甘肅不同產地黃芩莖葉和根對急性肝損傷小鼠的影響

楊志軍等

摘要：目的 觀察甘肅不同產地黃芩莖葉、根對急性肝損傷小鼠的影響，探討黃芩莖葉和根保肝作用的差異。方法 將昆明種小鼠隨機分為正常組、模型組、陽性對照組及甘肅隴西、岷縣、渭源、漳縣產黃芩根和莖葉組。各組分別給予相應藥物灌胃，每日1次，連續7 d。末次給藥2 h后，采用腹腔注射0.1%CCl4橄欖油溶液誘導肝損傷模型。造模18 h后，計算肝系數，檢測血清谷氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）活性及肝組織總抗氧化能力（T-AOC）水平。結果 與模型組比較，不同產地黃芩根組小鼠肝系數及血清中ALT、AST活性顯著降低（P<0.05），肝組織T-AOC水平升高（P<0.05）；同一產地根與莖葉組比較，各黃芩根組小鼠肝系數及血清中ALT、AST活性低于黃芩莖葉組（P<0.05），肝組織T-AOC水平高于黃芩莖葉組（P<0.05）。結論 黃芩根水煎液對CCl4誘導的急性肝損傷具有保護作用，而黃芩莖葉水煎液對急性肝損傷保護作用不明顯。

關鍵詞：甘肅；黃芩；莖葉；根；肝保護；小鼠

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2015）06-0061-03

黃芩始載于《神農本草經》，被列為中品。本品性寒味苦，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎的作用。2010年版《中華人民共和國藥典》規定黃芩藥用來源為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根[1]，但為擴大藥源，近年對其莖葉入藥的研究亦成為熱點。研究表明，黃芩苷、黃芩總黃酮、黃芩莖葉總黃酮對實驗性肝損傷具有一定的保護作用[2-4]。因此，本研究觀察甘肅4個不同產地黃芩根、莖葉對急性肝損傷小鼠的影響，以比較甘肅不同產地黃芩莖葉和根在保肝作用上的差異。

1 實驗材料

1.1 動物

2月齡SPF級昆明種小鼠132只，體質量（20±2）g，雌雄各半，蘭州大學實驗動物中心提供，合格證號SCXK（甘）2011-0004。

1.2 藥物與制備

聯苯雙酯滴丸，北京協和藥廠，批號12090204。甘肅隴西、岷縣、渭源、漳縣所產黃芩，于10月中旬在當地采集莖葉，10 d后采集同一植株的根，均為二年生黃芩，經甘肅中醫學院杜弢教授鑒定為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的根及莖葉。將不同產地的黃芩根、莖葉，分別陰干，除去雜質，洗凈。將根大小分檔，置蒸制容器內隔水加熱，蒸制“圓氣”后30 min，待質地軟化，取出，晾干，切片；另將莖葉切制成段。分別取適量黃芩根、莖葉，第1次加10倍量水，浸泡30 min，文火煎煮50 min，過濾，第2次加8倍量水，文火煎煮40 min，過濾，合并2次濾液，水浴濃縮為含1 g原藥材/mL的濃縮液，高壓滅菌，4 ℃以下儲存，灌胃時配制成所需濃度的藥液。

1.3 主要試劑與儀器

四氯化碳（CCl4），分析純（上海凌峰化學試劑有限公司，批號120728）；橄欖油，化學純；谷氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、總抗氧化能力（T-AOC）及考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒，南京建成生物工程研究所。80-2型離心沉淀器（江蘇省金壇市醫療儀器廠），BS110S型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司），MODEL680-酶標儀（美國伯樂公司），UV-2401PC紫外可見分光光度計（日本島津）。

2 實驗方法

2.1 分組與給藥

實驗小鼠隨機分為正常組、模型組、陽性對照組及隴西、岷縣、渭源、漳縣產黃芩根組和黃芩莖葉組。正常組、模型組予生理鹽水0.2 mL/10 g灌胃，陽性對照組按150 mg/kg予聯苯雙酯灌胃，其余各給藥組予相應藥物6 g/kg灌胃，陽性對照組及各給藥組給藥容積均為0.2 mL/10 g。每日1次，連續7 d。末次給藥2 h后，除正常組外，其余各組0.1 mL/10 g腹腔注射0.1%CCl4橄欖油溶液造模，正常組腹腔注射等量橄欖油。各組造模后禁食不禁水18 h。造模18 h后，從各組小鼠股動脈取血，隨后剝離肝臟，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干，稱重。計算肝系數（肝臟質量÷體質量×100%）[5]。

2.2 谷氨酸氨基轉移酶、天冬谷草氨酸氨基轉移酶測定

血液靜置30 min后，2500 r/min離心10 min，吸取血清。按照ALT、AST試劑盒說明書測定酶活性。

2.3 總抗氧化能力測定

取0.5 g肝組織，冰浴下用生理鹽水制成10%的肝勻漿，2000 r/min離心10 min，取上清液，按試劑盒說明書操作。

3 統計學方法

采用SPSS19.0統計軟件進行分析。實驗數據以—x±s表示，采用方差分析和顯著性檢驗，方差齊時，兩兩比較采用LSD檢驗，方差不齊時，采用Tamhance's T2檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

4 結果

4.1 不同產地黃芩莖葉、根對急性肝損傷小鼠血清谷氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶的影響

與正常組比較，模型組小鼠ALT、AST活性升高（P<0.05）；與模型組比較，不同產地黃芩根組、隴西產黃芩莖葉組小鼠ALT、AST活性降低（P<0.05）；同一產地根與莖葉組比較，各黃芩根組小鼠ALT、AST活性均低于黃芩莖葉組（P<0.05）。結果見表1。

4.2 不同產地黃芩莖葉、根對急性肝損傷小鼠肝系數、肝組織總抗氧化能力的影響

與正常組比較，模型組小鼠肝系數升高（P<0.05），肝組織T-AOC水平降低（P<0.05）；與模型組比較，各產地黃芩根組小鼠肝系數均降低（P<0.05），肝組織T-AOC水平均升高（P<0.05），而各產地黃芩莖葉組小鼠肝系數、肝組織T-AOC活性與模型組比較差異無統計學意義（P>0.05）；與同一產地黃芩莖葉組比較，黃芩根組小鼠肝系數均降低（P<0.05），肝組織T-AOC水平均升高（P<0.05）。結果見表2。

5 討論

近年黃芩在甘肅種植面積約4萬畝（1畝=666.67 m2），產量700多萬kg，甘肅隴西、渭源、漳縣、岷縣等已成為黃芩主要產地。雖然黃芩傳統藥用部位為根，然而，在我國北方各省及云南部分地區卻有將黃芩莖葉代茶飲用的近千年歷史，此茶被稱為“黃芩茶”或“黃金茶”。

肝損傷是由多種病因引起并且有多種因素參與的復雜過程。大量研究表明，在肝細胞病變過程中，自由基、酶及脂質過氧化等均發揮重要作用。CCl4誘導的急性肝損傷模型是常用經典模型之一。CCl4對肝細胞膜有直接溶解作用，但主要致毒機制與其活性代謝產物有關。CCl4在肝內經微粒體細胞色素P450代謝，生成活潑的三氯甲基自由基和氯自由基，這些自由基與細胞內和細胞膜的大分子結合，使酶的功能喪失，細胞膜脂質過氧化，破壞肝細胞膜結構和功能的完整[6-7]。當肝細胞受損害時，由于肝細胞壞死，細胞膜通透性增加，線粒體損傷，導致細胞內的ALT、AST等轉氨酶釋放進入血液，使血液中ALT、AST活性增高，且ALT、AST活性的變化與肝細胞受損程度相一致，因此ALT、AST可作為診斷衡量早期肝損傷程度的主要酶類指標[8]。自由基學說認為，體內自由基生成增加，導致自由基生成與清除的平衡被破壞，體內過剩的自由基及引發的脂質過氧化反應，會促進肝細胞損傷[9]。T-AOC是機體內各種抗氧化系統功能的綜合反映，能體現機體抗氧化防御體系的整體狀態。體內T-AOC水平越高，自由基清除速度越快。

本實驗結果顯示，模型組小鼠肝系數、血清中ALT、AST活性均升高，肝組織T-AOC水平降低，而預先給予不同產地黃芩根水煎液的各組小鼠肝系數及血清中ALT、AST活性均降低，肝組織T-AOC水平升高，表明黃芩根水煎液對CCl4誘導的急性肝損害具有一定的保護作用，其機制可能通過降低ALT、AST活性，提高肝組織總抗氧化能力，減輕肝損傷，從而達到保肝作用。4個不同產地黃芩莖葉組中，隴西產黃芩莖葉水煎液僅能降低小鼠ALT、AST活性，對肝系數、T-AOC無影響，而其他各組與模型組比較均無統計學意義，說明黃芩莖葉水煎液保肝作用不明顯。

參考文獻：

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[2] 陳忻，趙暉，張楠，等.黃芩苷對小鼠免疫性肝損傷的保護作用[J].中藥藥理與臨床，2006，22（34）：39-40.

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[4] 李素婷，楊鶴梅，王寶源，等.黃芩莖葉總黃酮對大鼠慢性肝損傷的保護及機制研究[J].中國中醫基礎醫學雜志，2006，12（8）：582-584.

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[9] Knight JA. The process and theories of aging[J]. Ann Clin Lab Sci，1995，25（1）：1-12.

（收稿日期：2014-09-04）

（修回日期：2014-10-17；編輯：華強）