超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株研究及耐藥性分析

李建芳

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株研究及耐藥性分析

李建芳

目的 探討β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)分離率增高原因, 對(duì)ESBLs進(jìn)行藥敏分析及耐藥率對(duì)臨床抗感染治療的影響。方法 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)：藥敏紙片頭孢他啶/克拉維酸和頭孢噻肟/克拉維酸分別與頭孢他啶和頭孢噻肟抑菌環(huán)直徑相差≥5 mm,判斷為陽(yáng)性, 即為產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株。藥敏試驗(yàn):用DL-96細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)隨機(jī)體外診斷試劑板測(cè)定藥敏。結(jié)果 384株細(xì)菌中, 產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶100株（26%）。分別產(chǎn)自肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌和枸櫞酸桿菌。亞胺培南和美羅培南敏感率100%, 頭孢西丁敏感率100%, 全部產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌對(duì)碳青霉烯類、頭霉烯類全部敏感, 對(duì)β-內(nèi)酰胺類/酶抑制劑敏感率也較高。結(jié)論 開(kāi)展ESBLs菌株的檢測(cè)對(duì)指導(dǎo)臨床抗感染治療合理用藥十分重要。

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；抗生素；耐藥質(zhì)粒；耐藥菌；耐藥率

隨著廣譜抗菌藥物的應(yīng)用, 尤其是第三代頭孢菌素的廣泛使用, 細(xì)菌耐藥現(xiàn)象日趨嚴(yán)重, 產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株也愈來(lái)愈多, 給臨床治療帶來(lái)強(qiáng)大壓力。為分析其原因,了解本院ESBLs分布情況及耐藥情況, 本院將近1年分離的384株陽(yáng)性菌株進(jìn)行ESBLs檢測(cè), 為配合臨床治療, 對(duì)藥敏情況進(jìn)行探討, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來(lái)源 384株陽(yáng)性菌來(lái)源于2013年1～12月本院門診和病房患者, 以ICU病房患者居多。分離標(biāo)本為痰液、尿液、分泌物, 對(duì)送檢標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)35℃孵育18～24 h和鑒定, 采用紙片擴(kuò)散法檢測(cè)ESBLs。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922, 肺炎克雷伯菌株ATCC700603。操作遵循《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》。

1.2 藥敏紙片及鑒定板 藥敏紙片和M-H瓊脂為北京天壇藥物生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。頭孢噻肟(CTX)30 μg, 頭孢他啶(CAZ)30 μg, 頭孢他啶/克拉維酸(30 μg/10 μg), 頭孢噻肟/克拉維酸(30 μg/10 μg)。藥敏鑒定板為珠海迪爾生物工程有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè) 將產(chǎn)ESBLs菌株按K-B法制備菌液和接種平皿, 采用頭孢他啶/克拉維酸與頭孢他啶, 頭孢噻肟/克拉維酸與頭孢噻肟藥敏紙片, 經(jīng)35℃孵育18～24 h觀察結(jié)果, 頭孢噻肟/克拉維酸和頭孢他啶/克拉維酸分別與頭孢噻肟和頭孢他啶藥敏紙片抑菌環(huán)直徑相差≥5 mm, 判斷為ESBLs陽(yáng)性, 既為產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌, 同時(shí)用DL-96細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)隨機(jī)體外診斷試劑板驗(yàn)證ESBLs。

1.3.2 藥敏試驗(yàn) 運(yùn)用珠海迪爾生物工程有限公司提供的DL-96細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng), 按照其操作方法用細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)隨機(jī)體外診斷試劑板測(cè)定細(xì)菌藥敏。

2 結(jié)果

2.1 384株細(xì)菌產(chǎn)ESBLs檢測(cè)結(jié)果 384株細(xì)菌中, 產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶100株, 占26%。其中176株肺炎克雷伯菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶55株, 占31%；128株大腸埃希菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶36株, 占28%；31株陰溝腸桿菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶3株, 占10%；40株銅綠假單胞菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶5株, 占13% ；9株枸櫞酸桿菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶1株, 占11%。

2.2 100株ESBLs細(xì)菌對(duì)18種抗生素的耐藥情況, 見(jiàn)表1。

表1 100株ESBLs細(xì)菌對(duì)18種抗生素的耐藥情況(n, %)

3 討論

從結(jié)果中可以看出, ESBLs菌株檢出率較高, 384株細(xì)菌中共檢出產(chǎn)ESBLs菌株100株, 總檢出率為26%, 這是由于廣譜抗生素的廣泛使用, 細(xì)菌耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)峻, 這給臨床治療帶來(lái)很大壓力, 應(yīng)引起臨床醫(yī)生重視, 說(shuō)明合理使用抗生素至關(guān)重要。肺炎克雷伯菌檢出率為31%, 所占比例最高, 大腸埃希菌次之為28% , 陰溝腸桿菌和銅綠假單胞菌及枸櫞酸桿菌檢出率分別為10%、13%、11%。整個(gè)檢驗(yàn)中以肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌分離率占主導(dǎo)地位, 由于耐藥質(zhì)粒的播散, 很少產(chǎn)生ESBLs的陰溝腸桿菌和枸櫞酸桿菌也出現(xiàn)了超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株, 說(shuō)明ESBLs已不局限在肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌, 不斷的向腸桿菌科其他菌種及腸桿菌科以外的異種菌間蔓延, 致使產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌珠越來(lái)越多, 這種情況不容樂(lè)觀。以上統(tǒng)計(jì)客觀的反映了本院ESBLs的分布情況, 為本院抗感染治療提供幫助。

ESBLs由質(zhì)粒介導(dǎo), 從TEM-1、TEM-2和SHV-1的1個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸突變而來(lái), ESBLs的產(chǎn)生是由于大量使用抗生素尤其是第三代頭孢菌素藥物的使用, 在抗生素選擇壓力下, 一些菌株會(huì)產(chǎn)生ESBLs, 水解或滅活β-內(nèi)酰胺類抗生素,造成對(duì)抗生素的耐藥, 耐藥基因?yàn)橘|(zhì)粒介導(dǎo)尤其肺炎克雷伯菌多數(shù)含有SHV-12和 SHV-29兩種酶, 這些產(chǎn)酶菌株可在同種或異種菌間接合、轉(zhuǎn)化和傳導(dǎo)而轉(zhuǎn)移, 使敏感菌變成耐藥菌, 引起交叉感染和耐藥菌擴(kuò)散。產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶, 無(wú)論體外藥敏如何, 用青霉素、頭孢菌素類和單酰胺類藥物如氨曲南治療均無(wú)效, 往往體外藥敏試驗(yàn)不能很好的反映這種現(xiàn)象。從表1顯示, ESBLs雖對(duì)頭孢菌素有很高的耐藥率, 仍有一定的敏感性, 這會(huì)誤導(dǎo)臨床用藥。

ESBLs不僅對(duì)頭孢菌類存在嚴(yán)重耐藥, 對(duì)喹諾酮類、氨基糖苷類和磺胺類等也有不同程度的耐藥, 產(chǎn)酶菌珠比非產(chǎn)酶菌珠耐藥率高, 表1顯示慶大霉素耐藥率46%、阿米卡星耐藥率39%、環(huán)丙沙星耐藥率34%、左氧氟沙星耐藥率29%、SMZ耐藥率80%, 這是因攜帶ESBLs的質(zhì)粒上可同時(shí)攜帶對(duì)氨基糖苷類和喹諾酮類等多種藥物的耐藥基因, 導(dǎo)致對(duì)這些常用藥物較嚴(yán)重的交叉感染。從表1可見(jiàn), 亞胺培南和美羅培南敏感率100%, 頭孢西丁敏感率100%, 全部產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌對(duì)碳青霉烯類、頭霉烯類全部敏感, 對(duì)β-內(nèi)酰胺類/酶抑制劑敏感率也較高, 因此治療由ESBLs引起的感染最有效的藥物是碳青霉烯類、頭霉烯類, 其次是β-內(nèi)酰胺酶酶抑制劑復(fù)合藥。

隨著質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶發(fā)生率的不斷增加,多重耐藥不斷出現(xiàn),給臨床治療帶來(lái)很大困難, 要避免耐藥性的產(chǎn)生及蔓延,從根本上控制ESBLs的分離率, 除要合理使用抗生素外, 如情況允許可隔離患者, 防止耐藥細(xì)菌擴(kuò)散和傳播。

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.11.128

2014-12-02］

464000 河南省信陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科