《傷寒論》桂枝、甘草配伍對心陽虛證大鼠心肌能量代謝酶活性的影響*

姚鳳云，劉 成，劉春花，王炳志

(江西中醫藥大學基礎醫學院，江西 南昌 330004)

·實驗研究·

《傷寒論》桂枝、甘草配伍對心陽虛證大鼠心肌能量代謝酶活性的影響*

姚鳳云，劉 成，劉春花，王炳志

(江西中醫藥大學基礎醫學院，江西 南昌 330004)

目的：以能量代謝相關酶為考核指標，探討《傷寒論》桂枝、甘草配伍“辛甘化陽”的內涵。方法：將大鼠按體質量隨機分為正常對照組、模型對照組和桂枝、甘草不同配伍1～8組。采用鹽酸普羅帕酮誘導大鼠心陽虛證模型。動物末次給藥后50 min，剪取相同部位心肌組織0.1 g左右，制成100 g/L的勻漿液，離心，分離上清液，檢測組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)、Ca2+-Mg2+ATP酶和Na+-K+ATP酶活力。結果：《傷寒論》桂枝、甘草各配伍組均能提高大鼠心肌組織SOD、GPX、Ca2+-Mg2+ATP酶、Na+-K+ATP酶活力，其中配伍4組的SOD、配伍5組的GPX、配伍3組的Ca2+-Mg2+ATP酶和Na+-K+ATP酶活力與其相對應的模型對照組對比，差別有統計學意義(P<0.05)。結論：《傷寒論》桂枝、甘草配伍辛甘化陽配伍原理的內涵與干預心陽虛證大鼠心肌組織能量代謝酶有關，其作用的發揮與桂枝、甘草配伍比例及煎煮時間密切相關。

《傷寒論》；桂枝；甘草；心陽虛證；辛甘化陽；能量代謝；配伍原理

《傷寒論》作為一部以治療狹義傷寒證為主的經典著作，“辛甘化陽”思想貫穿其始末，筆者通過對《傷寒論》113方的配伍分析,將其“辛甘化陽”法在方劑中的作用歸納為9個方面[1]，代表配伍如桂枝、甘草、干姜、甘草、附子與甘草等，其中桂枝、甘草配伍是《傷寒論》中“辛甘化陽”出現頻率最高的一組，共有36首方，占方劑總數的31.86%。從滋陰和陽的桂枝湯到調和陰陽的小建中湯、從溫通心陽的桂枝甘草湯到氣血陰陽并調的炙甘草湯，無不是桂枝、甘草的配伍。因此，本課題以桂枝、甘草配伍藥組為切入點，采用均勻設計方法，從能量代謝酶層面，對其“辛甘化陽”的內涵進行研究，旨在闡明二者配伍“辛甘化陽”的科學本質，為臨床應用該配伍理論提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 動 物

SFP級SD雄性大鼠，44～47日齡，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號：SCXK(湘)2011-0003。

1.2 藥品、試劑與儀器

桂枝(批號301103871，產地廣西)、甘草(批號301133667，產地內蒙古)，均購自北京同仁堂(亳州)飲片有限公司。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)、超微量Ca2+-Mg2+ATP酶、超微量Na+-K+ATP酶試劑盒，均由南京建成生物工程研究所生產，批號依次為20131119，20131121，20131122，20131122。 UV1800紫外可見分光光度計，日本島津公司產品；Tissuelyser 24型全自動樣品快速研磨儀，上海凈信實驗設備科技部產品；CT14RD型低溫冷凍離心機，上海天美生化儀器設備工程有限公司產品；BT25S電子分析天平(十萬之一)，賽多利斯科學儀器公司產品。

1.3 桂枝、甘草配伍設計

《傷寒論》桂枝、甘草配伍，桂枝用量最大五兩(25 g)，最小六銖(1.25 g)；甘草用量最大四兩(20 g)，最小六銖(1.25 g)。采用均勻設計法，具體因素水平及均勻設計見表1～3。

表1 桂枝、甘草不同配伍因素水平表

表2 均勻設計表U8*(85)

表3 均勻設計表U8*(85)使用表

1.4 動物分組

大鼠常規飼養1周后，按體質量隨機分為10組，即正常對照組、模型對照組和桂枝、甘草不同配伍1～8 組，即A1B4C7(配伍1組)、A2B8C5(配伍2組)、A3B3C3(配伍3組)、A4B7C1(配伍4組)、A5B2C8(配伍5組)、A6B6C6(配伍6組)、A7B1C4(配伍7組)和A8B5C2(配伍8組)，具體配伍劑量見均勻設計表2，每組10只。

1.5 藥物制備方法

桂枝、甘草各配伍劑量組藥物加10倍量水，浸泡30 min;按照表2設計，煎煮2次;4層紗布過濾，合并兩次濾液;濃縮至1∶1藥液(即1 g生藥/mL藥液)，放置4 ℃冰箱，備用。

1.6 慢性心陽虛證模型的建立

采用鹽酸普羅帕酮法誘導，對文獻[2]方法進行改進，鹽酸普羅帕酮劑型由注射劑改為片劑，給藥方式由腹腔注射改為灌胃給藥，具體操作如下：除正常對照組外，其他組動物每天上午9時灌胃給予鹽酸普羅帕酮片，25 μg/g體質量，隔日1次，持續給予8次。每次灌胃前均重新稱量體質量，并作為該次用藥劑量的計算標準。正常對照組灌胃同體積的純凈水。

1.7 給藥方法

大鼠經鹽酸普羅帕酮誘導8次后，各給藥組按表4給藥劑量于每天下午灌胃給予相應的藥物，10 μL/g，連續30 d。正常對照組和模型對照組灌胃給予同體積的水。給藥期間，除正常對照組外，其余各組繼續給予鹽酸普羅帕酮灌胃，每隔2日1次。每周稱量體質量2次。

1.8 檢測指標

各組動物末次給藥后50 min，以氨基甲酸乙酯麻醉(1 g/kg)；仰臥固定，打開胸腔，迅速剝離心臟；生理鹽水洗凈殘留血液；剪取相同部位組織0.1 g左右，精細稱量質量；加9倍體積預冷生理鹽水，放置于預冷的全自動組織研磨儀內，60Hz頻率下勻漿90 s，制成質量分數100 g/L的心肌組織勻漿液；4 ℃、4 500 r/min離心10 min；分離上清液，按照試劑盒說明書用紫外可見分光光度計分別于595 nm、550 nm、412 nm和636 nm檢測組織蛋白、SOD、GPX、Ca2+-Mg2+ATP酶和Na+-K+ATP酶活力。動物處理前禁食但不禁水14 h。

1.9 統計學方法

2 結 果

桂枝、甘草各配伍組大鼠心肌組織SOD、GPX、Ca2+-Mg2+ATP酶、Na+-K+ATP酶活力值均高于其相對應模型對照組。其中配伍4組的SOD、配伍5組的GPX、配伍3組的Ca2+-Mg2+ATP酶和Na+-K+ATP酶活力與其相對應的模型對照組對比，差別均有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 各組大鼠心肌組織SOD、GPX、 ATP酶活力對比

注：與模型對照組對比，*P<0.05。

3 討 論

配伍是方劑“活的靈魂”，方劑配伍原理探究是方劑研究的核心[3]。辛甘化陽是方劑性味配伍中五味配伍法之一，亦稱辛甘助陽或辛甘扶陽[4]。該配伍理論的淵源要追溯到《內經》時代，《素問·至真要大論》在闡述藥物性味時指出“辛甘發散為陽”，金代醫家成無己在《注解傷寒論》中首先提出辛甘化陽的概念。所謂辛甘化陽，是指由辛味藥和甘味藥相合，以化生或資助陽氣的一種配伍方法[2]。此處的陽氣即五臟陰陽精氣理論所指的具有溫煦、推動、興奮等作用的氣，是人體生命活動的物質基礎，是影響人體生命健康的關鍵，是生命的動力和源泉，正如《素問·生氣通天論》所云：“陽氣者，若天與日，失其所則折壽而不彰”。現代醫學則提出能量是生命的動力[5]。因此，筆者將中醫“陽氣”與現代醫學“能量”聯系起來，從能量代謝相關酶層面探討《傷寒論》桂枝、甘草配伍“辛甘化陽”原理與內涵。

在正常的生理情況下，機體中的抗氧化防御系統與機體產生的活性氧處于一個動態的平衡狀態；當機體受到外部有害因素的影響,這種平衡就可能被破壞,表現為活性氧過多或抗氧化劑減少,從而使活性氧堆積產生進行性的脂質過氧化并最終損傷細胞。SOD和GPX均是機體抗氧化防御體系中重要的酶, 具有清除超氧自由基,從而抑制心肌細胞膜損害，提高心肌ATP酶活力，達到間接調節心肌組織能量代謝作用[6]。ATP作為組織細胞能夠直接利用的唯一能源,其合成和分解是機體內能量轉移和利用的關鍵環節。ATP的分解是在ATP酶作用下進行的。ATP酶既可影響產能過程,又關系到能量的轉移和利用；因此，其活性是反映機體能量代謝水平的一項重要指標。Ca2+-Mg2+ATP酶和Na+-K+ATP酶是心肌內能量代謝的標志酶, 在細胞運動、收縮、代謝調節中起重要作用，其活性的降低則是細胞膜受損的標志之一,與缺氧及氧自由基生成有關[7]。

本實驗結果表明：《傷寒論》桂枝、甘草各配伍組均能提高鹽酸普羅帕酮所致心陽虛證大鼠心肌組織SOD、GPX、Ca2+-Mg2+ATP酶、Na+-K+ATP酶活力，其中配伍4組的SOD、配伍5組的GPX、配伍3組的Ca2+-Mg2+ATP酶和Na+-K+ATP酶活力與其相對應的模型對照組對比，差別均具有統計學意義(P<0.05)。因此，筆者認為：《傷寒論》桂枝、甘草配伍“辛甘化陽”原理的內涵與干預心陽虛證大鼠心肌組織能量代謝酶有關，其作用的發揮與桂枝、甘草配伍比例及煎煮時間密切相關，當桂枝12 g、甘草21 g、煎煮15 min，桂枝15 g、甘草6 g、煎煮50 min，桂枝9 g、甘草9 g、煎煮25 min時，對SOD、GPX、Ca2+-Mg2+ATP酶、Na+-K+ATP酶活力影響最為明顯。

[1]姚鳳云，王炳志，丁舸.淺析《傷寒論》之辛甘化陽法[J].時珍國醫國藥，2010，21(11)：2959-2960.

[2]曾代文，彭成，余成浩，等.附子與干姜組分配伍對急性心衰心陽虛證大鼠血漿腎素-血管緊張素-醛固酮系統的影響[J].中藥藥理與臨床，2011,27(4)：5-7.

[3]李然，張林，李冀.方劑學以“配伍”為核心教學法的探討[J].遼寧中醫藥大學學報，2011，13(8)：158-159.

[4]滕佳林，韓濤.辛甘扶陽的配伍意義與方劑舉隅[J].南京中醫藥大學學報，2003,19(5)：270-272.

[5]徐建興，呂斌.呼吸鏈作為“生命引擎”的工作原理和中醫陰陽五行理論的陰陽元素[J]. 科學中國人，2011，(19)：76-79.

[6]王詠梅. 自由基與谷胱甘肽過氧化物酶[J].解放軍藥學學報，2005，21(5):369-371.

[7]李麗萍, 劉秀芳, 寧艷花，等. DEHP對大鼠睪丸能量代謝酶的影響及其氧化損傷作用[J]. 寧夏醫科大學學報，2010，32(1)：74-77.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)01-0059-04

R222

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.01.31

王炳志，副教授，wbzh1123@163.com

國家自然基金資助項目(81260524)；江西省自然基金資助項目(20122BAB205072)；江西省衛生廳資助項目(2012Z001)

2014-08-28；

2014-10-30