iASPP、ASPP2在宮頸癌中表達(dá)意義及與HPV16/18相關(guān)性研究

徐杰 孟運(yùn)蓮

摘要：癌基因過度表達(dá)與抑癌基因功能對(duì)其抑制的異常是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生與發(fā)展的最終結(jié)果及重要因素。本文通過檢測(cè)宮頸癌、宮頸良性瘤以及正常宮頸組織中iASPP、ASPP2基因和HPV16/18 DNA的表達(dá)水平，旨在探討HPV16/18感染和iASPP、ASPP2表達(dá)異常與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，結(jié)果顯示iASPP、HPV16/18在宮頸癌組織中表達(dá)明顯增高但是ASPP2表達(dá)明顯降低，iASPP、HPV16/18的表達(dá)與宮頸癌癌的侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，iASPP、ASPP2、HPV16/18的異常表達(dá)可能是宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的重要因素。

關(guān)鍵詞：iASPP;ASPP2;HPV16/18;宮頸癌

高危HPV HPV16/18是宮頸癌主要致癌因子^【1】。研究證實(shí)HPV中的E6、E7蛋白調(diào)控p53抑制了細(xì)胞周期的阻滯及細(xì)胞凋亡導(dǎo)致細(xì)胞增殖和凋亡之間不平衡而致宮頸病變，同時(shí)iASPP在正常組織細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性細(xì)胞時(shí)起著極其重要的促進(jìn)作用^【2】。其中ASPP2與p53結(jié)合后可增強(qiáng)p53的促細(xì)胞調(diào)亡的功能，發(fā)揮抑制腫瘤的作用。

本研究重點(diǎn)檢測(cè)宮頸癌、宮頸良性瘤以及正常宮頸組織中HPV16/18 DNA和iASPP、ASPP2基因的表達(dá)水平，為宮頸癌的臨床診斷和治療提供客觀依據(jù)。

一、資料與方法

1.資料來源 收集本院2013年1月-2015年1月婦科住院治療的宮頸疾病患者手術(shù)切除的宮頸組織85例，其中宮頸癌45例，宮頸良性瘤20例，正常宮頸組織組織20例。全部為女性，臨床病歷資料完整，所有病例均術(shù)后常規(guī)病理檢查確診，術(shù)前均未化療、放療及免疫治療。簡(jiǎn)單隨機(jī)劃法分為A組45例（宮頸癌組織）、B組20例（宮頸良性瘤組織）、C組20例（正常宮頸組織），采用免疫組化方法檢測(cè)三組組織中iASPP、ASPP2 、HPV16/18表達(dá)水平進(jìn)一步分析三者的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系。各組患者年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（P<0.05）

2.方法

2.1 標(biāo)本取材?? 每例標(biāo)本同時(shí)取材2塊，一塊中性福爾馬林固定，石蠟包埋用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)、病理確診、組織分型等;一塊備用將石蠟塊制成4um厚的組織切片，經(jīng)脫錯(cuò)-脫苯-水化后，通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ASPP2、iASPP的表達(dá)水平。一抗為兔抗人iASPP、ASPP2抗體（稀釋度為1：200），以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

2.2? iASPP、ASPP2免疫組化及檢測(cè)方法? 載玻片經(jīng)過預(yù)處理，將組織連續(xù)切片，厚度約為4nm，將蠟片平鋪于水浴箱的水面上，自然展開后用防脫載玻片將醋片撈出，展開后室溫干燥、編號(hào)置于40℃恒溫烤箱中烤干備用。將組織切片按照XX方法進(jìn)行免疫組化染色、復(fù)染和封片。

iASPP、ASPP2的陽(yáng)性顆粒在細(xì)胞核，細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒即為陽(yáng)性細(xì)胞。綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性范圍，對(duì)iASPP、ASPP2蛋白的表達(dá)進(jìn)行臨床病理評(píng)分。染色強(qiáng)度：基本未著色、染色與背景相似者為0分，著色淺、略高于背景者為1分，中度著色明顯高于背景者為2分，強(qiáng)染、著色深棕色者為3分;陽(yáng)性范圍：<10%為0分，10%-24%為1分，25%-49%為2分，50%-75%為3分，>75%為4分。染色強(qiáng)度和陽(yáng)性范圍相加，≥2分為陽(yáng)性。

2.3宮頸組織HPV16/18 DNA檢測(cè)? 用試劑盒抽取各組HPV樣本 DNA，用HPV16/ 18引物擴(kuò)增片段，216bp左右處出現(xiàn)DNA條帶為HPV16/18 DNA陽(yáng)性。

3. 統(tǒng)計(jì)方法

使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，所有計(jì)量資料的數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（X±s）表示，計(jì)量資料比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較用X2檢驗(yàn)， 采用Spearman等級(jí)相關(guān)的方法，對(duì)相關(guān)性進(jìn)行分析，P<0.05為差異有顯著性。

二、結(jié)果與分析

1 iASPP、ASPP2在宮頸癌、宮頸良性瘤和正常宮頸組織中的水平表達(dá)比較見表1及圖1。

表1 iASPP、ASPP2在宮頸癌、宮頸良性瘤和正常宮頸組織中的水平表達(dá)比較[n，（%）]

組別??? 例數(shù)

iASPP????????????????? ASPP2

陽(yáng)性數(shù)?? 陽(yáng)性率（%）?? ??陽(yáng)性數(shù)?? 陽(yáng)性率（%）

A組???? 45???????? 40????? 95.55%????????? 2?????? 4.0%

B組???? 20???????? 11????? 55.0%?????????? 14????? 70%

C組???? 20????????? 1????? 5.0%??????????? 18????? 90.0%

圖1 iASPP、ASPP2在宮頸癌、宮頸良性瘤和正常宮頸組織中的水平表達(dá)

注： iASPP、ASPP2在宮頸癌、宮頸良性瘤和正常宮頸組織中的水平表達(dá)，A組分別為95.55%（40/45）、4.0%（2/45）;B組55.0%（11/20）、70.0%（14/20）;C組5.0%（1/20）;90.0%（18/20），P均<0.05，具有顯著性差異。

2.? iASPP、ASPP2的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系比較，見表2。

表2 iASPP、ASPP2的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系比較[n， （% ）]

病理特征?? 例數(shù)?????????????? ASPP2???????????????????? iASPP

陽(yáng)性數(shù)????? 陽(yáng)性率?????? 陽(yáng)性數(shù)??????? 陽(yáng)性率

年齡

<50?????? 16????????? 10??????? 62.62?????????? 10?????????? 62.62

≥50?????? 29????????? 20??????? 68.70?????????? 21?????????? 72.41

直徑

<2cm????? 18?????????? 22??????? 81.48?????????? 9?????????? 50.00

≥2cm????? 27?????????? 8???????? 44.44?????????? 21????????? 77.78

TNM

Ⅰ???????? 10?????????? 4???????? 40.0??????????? 6??????????? 60.0

Ⅱ???????? 25?????????? 20??????? 32.0?????????? 22?????????? 88.0

Ⅲ???????? 10?????????? 1?????? ??10.0?????????? 10?????????? 100.00

淋巴轉(zhuǎn)移

無???????? 20?????????? 9??????? 45.00???????????? 13???????? 65.00

有???????? 25?????????? 22?????? 24.00^▲? 21???????? 84.00^▲?

注：iASPP、ASPP2的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系比較，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者iASPP表達(dá)明顯高其它兩組，ASPP2表達(dá)較其它兩組明顯下降（P <0. 05）;隨著TMN分期及腫瘤大小的升高iASPP表達(dá)明顯增加，ASPP2顯著下降（P <0. 05） ，iASPP、ASPP2表達(dá)與年齡無關(guān)（P >0. 05）。

3.HPV16/ 18 DNA在宮頸癌、宮頸良性瘤和正常宮頸組織中的表達(dá)，見表3。

表3? HPV16/18 DNA在宮頸癌、宮頸良性瘤和正常宮頸組織中的表達(dá)? 例

組??? 別

例? 數(shù)

HPV16/ 18 DNA的表達(dá)

陽(yáng)性數(shù)

陽(yáng)性率（%）

A組

45

43

95.55^▲

B組

20

14

70.0

C組

20

2

5.0

注：宮頸癌組HPV16/18 DNA的表達(dá)率95.55%（43/45）明顯高于宮頸良性瘤組70.0%（14/20）和正常宮頸組織組5.0% （1/20），差異有顯著性（^▲P <0.01）。

4. HPV16/18 DNA的表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌臨床病理特征的關(guān)系

45例乳宮頸癌組織中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者HPV16/18 DNA的表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌者（P <0. 05）;HPV16/18 DNA的表達(dá)率與年齡、腫瘤大小無關(guān)（P >0. 05）。

5.? HPV16/18 DNA與p53蛋白的相關(guān)性分析

在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中，HPV16/18 DNA與iASPP? ASPP2的表達(dá)呈明顯正相關(guān)（r_s = 0. 714、0.133， P <0. 05），見表4。

表4? HPV16/18 DNA與iASPP、ASPP2的相關(guān)性分析 （ 例）

HPV16/18??? 例 數(shù)?????????? iASPP?????????????? ASPP2

陽(yáng)性????? 陰性????? 陽(yáng)性??????? 陰性

陽(yáng)性??????? 43??????? 39??? ?????4????????? 0?????????? 38

陰性???????? 2??????? 1????????? 1????????? 2??????????? 0

三、討論

大多數(shù)HPV能在宮頸扁平上皮中復(fù)制，使宮頸組織粘膜出現(xiàn)不典型增生直至惡變。本研究顯示宮頸癌組HPV16/18 DNA的表達(dá)率95.55%（43/45）明顯高于宮頸良性瘤組70.0%（14/20）和正常宮頸組織組5.0% （1/20），差異有顯著性（^▲P <0.05），這正與文獻(xiàn)研究相符。但僅僅感染病毒還不足以導(dǎo)致宮頸細(xì)胞的癌變，其他因素如：抑癌基因失活、癌基因的激活等在宮頸細(xì)胞癌變過程中同樣起著極其重要作用。

研究證實(shí)HPV16/18可能通過iASPP、ASPP2導(dǎo)致p53蛋白突變來促進(jìn)宮頸癌的發(fā)病、侵襲和轉(zhuǎn)移。這與本研究結(jié)果相符iASPP、ASPP2的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系比較，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者iASPP表達(dá)明顯高其它兩組，ASPP2表達(dá)較其它兩組明顯下降（P <0. 05）;隨著TMN分期及腫瘤大小的升高iASPP表達(dá)明顯增加，ASPP2顯著下降（P <0. 05）。HPV16/ 18感染和iASPP、ASPP2表達(dá)異常造成P53等抑癌基因突變來共同參與宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展，HPV16/18感染是在促進(jìn)APSS-P53整合，在正常宮頸細(xì)胞轉(zhuǎn)化成為惡性腫瘤的過程中ASPP2、iASPP發(fā)揮著重要的作用，這個(gè)結(jié)論與ASPP2、iASPP在其它腫瘤中的表達(dá)情況相同。iASPP、ASPP2 、HPV16/18與宮頸的癌發(fā)病和發(fā)展關(guān)系仍是一個(gè)值得進(jìn)一步探討的問題。

參考文獻(xiàn)：

[1]蘇勝發(fā)，盧冰，何常等.iASPP和ASPP2在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2010，17（2）：194-199.

[2]孟揚(yáng)，豐義寬等.胰腺癌組織中iASPP和ASPP2的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，33（3）：170-172.