HPLC法測定香果健消片中橙皮苷的含量

張紅玉　劉劍　王繼陳

【摘 要】 目的：建立香果健消片（蜘蛛香、草果、木香、糯米）中橙皮苷的測定方法。方法：采用HPLC法，PUXIANG C18色譜柱（4.6mm×200mm，5μm）；乙腈-1%冰醋酸水溶液（23∶[KG-*3/5]77）為流動相；檢測波長為283nm；柱溫為30℃。結果：采用的方法對香果健消片中橙皮苷的測定適用，橙皮苷在55.0～220.0μg范圍內呈現良好的線性關系，相關系數r>0.999，加樣回收率（n=6）為100.7%。結論：本法準確可靠，可行性及重復性好，可用于香果健消片的質量控制。

【關鍵詞】 香果健消片；橙皮苷；高效液相色譜

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2015）09-0007-03

Abstract：Objective： To establish an HLPC method for determination of hesperidin in Xiangguo Jianxiao Tablets（Valeriana jatamansi Jones，Amomun tsao-ko Crevost et Lemaire，Aucklandia lappa Decne，Semen oryzae Glutinosae）.Methods： The determination was performed on a PUXIANG C18 colunn（4.6mm×200mm，5μm）with the mobile phase consisted of acetonitrile-1% acetic acid solution（23∶77）.Wavelength detection distributed at 283nm and the column temperature was 30℃.Results： The method is available for determination of hesperidin in Xiangguo Jianxiao Tablets.The linear ranges of hesperidin was 55.0-220.0μg（r>0.99） .Conclusion： The method is accurate，reliable and reproducible and can be used for quality control of Xiangguo Jianxiao Tablets.

Keywords：Xiangguo Jianxiao Tablets；hesperidin；HPLC

香果健消片是由蜘蛛香、木香、草果、糯米四味藥經提取加工制成的復方制劑，有健胃消食之功效，用于消化不良、氣脹飽悶、食積腹痛、胸滿腹脹。

該制劑中，蜘蛛香理氣止痛、消食止瀉、祛風除濕、鎮驚安神為方中君藥；木香行氣止痛、健脾消食，草果燥濕溫中、截瘧除痰共為臣藥；佐以糯米溫補脾胃。蜘蛛香的成分為橙皮苷[1]；木香的成分為木香烴內酯和去氫木香烴內酯，草果的成分為揮發油，兩者的有效成分在提取加工過程中的損失難以控制，無法保證成品轉移率；糯米的成分為碳水化合物，其控制沒有實質意義。因此，為了更好的控制產品的質量，保證臨床用藥的安全有效，故用高效液相色譜法對香果健消片中的橙皮苷進行定量測定研究。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀，賽多利斯電子天平（BP211D）。

1.2 試藥 橙皮苷對照品（批號為1107021-200613），來源于中國食品藥品檢定研究院，用前置五氧化二磷干燥器中減壓干燥12h以上；香果健消片（批號為140501、140502、140601、140602、140701）為云南云河藥業股份有限公司生產；甲醇（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；甲醇（色譜純，J.T.Baker）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 PUXIANG C18色譜柱（4.6mm×200mm，5μm）； 乙腈-1%冰醋酸水溶液（23∶77）為流動相；流量為0.8ml/min；檢測波長為283nm；柱溫30℃。理論板數按橙皮苷計算應計算不低于2000。

2.2 對照品溶液的制備 取巳減壓干燥12h以上的橙皮苷對照品適量，精密稱定， 加甲醇適量制成每1ml含25μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的配制 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取0.5g，精密稱定，置50ml的容量瓶中， 加甲醇適量，超聲處理40min，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 專屬性試驗 取按香果健消片生產工藝制成缺蜘蛛香的陰性樣品0.5g，按“2.3”項下方法制備的陰性對照液，按“2.1”項下方法測定，結果在與橙皮苷對照品色譜相應的保留時間處，供試品溶液色譜圖中有吸收峰，而陰性對照色譜圖中未顯吸收峰，色譜圖詳見圖1。

2.5 線性關系考察 取含量測定項下的對照品溶液2、4、5、6、8μl按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，橙皮苷的量為橫坐標繪制標準曲線，結果見表1。

結果表明，在選定的測定量范圍內，橙皮苷的檢測量與峰面積具有良好的線性關系，相關系數r>0.999，可見橙皮苷在55.0～220.0μg范圍內呈現良好的線性關系。

2.6 精密度考察 取上述對照溶液，按“2.1”項下色譜條件重復進樣6次，測定，橙皮苷含量分別為0.417mg/片、0.418mg/片、0.417mg/片、0.420mg/片、0.421mg/片、0.419mg/片，RSD為0.39%。結果表明，儀器具有良好的精密度。

2.7 重復性考察 取同一批號的樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液6份，分別按“2.1”項下色譜條件測定。橙皮苷的含量分別為0.419mg/片、0.418mg/片、0.420mg/片、0.421mg/片、0.419mg/片、0.418mg/片，RSD為0.28%，結果表明該方法重復性良好。

2.8 耐用性考察 為了考察測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，需對其進行了穩定性、不同檢測波長、不同柱溫、不同色譜柱的考察，以增加該檢測項目的適用性。

2.8.1 穩定性實驗 取同一供試品溶液5μl，分別于0、4、8、24h各進樣一次，其峰面積積分別為171.519、170.028、171.917、170.277，其RSD為0.47%，表明供試品溶液在24h內穩定。

2.8.2 不同檢測波長的比較 取同一供試品溶液5μl，分別在波長283nm、280nm下測定其含量，考察不同波長對橙皮苷測定的影響，橙皮苷的含量分別為0.422mg/片、0.421mg/片，RSD值為0.24%，表明波長有較小變動時，對橙皮苷的檢測基本沒有影響，結果穩定。

2.8.3 不同柱溫比較 取同一供試品溶液5μl，分別在柱溫30℃、35℃、40℃下測定其含量，考察不同柱溫對橙皮苷測定的影響，其峰面積為0.425 mg/片、0.421 mg/片、0.421 mg/片， RSD值為0.55%，表明柱溫有較小變動時，測定結果基本不受影響，結果穩定。

2.8.4 不同色譜柱的比較 取同一供試品溶液5μl，使用Thermo ODS C18色譜柱（Part Number：30105-254630 250×4.6mm，5μm）、PUXIANG C18色譜柱（P/N ：PUXIANG18，S/N：09253800 250×4.6mm，5μm）、Agilent C18色譜柱（PN990967-902 SN：USAHO30965 LN B12166 250×4.6mm，5μm）同步操作考察用不同色譜柱測定橙皮苷含量時的適用程度，橙皮苷的含量分別為：0.417 mg/片、0.417 mg/片、0.425 mg/片，結果RSD值為1.11%，表明在使用以上三種不同色譜柱時，對橙皮苷的檢測基本無影響。

2.9 加樣回收率試驗 稱取巳知含量的同一批香果健消片（批號為140602，含量為1482.5μg/g）0.25g，置50ml容量瓶中，分別精密加入對照品溶液（濃度為27.5μg/ml）25ml，加入甲醇至約40ml，按“2.2”項下供試品溶液的配制方法制備加樣供試液。按“2.1”項一色譜條件進行測定，計算對照品回收率，結果見表2。

2.10 樣品測定 取5個批號的樣品，按“2.2”項下供試品制備方法，按“2.1”項下色譜條件測定，結果見表3。

3 討論

3.1 指標成份的選擇 香果健消片方中蜘蛛香為君藥，其根莖具有豐富的藥用價值，傳統中醫藥認為其具有理氣止痛、消炎止瀉、祛風除濕、鎮靜安神等功效，可用于治療脘腹脹痛、消化不良、腹瀉、痢疾、風濕痹痛、蛇毒、失眠、肥胖等癥。《中國藥典》2010版一部記載通過測定纈草三酯和乙酰纈草三酯的含量控制蜘蛛香的質量，但因纈草三酯和乙酰纈草三酯的不穩定性，《中國藥典》2010版增補版取消了相關含量測定，筆者查閱大量相關資料，發現蜘蛛香的主要化學成分有揮發油、環烯醚萜類和黃酮類等，橙皮苷是蜘蛛香的主要有效成分之一，且其含量高、穩定性好，故將橙皮苷作為香果健消片的指標成分來控制產品質量。

3.2 波長的選擇 取橙皮苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1ml含25μg的溶液，在200～400nm波長處進行紫外掃描，橙皮苷在283nm處有最大吸收，故選擇283nm作為橙皮苷的測定波長。

3.3 流動相的選擇 本實驗中曾分別采用乙腈-水（用磷酸調pH：3.00）（23∶77）[3]、甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）[2]、乙腈-水（含1%冰醋酸）（23∶77）[1]為流動相洗脫，結果以乙腈-水（含1%冰醋酸）（23∶77）洗脫時峰型良好，分離度好。

參考文獻

[1]胡軼群，張如松.藥用植物蜘蛛香化學成分及藥理作用研究[J].中國現代藥物應用，2009，3（24）：194-197.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：345-346.

[3]石晉麗，劉勇，肖培根.HPLC法測定不同產地蜘蛛香中橙皮苷的含量[J].中草藥，2005，36（3）：449-450.

（收稿日期：2015.03.05）