不同提取方法對馬齒莧水提物自由基清除和抗菌活性影響的研究

徐琳

摘要 [目的]比較分析了常規水提法和超聲法2種方法獲得的馬齒莧水提物對自由基清除和抗菌活性影響。[方法]分別通過常規水提法和超聲法獲得了馬齒莧水提物，然后將不同濃度的馬齒莧水提物加入到反應液中，分別測試了它們的清除氧自由基、OH-自由基、DPPH自由基的活性，并分析比較了它們的抗菌活性。[結果]馬齒莧水提物能夠顯著地清除上述3種自由基，同時對測試的5種菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和黑曲霉）的生長均有一定的抑制作用；其中，超聲法獲得的馬齒莧水提物在各測試濃度點的抗氧化抗菌活性均較常規水提法獲得的馬齒莧水提物強。[結論]超聲法獲得的馬齒莧水提物具有較強的抗氧化抗菌活性。

關鍵詞 馬齒莧水提物；常規水提法；超聲法；自由基清除；抗菌活性

中圖分類號 S567.21+9 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）27-053-02

馬齒莧（Portulaca oleracea L.）為馬齒莧科植物的全草，又名長壽菜、螞蟻菜、瓜子菜等，性寒味酸，具有清熱解毒、散熱消腫之功效[1]。明代《本草綱目》等古醫書記載，馬齒莧具有清熱解毒、散血消腫、治痢之功效。現代藥理研究表明，馬齒莧具有提高人體免疫力、降血糖、抗癌、防治心臟病、抗菌、降血脂、抗衰老、抗氧化等作用[2-3]，這些功效與其含有多糖、生物堿、黃酮類、萜類、有機酸、多酚和蒽醌苷等生物活性成分有關[4]。不同提取方法對馬齒莧水提物中的各功能成分影響很大。各功能成分的差異是否對提取物的生化活性造成影響，這是一個很有價值的研究思路。

有關馬齒莧水提物抗氧化抗菌的研究已有前人報道，該試驗對常規法提取的馬齒莧水提物和超聲法提取的馬齒莧水提物的抗氧化抗菌活性進行測定，并進行對比分析，以便揭示不同提取方法對馬齒莧水提物抗氧化抗菌活性的影響效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試材。

馬齒莧為夏季在太原市郊采集，洗凈、切碎，于60 ℃烘干，備用。所用化學試劑均為分析純。

1.1.2 儀器。SN-CJ-1F 型單人雙面凈化工作臺（蘇州凈化設備有限公司）；MGC-250BP-2型培養箱（上海一恒科技有限公司 ）；索氏提取器（杭州聚同電子有限公司）；ACQ-600超聲波發生器（陜西翔達超聲技術工程部）；722光柵分光光度計（上海第三分析儀器廠）。

1.2 試驗方法

1.2.1 常規法馬齒莧提取物的制備。

稱取干馬齒莧100 g，用雙蒸水、1∶10 料液比于100 ℃下提取2 h，過濾，濾渣同上再提取一次，合并濾液。將所得濾液濃縮干燥，得到馬齒莧水提取物。

1.2.2 超聲法馬齒莧提取物的制備。

稱取干馬齒莧100 g，用雙蒸水、1∶10 料液比于100 ℃下在超聲萃取器中（400 W）提取1 h，過濾，濾渣同上再提取一次，合并濾液。將所得濾液濃縮干燥，得到馬齒莧水提取物。

1.2.3 清除O-2作用。

采用黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶-魯米諾產生O-2自由基的發光體系。測定原理是黃嘌呤氧化酶在有氧條件下，催化底物黃嘌呤氧化生成尿酸，同時產生O-2。O-2可與化學發光劑魯米諾反應，并伴隨化學發光。加入自由基清除劑可以清除O-2，從而抑制魯米諾的化學發光，通過測定化學發光強度，可得知O-2的清除率。具體操作如下：發光杯中依次加入pH 9.4、0.1 mol/L碳酸鈉緩沖液680 μl，1 mmol/L魯米諾50 μ1，1 mmol/L黃嘌呤200 μ1，以及樣品液50 μ1，最后加入0.1 U/ml黃嘌呤氧化酶20 μ1啟動反應，立即開始記錄10 s積分發光強度（CP 10s）。測定重復3次。

1.2.4 對羥自由基OH-清除能力的測定。

在10 ml比色管中，依次加入6 mmol/L的FeSO4 1.00 ml、6 mmol/L的水楊酸1.00 ml，再加入6 mmol/L的H2O2 1.00 ml，搖勻，1 min后測定其吸光度為A0，測定后將不同濃度的馬齒莧提取液1.00 ml加入比色管中，加蒸餾水至10 ml，搖勻，放置10 min再測定其吸光度為A510。

清除率（%）=（A0-Ax）÷A0×100%，式中，Ax為加入提取液后的吸光度，A0為空白對照吸光度。

1.2.5 清除DPPH自由基能力。

參考文獻[5]，分析馬齒莧水提物清除DPPH自由基的能力。DPPH用無水乙醇配制成濃度為2×10-4 mo1/L的溶液備用。反應總體積為5 ml，在試管中加入4 ml DPPH溶液，然后分別加入1 ml不同濃度的馬齒莧水提物溶液，充分混合，在室溫下靜止1 h，使用分光光度計在517 nm波長處測定各吸光度。以無水乙醇為空白調零，每一吸光度平行測3次，取平均值按以下公式計算清除率：

清除率（%）=（1-Ai-AjA0）×100%，

式中，Ai為加入馬齒莧水提物后的DPPH溶液的吸光度，Aj為DPPH的溶劑和馬齒莧水提物混合后的溶液的吸光度，A0為未加馬齒莧水提物的DPPH溶液的吸光度。

1.2.6 抑菌試驗。

用打孔器打孔，制備直徑6 mm的圓形濾紙片，121 ℃滅菌20 min冷卻后，均勻沾取馬齒莧水提物，平鋪于均勻涂布有對數生長期的受試菌（細菌）、酵母和霉菌孢子，受試細菌和真菌分別于37 ℃培養24 h，30 ℃培養48 h后，觀察并測定濾紙片周圍的抑菌圈直徑。

2 結果與分析

2.1 馬齒莧水提物對O-2自由基的清除

O-2自由基是自由基的一種，對它的清除具有重要的意義[6]。由圖1可知，常規法提取的馬齒莧水提物對O-2自由基的清除能力隨濃度的增加而增加，當馬齒莧水提物濃度是4 mg/ml時，它對O-2自由基的清除能力為5.35%，當馬齒莧水提物濃度是16 mg/ml時，它對O-2自由基的清除能力為47.99%。另外，由超聲法提取的馬齒莧水提物對O-2自由基的清除率也是隨著提取物濃度的增加而增大（5.84%～60.96%）；在各測試濃度點，相應的O-2自由基的清除率均比常規水提法提取的馬齒莧水提物高。

2.2 馬齒莧水提物對OH-自由基的清除

OH-自由基是一種重要的活性氧，過量的OH-自由基能夠氧化細胞膜中不飽和脂肪酸引起脂質過氧化、交聯、聚合成脂褐素，造成器官功能損害[7]。因此清除OH-自由基對機體健康是很有意義的。由圖2可知，常規法提取的馬齒莧水提物對OH-自由基的清除能力隨濃度的增加而增加，當馬齒莧水提物濃度是4 mg/ml時，它對OH-自由基的清除能力為4.22%，當馬齒莧水提物濃度是16 mg/ml時，它對OH-自由基的清除能力為77.41%。另外，由超聲法提取的馬齒莧水提物對OH-自由基的清除率也是隨著提取物濃度的增加而增大（4.98%～82.42%）；在各測試濃度點，相應的OH-自由基的清除率均比常規水提法提取的馬齒莧水提物高。

2.3 馬齒莧水提物對DPPH自由基的清除

對DPPH自由基的清除活力是能反映測試樣品的抗氧化效果的重要指標之一[8]。 由圖3可知，常規法提取的馬齒莧水提物對DPPH自由基的清除率隨著提取物濃度的增加而增大，量效關系非常顯著；當馬齒莧水提物濃度從4 mg/ml增加至16 mg/ml時，它對DPPH自由基的清除率從3.29%增加至54.44%。另外，由超聲法提取的馬齒莧水提物對DPPH自由基的清除率也是隨著提取物濃度的增加而增大（4.15%～58.42%）；在各測試濃度點，相應的DPPH自由基的清除率均比常規水提法提取的馬齒莧水提物高。不同提取方法對馬齒莧提取物中所含有的黃酮、酚類、多糖等抗氧化功能活性物質的含量組成均有影響[9]。該試驗表明超聲法提取的馬齒莧水提物對DPPH自由基有著較強的清除能力，這可能與超聲法提取的馬齒莧水提物含有較高濃度的黃酮、酚類物質有關。

2.4 馬齒莧水提物對微生物生長的抑制

從表1可知，常規法提取的馬齒莧水提物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和黑曲霉的生長均有一定的抑制作用，且抑制作用隨馬齒莧水提物濃度的增加而增加；在5種測試菌中，馬齒莧水提物對黑曲霉的抑制作用最強，馬齒莧水提物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的抑制作用次之，對釀酒酵母生長的抑制作用最弱。另外，超聲法提取的馬齒莧水提物在各設定測試濃度點，對上述5種菌的抑制活力均比常規法提取的馬齒莧水提物的效果強，且表現出明顯的量效抑制作用。

3 結論

以上試驗結果表明，馬齒莧水提物具有清除超氧陰離子自由基、羥自由基和DPPH自由基的能力，其中，對羥自由基的清除能力最強，對超氧陰離子自由基和DPPH自由基清除能力略弱；不同提取法對馬齒莧水提物的抗氧化活力均有影響，其中超聲法提取的馬齒莧水提物的自由基清除能力較常規法提取的馬齒莧水提物略強。另外，試驗也表明超聲法提取的馬齒莧水提物的抗菌能力較常規法提取的馬齒莧水提物略強。這可能與不同提取法對馬齒莧水提物中的功效成分含量差異的影響有關。

參考文獻

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