi)免疫異常反應(yīng)造成的肺損傷［1，2］，如果能及早發(fā)現(xiàn)體內(nèi)的免疫異常反應(yīng)，則對下一步如何治療疾病大有幫助。本文通過檢測結(jié)締組織疾病患者的外周血淋巴細胞免疫分型，探討其對于結(jié)締組織疾病出現(xiàn)肺彌漫性病變的原因是感染，還是免疫損傷所致提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院于2011年5月至2013年5月期間收治的25例結(jié)締組織疾病并發(fā)間質(zhì)性肺病變患者。早期間質(zhì)性肺病變的胸部CT影像表現(xiàn)：兩肺彌漫性分布的磨玻璃影、網(wǎng)狀陰影，診斷按2012年風濕病新版全套指南標準［3］。年齡24－80歲，平均54.2±16.8歲，其中男11例，女14例。結(jié)締組織疾病組病種構(gòu)成為：類風濕關(guān)節(jié)炎7例，多發(fā)性肌炎7例，皮肌炎4例，干燥綜合征4例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡3例，另選取25例健康人作為正常對照組，年齡30－77歲，平均52.2±15.7歲，其中男13例，女性12例。3例患者采取淋巴細胞免疫分型血液標本前使用激素，其余患者及健康對照組均未使用糖皮質(zhì)激素。所有病例均排除合并肺部感染引起肺間質(zhì)改變。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑：CD45－FITC／CD4－PE／CD8－ECD／CD3－PC5（貨號：6607013）；細胞裂解液：OptiLyse○RNO－lysing Solution（貨號：A11894）；流式細胞儀：Beckman Coulter FC500；以上所有試劑均購自美國Beckmen Coulter公司。

1.2.2 血液樣本制備：采集患者及正常健康人外周血2ml，加入到EDTA抗凝的真空管中，混勻。取三只流式細胞儀上樣管，分別命名為同型對照管和實驗管1和實驗管2，每管中均加入100μl抗凝全血，然后分別加入20μl同型對照抗體和CD45－FITC／CD4－PE／CD8－ECD／CD3－PC5抗體和CD45－FITC／CD56－PE／CD19－ECD／CD3－PC5，充分混勻，避光室溫孵育15min；然后向每管中加入紅細胞裂解液500μl，充分混勻，避光孵育10min后加入500 μl PBS，1 000r／min離心5min，棄上清，每管加入500μl鞘液，混勻，等待上機檢測。

1.2.3 指標測定：外周血淋巴細胞亞群及NK細胞檢測均采用流式細胞檢測技術(shù)，由我院中心實驗室專人操作檢測。

1.3 統(tǒng)計學分析采用GraphPad InStat軟件包，數(shù)據(jù)用ˉx±s表示，組間分析采用方差齊性分析及t檢驗，P＜0.05為差別有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

結(jié)締組織疾病組與健康人的外周血淋巴細胞免疫分型結(jié)果比較見表1。

表1 兩組外周血淋巴細胞免疫分型結(jié)果比較±s）

表1 兩組外周血淋巴細胞免疫分型結(jié)果比較±s）

注：＊示與正常對照組比較P＜0.05。

組別n CD3＋CD3＋CD4＋CD3＋CD8＋CD3－CD19＋CD3－CD56＋CD4＋／CD8＋結(jié)締組織疾病組25 70.8±12.5 37.5±7.5 31.0±11.8＊14.4±9.7 11.0±6.9＊1.43±0.56正常對照組25 66.2±5.0 36.3±3.9 25.3±3.4 13.3±3.7 15.3±5.2 1.46±0.25

3 討論

T細胞免疫是由于各種細胞亞群共同參與的結(jié)果，不同疾病可導致T淋巴細胞亞群發(fā)生不同程度的改變，如與健康人進行比較，可以客觀地反映機體的免疫狀況，判斷患者的病情進展快慢以及評價療效。間質(zhì)性肺病可能與全身炎癥性紊亂和自身免疫損傷有關(guān)，在彌漫性肺疾病時，CD8＋T細胞被認為起細胞毒性或抑制性作用，依據(jù)抗原刺激不同而有差異［4］。本文研究結(jié)果顯示結(jié)締組織疾病組CD8＋淋巴細胞明顯高于正常對照組，說明此時體內(nèi)發(fā)生免疫功能的紊亂，引起機體免疫性病變的發(fā)生、發(fā)展，從而導致結(jié)締組織疾病合并間質(zhì)性肺炎的出現(xiàn)。因此，結(jié)締組織疾病活動初期合并間質(zhì)性肺病變時，T淋巴細胞亞群的數(shù)量及功能改變可能早于其原發(fā)病的特異性免疫學指標的改變，如果能在這個階段對機體的免疫學異常進行干預，則對改善結(jié)締組織疾病和肺部病變的治療效果和預后大有益處，外周血淋巴細胞分型可幫助鑒別肺部間質(zhì)病變是感染、還是免疫損傷所致。

CD56分子是自然殺傷細胞（NK細胞）表面主要的表面標記，NK細胞不僅是機體內(nèi)的第一道免疫防御屏障，而且也具有免疫調(diào)節(jié)能力，NK細胞主要功能有：①抗腫瘤（免疫監(jiān)視），尤其是對淋巴瘤、白血病殺傷作用最佳。②抗感染（免疫防御）：抗病毒、細菌、真菌等感染。③對T、B淋巴細胞、骨髓干細胞具有調(diào)控作用（免疫自穩(wěn)）。本文研究結(jié)果顯示結(jié)締組織疾病組NK細胞明顯低于正常對照組，任英等報道NK細胞片段可能參與調(diào)節(jié)肺纖維化的進展［5］，具體作用機制還不清楚。

總之，在間質(zhì)性肺病變中，外周血淋巴細胞免疫分型可能幫助鑒別結(jié)締組織疾病合并間質(zhì)性肺炎是免疫損傷、還是感染所致，在今后的工作中，應(yīng)進一步加大觀察標本的例數(shù)，同時對單純結(jié)締組織疾病造成的肺病變與結(jié)締組織疾病合并肺炎時的T細胞亞群的變化進行觀察，從而為臨床實踐提供更有效的實驗室依據(jù)。

［1］Fischer A，West SG，Swigris JJ，et al.Connective Tissue Disease－Associated Interstitial Lung Disease：A Call for Clarification［J］.Chest，2010，138（2）：251.

［2］Vij R，Noth I，Strek ME.Autoimmune－Featured Interstitial Lung Disease：A Distinct Entity［J］.Chest，2011，140（5）：1292.

［3］中華醫(yī)學會風濕病學分會.風濕病新版全套指南24個［J］.2012.

［4］Daniene J，Gaidamoniene D，Liubartaite M，et al.Subpopulations of T lymphocytes in patients with disseminated lung diseases［J］.Tubercle and Lung Disease，1995，Supplement（2）：76.

［5］任 英，朱 平.炎癥細胞及細胞因子在間質(zhì)性肺病炎癥和纖維化中的作用［J］.細胞與分子免疫學雜志，2011，27（11）：1272.

2014－01－14）

1007－4287（2015）02－0237－02

＊通訊作者