黃芪總黃酮對小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療作用

李航 張沖 王瑩 鐘雪峰 胡立斌 張雪梅

摘要 [目的]研究黃芪總黃酮（TFA）對小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的影響。[方法]采用弗氏完全佐劑建立小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，設(shè)立空白組、模型組、陽性組及黃芪總黃酮高、中、低劑量組，測定小鼠足趾腫脹度和脾臟指數(shù)，通過Griess法測定血清中NO的含量，ELISA法測定血清中IL-1β的含量。[結(jié)果]黃芪總黃酮能減輕佐劑關(guān)節(jié)炎小鼠足趾腫脹度，下調(diào)脾臟指數(shù)，抑制血清NO和IL-1β的分泌。[結(jié)論]該研究表明黃芪總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠起到很好的治療作用，為臨床上的應(yīng)用提供了可靠的試驗依據(jù)。

關(guān)鍵詞 黃芪總黃酮；佐劑性關(guān)節(jié)炎；治療作用；小鼠

中圖分類號 S567.23+9 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）27-077-02

Treatment Effect of Total Flavonoids of Astragalus on Adjuvant Arthritis in Mice

LI Hang，ZHANG Chong，WANG Ying，ZHANG Xue-mei* et al

（Department of Animal Medicine，Agricultural College of Yanbian University，Yanji，Jilin 133002）

Abstract [Objective] The research aimed to study the effect of TFA on adjuvant arthritis in mice.[Method]The model of adjuvant arthritis was established by Freund's complete adjuvant.The mice were divided into blank group， model group， positive and TFA high， medium and low doses. The degree of toe swelling and spleen index were observed， the content of NO in serum was determined by Griess method and the content of IL-1β in serum was determined by ELISA method.[Result]TFA could reduce toe swelling degree， abate spleen index，inhibit the secretion of NO and IL-1β.[Conclusion]The results suggest that TFA could significantly treat adjuvant arthritis of mice. It provides a reliable experimental basis for application of TFA in clinic.

Key words Total flavonoids of Astragalus； Adjuvant arthritis； Treatment effect；Mice

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一類以關(guān)節(jié)滑膜炎為特征的慢性全身性自身免疫性疾病，其特點是足、趾小關(guān)節(jié)的對稱性、多關(guān)節(jié)、侵襲性炎癥[1]。經(jīng)常伴發(fā)關(guān)節(jié)器官受累，常由一個關(guān)節(jié)轉(zhuǎn)移到另外一個關(guān)節(jié)，病變關(guān)節(jié)呈現(xiàn)紅、腫、熱、痛等現(xiàn)象，嚴重者甚至出現(xiàn)潰爛，主要侵襲關(guān)節(jié)軟骨、韌帶、肌腱、關(guān)節(jié)腔和關(guān)節(jié)囊，導(dǎo)致足趾關(guān)節(jié)畸形及功能喪失[2]。

黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的根，具有補肺固表、補脾益氣、調(diào)節(jié)血糖含量、降壓、加強心肌收縮力、增強機體免疫力、保肝和抗菌作用[3-4]。黃芪總黃酮（TFA）為黃芪中的主要成分之一，具有抗輻射、抗突變、抗心肌缺血、抗疲勞、增強能量、抑制動脈粥樣硬化等生物學(xué)作用[5]。現(xiàn)代藥理學(xué)也表明，黃芪總黃酮在清除自由基中起重要作用，可以迅速清除超氧陰離子自由基和羥離子自由基，提高單核巨噬細胞吞噬功能[6]。徐璐等[7]研究發(fā)現(xiàn)黃芪總黃酮能夠促進小鼠脾淋巴細胞增殖，增強小鼠的免疫功能。該試驗通過建立佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠模型，測定小鼠足趾腫脹度、脾臟指數(shù)、血清中NO和IL-1β的含量，進一步闡明黃芪總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠的治療作用，從而為黃芪總黃酮的臨床應(yīng)用提供可靠的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1

試驗動物。昆明小白鼠（雄性），體重（20±2）g，由延邊大學(xué)實驗動物中心提供。

1.1.2

藥品與試劑。黃芪總黃酮，湖南華納大藥廠天然藥物有限公司產(chǎn)品；地塞米松（DXM），批號H4102005，河南潤弘藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；弗氏完全佐劑，Sigma公司產(chǎn)品；卡介苗，上海生物制品研究所產(chǎn)品；NO試劑盒，碧云天生物研究所生產(chǎn)；IL-1β試劑盒，R&D公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1

動物分組、建模及給藥。小鼠30只，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，隨機分為空白組、模型組、陽性組和TFA高、中、低劑量組，每組5只。小鼠足趾常規(guī)消毒，以微量注射器在小鼠左后足趾皮內(nèi)注射0.025 ml弗氏完全佐劑，空白組小鼠左后足趾皮內(nèi)注射0.025 ml生理鹽水。模型的評價指標依次為左后足趾數(shù)小時后出現(xiàn)紅腫、紅腫加重達最高峰、腫脹逐漸減輕、后見左后足再次腫脹加重，出現(xiàn)繼發(fā)性腫脹。造模后第19 d進行給藥，TFA高、中、低劑量組灌胃100、50、25 mg/kg，空白組和模型組給予同體積的生理鹽水，1次/d，連續(xù)給予21 d，陽性組腹腔注射DXM 5 mg/kg，每周2次。

1.2.2

小鼠足趾腫脹度測定。在小鼠左后趾同一位置進行標記，各組小鼠分別于致炎后第19、26、33、40 d用游標卡尺測量致炎一側(cè)的足趾腫脹度，計算小鼠致炎前后的腫脹度。

1.2.3

小鼠脾臟指數(shù)測定。在給藥21 d后，稱量小鼠體重，處死小鼠，取出脾臟，生理鹽水漂洗后用紗布吸干表面水分，電子天平上稱濕重，計算脾臟指數(shù)。脾臟指數(shù)=脾臟濕重量（mg）/體質(zhì)量（g）。

1.2.4

小鼠血清中NO及IL-1β含量測定。給藥21 d后，小鼠眼球取血，分離血清，Griess法測定NO的含量，ELISA法檢測IL-1β含量，按照試劑盒說明書進行操作。

1.2.5

統(tǒng)計學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析，結(jié)果以平均數(shù)標準差（X±SD）表示，組間比較用t檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃芪總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠足趾腫脹度的影響

由表1可見，模型組與空白組比較，足趾腫脹度具有極顯著差異（P<0.01），說明模型建立成功。黃芪總黃酮高、中、低劑量組與模型組相比較，在26 d時具有顯著性差異（P<0.05），33和40 d時具有極顯著差異（P<0.01），對佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠足趾腫脹度起到明顯抑制作用，表明黃芪總黃酮能夠顯著抑制足趾腫脹度，且呈一定的量效關(guān)系。

2.2 黃芪總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠脾臟指數(shù)的影響

由表2可見，模型組與空白組比較，脾臟指數(shù)具有極顯著差異（P<0.01），說明模型建立成功；黃芪總黃酮高、中、低劑量組脾臟指數(shù)與模型組相比較具有極顯著差異（P<0.01），說明黃芪總黃酮高、中、低劑量組對佐劑性關(guān)節(jié)炎起到治療作用，表明黃芪總黃酮能夠顯著降低脾臟指數(shù)，且呈一定的量效關(guān)系。

2.3 黃芪總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠血清中NO含量及IL-1β含量的影響

由表2可見，模型組與空白組比較，NO和IL-1β含量極顯著升高（P<0.01），說明模型建立成功。黃芪總黃酮高、中劑量組與模型組相比具有極顯著差異（P<0.01），極顯著下調(diào)炎性介質(zhì)NO和炎性因子IL-1β的水平，低劑量組對NO和IL-1β的抑制效果顯著（P<0.05），黃芪總黃酮高、中、低劑量組對NO和IL-1β的釋放具有不同程度的抑制作用。表明黃芪總黃酮能夠顯著或極顯著抑制NO和IL-1β的分泌，且呈一定的量效關(guān)系。

3 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一個多系統(tǒng)炎性的自身免疫病，是造成體力喪失和致殘的主要因素之一[7]。該試驗以探究黃芪總黃酮的抗炎效果為目的，以小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎為模型，進行了佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠足趾腫脹度、脾臟指數(shù)、NO和IL-1β含量的測定。

足趾腫脹度是佐劑性關(guān)節(jié)炎測量的一個重要指標。該試驗以弗氏完全佐劑誘導(dǎo)小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎，用藥前后分別對小鼠足趾腫脹度進行測定，結(jié)果表明隨著藥物劑量的增大，足趾腫脹度的抑制效果也隨之增強，呈一定的量效關(guān)系，從而表明黃芪總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎起到保護作用。

脾臟是重要的免疫器官，炎癥是免疫應(yīng)答的一部分，如果免疫系統(tǒng)有缺陷，炎癥也就不會產(chǎn)生[8]。該試驗中佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠脾臟指數(shù)明顯升高，用藥后，黃芪總黃酮高、中、低劑量組小鼠脾臟指數(shù)較模型組明顯下降，但高于正常水平，表明黃芪總黃酮能明顯降低因免疫功能異常增強而升高的脾臟指數(shù)，具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。

炎性介質(zhì)存在于血液中，由炎性細胞產(chǎn)生，在炎性反應(yīng)中大量地表達。NO能夠影響炎癥反應(yīng)的進程，如影響cGMP、NF-κB依賴的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子抑制劑IκB的活性，影響多種炎癥因子的表達等[9]。試驗結(jié)果表明，黃芪總黃酮組與模型組相比有顯著差異，證明黃芪總黃酮能夠抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠血清中炎性介質(zhì)NO的分泌。白細胞介素是由多種細胞產(chǎn)生的一類細胞因子，IL-1β是從巨噬細胞中產(chǎn)生的炎癥調(diào)節(jié)劑[10]。IL-1β可以促進蛋白酶的分泌，使關(guān)節(jié)滑膜炎性浸潤，可誘導(dǎo)關(guān)節(jié)滑液細胞大量增殖，促進滑液細胞的生成，在炎癥反應(yīng)中起到了重要的作用[11]。該試驗表明，黃芪總黃酮能降低佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠血清IL-1β水平，從而對小鼠的佐劑性關(guān)節(jié)炎起到治療作用。

黃芪總黃酮有高效、低毒等優(yōu)點，在臨床治療上具有很大的應(yīng)用發(fā)展空間。該試驗表明黃芪總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎具有保護作用。黃芪總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠保護作用的相關(guān)分子機制及對其他炎癥的影響有待于進一步研究。

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