PDCD4在口腔鱗癌中的表達及意義

劉 桐，魏秀峰＊，孫 鑫，呂珊珊，唐冠群

（吉林大學口腔醫院1.口腔黏膜病科；2.正畸科，吉林長春130021）

PDCD4在口腔鱗癌中的表達及意義

劉 桐1，魏秀峰1＊，孫 鑫1，呂珊珊1，唐冠群2

（吉林大學口腔醫院1.口腔黏膜病科；2.正畸科，吉林長春130021）

目的研究PDCD4蛋白在口腔鱗癌組織中的表達及臨床意義。方法 應用免疫組織化學SP法檢測PDCD4蛋白在54例口腔鱗癌組織和15例正常口腔黏膜組織中的陽性表達，并結合臨床資料進行統計學分析。結果

口腔鱗癌組織PDCD4蛋白的陽性表達率明顯低于口腔正常黏膜組織（P＜0.01）。隨著PDCD4表達水平的降低，口腔鱗癌惡性程度增高的可能性也隨之增加（P＜0.05）。PDCD4蛋白表達與口腔鱗癌淋巴結轉移無明顯相關性（P＞0.05）。結論 PDCD4蛋白在口腔鱗癌中低表達，與口腔鱗癌的發生發展有密切聯系。

口腔鱗狀細胞癌；程序性細胞死亡因子4；免疫組織化學

（Chin J Lab Diagn，2015，19：0220）

程序性細胞死亡因子4（programmed cell death 4，PDCD4）是一種在細胞調亡過程中表達上調的基因，其已被證實為是一種腫瘤抑制基因。已有研究［1－4］表明：PDCD4在許多人惡性腫瘤中表達下調或缺失，或能夠促進多種腫瘤細胞發生凋亡，例如腎癌、胃癌、結腸癌以及尿路上皮癌等。但有關PDCD4在口腔鱗癌組織中的表達研究在國內尚未見報道。本研究利用免疫組織化學法，探討PDCD4在口腔鱗狀細胞癌發生發展中的影響以及與腫瘤臨床病理分期的關系，檢測PDCD4在口腔鱗癌中的表達并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2011.01～2013.03吉林大學口腔醫院口腔頜面外科收治的住院患者病理診斷明確的口腔鱗癌標本54例作為口腔鱗癌組（有淋巴結轉移者23例，無淋巴結轉移者31例），15例正常口腔黏膜組織作為對照組，所有患者術前都未作放療、化療及其它針對腫瘤的治療。

1.2 主要試劑及儀器鼠抗人PDCD4抗體（美國圣克魯斯生物技術公司），SP免疫組織化學試劑盒及DAB顯色試劑盒（福州邁新生物技術開發有限公司），陽離子防脫玻片（北京中杉金橋生物技術有限公司）。

1.3 免疫組織化學法檢測PDCD4的陽性表達

標本用10%甲醛固定，脫水，石蠟包埋。連續切片，切片厚度2μm，常規脫蠟，一抗稀釋至1∶200，采用SP法染色，DAB顯色，蘇木精復染，常規脫水，干燥，封片。

1.4 PDCD4陽性表達判定標準PDCD4主要在核周、細胞漿陽性表達，棕黃色或黃褐色顆粒。在高倍視野下（400x），選取3～5個陽性視野進行計數，根據染色強度和陽性率進行評分判定。①染色強度：陰性—0分，染色弱但明顯強于陰性對照者—1分，染色較強者—2分；染色強—3分。②陽性率：未見陽性細胞或陽性率＜10%為陰性（－）計0分，陽性率＜30%為陽性（＋）計1分，31%～60%為2分；＞60%為3分。上述兩種分值相加大于等于3分為陽性［5］。

1.5 統計學分析結果采用SPSS17.0軟件統計分析，PDCD4各組間陽性表達率采用χ2檢驗（必要時采用校正χ2檢驗或Fisher精確檢驗），以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PDCD4蛋白在不同組織中的表達率在正常口腔黏膜上皮組織中PDCD4陽性顆粒以核周、細胞漿表達為主，呈棕黃色或黃褐色顆粒，陽性部位以鱗狀上皮的基底細胞、棘細胞多見（見圖1），在口腔鱗癌組織中PDCD4陽性顆粒表達以細胞漿為主（見圖2）。PDCD4在口腔鱗癌組織中的陽性表達率為35.2%（19／54），在正常口腔黏膜組織中的陽性表達率為100%（15／15），組間差異有顯著統計學意義（P＜0.01）（見表1）。

2.2 PDCD4蛋白表達與口腔鱗癌惡性程度及淋巴結轉移的關系PDCD4的陽性表達率隨口腔鱗癌惡性程度的增高而降低，高分化及中分化鱗癌組織的PDCD4陽性表達率均高于低分化鱗癌組織，組間比較差異有統計學意義（P＜0.05），而高分化與中分化口腔鱗癌組織間的PDCD4陽性表達率比較差異則無統計學意義（P＞0.05）。PDCD4陽性表達率在淋巴結轉移組與無淋巴結轉移組的組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）（見表2）。

表1 PDCD4蛋白在不同組織中的表達率

表2 PDCD4蛋白表達與口腔鱗癌惡性程度及淋巴結轉移的關系

圖1 PDCD4蛋白在正常口腔黏膜組織中的表達（SP×200）

圖2 PDCD4蛋白在口腔鱗癌組織中的表達（SP×200）

3 討論

口腔鱗狀細胞癌是發生在口腔黏膜最為常見的惡性腫瘤。口腔鱗癌常向區域淋巴結轉移，晚期可發生遠處轉移，其分化程度越差，惡性程度越高。近年來，口腔鱗癌的治療已取得了很大的進展，但治療手段仍以手術為主，會對患者造成一定程度傷害，而且患者接受治療后的生存率也沒有得到顯著的提高。

PDCD4是一種新的腫瘤抑制因子。人PDCD4基因定位于染色體10q24［6］，PDCD4的主要功能之一就是抑制依賴于AP－1（系膜細胞內活化蛋白－1）的轉錄，從而抑制真核翻譯起始因子eIF4A和eIF4G的功能［7，8］。有研究［9］發現PDCD4也可以與Twist1蛋白相互作用，從而下調YB－1（Y盒結合蛋白－1）的表達，抑制癌細胞的生長，并對某些化學療法產生調節性的阻抗作用。Saxena等［10］研究發現抑制AR（醛糖還原酶）的活性后可以通過ROS／AMPK／mTOR／AP1／4E－B－P1等多條通路，下調microRNA－21的表達，致使PDCD4的表達增加，從而可以抑制結腸癌細胞生長。

本研究結果表明，PDCD4蛋白在正常口腔黏膜組織與口腔鱗癌組織中均有不同程度的表達，但在口腔鱗癌組織中的表達明顯降低甚至缺失，而隨著腫瘤臨床病理分期越差，PDCD4表達程度越低。這提示著PDCD4可能與口腔鱗癌的發生發展與惡性程度密切相關。原因之一可能是因為失去了PDCD4的抑制作用，翻譯起始因子呈現過表達從而發揮了類似癌基因的作用。Allgayer等［11］研究表明PDCD4可以作為結直腸癌預后的客觀指標和潛在診斷標志。對于卵巢癌和結腸癌患者，PDCD4缺失是癌癥相關生存率的一個預測指標［12，13］。在小鼠肺癌模型中，霧化給予PDCD4復合物能夠促進細胞凋亡并抑制細胞增殖和腫瘤血管生成［14］。結合本研究結果，PDCD4也可能成為口腔鱗癌早期診斷與預后判斷的客觀指標。隨著研究不斷進展，對口腔鱗癌患者進行PDCD4靶基因治療或許也會成為一個新的治療途徑。

［1］Li X，Xin S，Yang D，et al.Down－regulation of PDCD4expression is an independent predictor of poor prognosis in human renal cell carcinoma patients［J］.J Cancer Res Clin Onco1，2012，138（3）：529.

［2］Cao Z，Yoon J H，Nam S W，et al.PDCD4expression inversely correlated with miR－21levels in gastric cancers［J］.J Cancer Res Clin Onco1，2012，138（4）：611.

［3］Chang KH，Miller N，Kheirelseid EAH，et al.MicroRNA－21and PDCD4expression in colorectal cancer［J］.European Journal of Surgical Oncology，2011，37（7）：597.

［4］Fischer N，G?ke F，Splittst?sser V，et al.Expression of programmed cell death protein 4（PDCD4）and miR－21in urothelial carcinoma［J］.Biochem Biophys Res Commun，2012，417（1）：29.

［5］Zhang H，Ozaki I，Mizuta T，et al.Involvement of programmed cell death 4in transforming growth factor－betal－induced apoptosis in human hepatocellular careinoma［J］.Oncogene，2006，25（45）：6101.

［6］Soejima H，Miyoshi O，Yoshinaga H，et al.Assignment of the programmed cell death 4gene（PDCD4）to human chromosome band 10q24by in situ hybridization［J］.Cytogenet Cell Genet，1999，87（1－2）：113.

［7］Yang HS，Jansen AP，Nair R，et al.A novel transformation suppressor，Pdcd4，inhibits AP－1transactivation but not NF－kB or ODC transactivation［J］.Oncogene，2001，20（6）：669.

［8］Yang HS，Jansen AP，Komar AA，et al.The transformation suppressor Pdcd4is a novel eukaryotic translation initiation factor 4Abinding protein that inhibits translation［J］.Mol Cell.Biol，2003，23（1）：26.

［9］Shiota M，Izumi H，Tanimoto A，et al.Programmed cell death protein 4down－regulates Y－box binding protein－1expression via a direct interaction with Twist1to suppress cancer cell growth［J］.Cancer Res，2009，69（7）：3148.

［10］Saxena A，Shoeb M，Ramana KV，et al.Aldose reductase inhibition suppresses colon cancer cell viability by modulating microRNA－21mediated programmed cell death 4（PDCD4）expression［J］.Eur J Cancer，2013，49（15）：3311.

［11］Allgayer H.Pdcd4，a colon cancer prognostic that is regulated by a microRNA［J］.Crit Rev Oncol Hematol，2010，73（3）：185.

［12］Mudduluru G，Medved F，Grobholz R，et al.Loss of programmed cell death 4expression marks adenoma－carcinoma transition，correlates inversely with phosphorylated protein kinase B，and is an independent prognostic factor in resected colorectal cancer［J］.Cancer，2007，110（8）：1697.

［13］Wei NA，Liu SS，LeungTH，et al.Loss of Programmed cell death 4（Pdcd4）associates with the progression of ovarian cancer［J］.Mol Cancer，2009，8：70.

［14］Jin H，Kim TH，Hwang SK，et al.Aerosol delivery of urocanic acidmodified chitosan／programmed cell death 4complex regulated apoptosis，cell cycle，and angiogenesis in lungs of K－ras null mice［J］.Mol Cancer Ther，2006，5（4）：1041.

Expression and significance of PDCD4 in oral squamous cell carcinoma

LIU Tong，WEI Xiu－feng，SUN Xin，et al.

（Department of Oral Mucosal Diseases，Stomatology Hospital，Jilin University，Changchun130021，China）

ObjectiveTo investigate the expression and significance of PDCD4in oral squamous cell carcinoma.MethodsPDCD4immunohistochemical expression was investigated in 54cases of oral squamous cell carcinoma and 15 cases of normal oral mucosa tissue，analyze its relationship with clinical data.ResultsThe positive rate of PDCD4protein was significantly lower in oral squamous cell carcinomas than that in normal oral mucosa tissues（P＜0.01）.And with the decreasing of PDCD4protein expression level，the malignant degrees of oral squamous cell carcinoma were also increased，which had statistically significant difference among groups（P＜0.05）.But the expression of PDCD4protein were no relationship to lymph node metastasis（P＞0.05）.ConclusionThe down－regulated expression of PDCD4protein was correlated with the pathogenesis and development in oral squamous cell carcinomas.

oral squamous cell carcinoma；PDCD4；immunohistochemistry

R739.8

A

劉桐（1988－），男，山東省泰安市人，在讀醫學碩士，主要從事口腔黏膜病基礎與臨床方面的研究。

2014－03－03）

1007－4287（2015）02－0220－03

＊通訊作者