藏藥黃酮苷元抗炎作用的初步研究*

張 麗，姜 華，黃聰琳

1甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000；2甘肅省中醫(yī)藥研究院；3甘肅省中醫(yī)院

藏藥黃酮苷元抗炎作用的初步研究*

張 麗1，姜 華2△，黃聰琳2，3

1甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000；2甘肅省中醫(yī)藥研究院；3甘肅省中醫(yī)院

目的：探討藏藥鐮形棘豆黃酮苷元對(duì)大、小鼠抗炎作用的影響。方法：選用昆明種小鼠和Wistar大鼠，隨機(jī)分為模型對(duì)照組、萘普生組（25mg/kg）、黃酮苷元高（336mg/kg）、中（168mg/kg）、低劑量組（84 mg/kg），灌胃給藥，共7天。通過(guò)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹、冰醋酸誘導(dǎo)小鼠腹腔毛細(xì)管通透性、蛋清致大鼠足跖腫脹、棉球致大鼠肉芽腫的方法，觀察黃酮苷元對(duì)炎癥的影響。結(jié)果：黃酮苷元各劑量組對(duì)由以上4種方法所致的炎癥反應(yīng)具有一定的抑制作用，其研究結(jié)果與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：黃酮苷元具有一定的抗炎作用，是鐮形棘豆發(fā)揮抗炎作用的重要活性成分之一。

鐮形棘豆；黃酮苷元；抗炎作用

鐮形棘豆Oxytropis falcata Bunge為豆科植物棘豆屬的干燥全草，藏藥名為“莪達(dá)夏”，主產(chǎn)于青海、甘肅、四川各省。具有清熱解毒，生肌愈瘡，澀脈止血，通利大便等功效，內(nèi)治疫癘、黃水病、便秘、炭疽；外治瘡疥腫痛。該品種收載于中華人民共和國(guó)1995年頒布的《晶珠本草》及《藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥第一冊(cè)，是我國(guó)藏區(qū)民間常用的抗炎藥之一［1］。近年來(lái)的研究表明，鐮形棘豆藥材中含有豐富的黃酮、生物堿以及甾體類化合物，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、止咳等多種藥理作用［2-8］。目前對(duì)于藥材藥理作用的基礎(chǔ)研究還不夠深入，限制了該藥材在臨床上的應(yīng)用。因此，尋找其有效活性部位并進(jìn)行相關(guān)藥理學(xué)研究是非常必要的。本實(shí)驗(yàn)為了探討鐮形棘豆抗炎作用的活性部位，采用提取、酸化、柱層析等方法制備了鐮形棘豆黃酮苷元并對(duì)其進(jìn)行抗炎作用研究，旨在為鐮形棘豆藥效活性物質(zhì)的利用提供多方面的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材與試劑 鐮形棘豆：采自甘肅省甘南藏族自治州合作地區(qū)，經(jīng)鑒定為鐮形棘豆Oxytropis falcata Bunge；鐮形棘豆黃酮苷元：由甘肅省中醫(yī)藥研究院中藥研究所制備；萘普生(江蘇平光制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20100929)；伊文思藍(lán)(上?；瘜W(xué)試劑公司)；二甲苯，冰醋酸，二甲基亞砜，乙醚等實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

1.2 動(dòng)物 Wistar大鼠和昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量180～200 g和20～22 g，購(gòu)于蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(甘)2009-0004。實(shí)驗(yàn)前，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被分組放入塑料鼠籠中適應(yīng)性飼養(yǎng)7天(溫度23～25℃，濕度50%～60%)，喂食普通鼠飼料和蒸餾水。

1.3 方法

1.3.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn) 取小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只：空白對(duì)照組(5%吐溫-80溶液)、萘普生組(25mg/kg)、黃酮苷元高、中、低劑量組(336、168、84 mg/kg，以5%吐溫-80制成混懸液)，各組按劑量注射給予相應(yīng)藥物，1次/d，共7天。末次給藥后1小時(shí)，于小鼠左耳前后兩面涂抹二甲苯0.1mL，右耳作對(duì)照，4小時(shí)后將小鼠脫臼處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm的打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重，以小鼠左右耳片重量之差為腫脹度，計(jì)算耳廓腫脹抑制率(%)［9］。

1.3.2 冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)管通透性試驗(yàn) 取小鼠50只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)分組、給藥方式、給藥劑量和給藥時(shí)間同小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)。在給藥過(guò)程中，由于給藥人員方式不正確，萘普生組、黃酮苷元高劑量組各死亡1只小鼠，黃酮苷元中劑量組死亡2只小鼠。末次給藥后1小時(shí)，每只小鼠尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水10mL/kg，隨后腹腔注射0.6%冰醋酸生理鹽水，0.2mL/只，15分鐘后將小鼠脫頸處死，剪開腹腔皮膚，用2mL生理鹽水洗滌腹腔，共3次，用吸管吸出洗滌液合并后，加生理鹽水調(diào)整體積至10mL，3000 rpm離心15分鐘，取上清液于620 nm處比色，測(cè)定光密度值(OD值)［9］。

1.3.3 蛋清致大鼠足跖腫脹試驗(yàn) 取大鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組8只。給藥方式、給藥劑量和給藥時(shí)間同小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)。末次給藥30分鐘后，于大鼠右后足跖中央皮下注射10%新鮮蛋清0.1mL致炎，分別在致炎后0、1、2、4、6小時(shí)用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量足跖體積，計(jì)算給藥各組對(duì)大鼠足趾腫脹的抑制率［9］。

1.3.4 棉球致大鼠肉芽腫試驗(yàn) 取大鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組8只。將各組大鼠分別注射水合氯醛麻醉，在無(wú)菌條件下，將已知重量的滅菌棉球植入大鼠左側(cè)腹股溝皮下，從手術(shù)當(dāng)天起連續(xù)灌胃給藥7天。第8天頸椎脫頸處死大鼠，取出棉球，剝離附著棉球的結(jié)締組織，將棉球放入60℃的烘箱中干燥至恒重，減去原棉球凈重，即得肉芽腫凈重，并計(jì)算給藥各組對(duì)大鼠肉芽腫的抑制率［9］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包分析，數(shù)據(jù)以(±s)表示，2組間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)的方法，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 小鼠耳廓致炎后，黃酮苷元高、中、低劑量組與空白對(duì)照組小鼠耳廓腫脹度值相比，均有明顯降低(P＜0.05)，其中黃酮苷元高劑量組的抑制作用最強(qiáng)，腫脹度為8.06，腫脹抑制率為41.30%，但與萘普生組腫脹抑制率值相比較，作用明顯偏弱，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 黃酮苷元對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹抑制作用(±s)

表1 黃酮苷元對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹抑制作用(±s)

注：*表示與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；△表示與萘普生組比較，P＜0.05。

組別 例數(shù) 劑量/(mg·kg-1） 腫脹度 腫脹抑制率/%空白對(duì)照組 10 0 13.73±2.20 -萘普生組 10 25 4.36±0.49*66.28黃酮苷元高劑量組 10 336 8.06±1.41*41.30△黃酮苷元中劑量組 10 168 9.32±0.68*32.12△黃酮苷元低劑量組 10 84 10.09±0.80*26.51△

2.2 對(duì)冰醋酸誘導(dǎo)小鼠腹腔毛細(xì)管通透性的影響 與空白對(duì)照組比較，萘普生組的作用顯著(P＜0.05)，黃酮苷元高、中、低劑量組的作用雖然可以明顯降低小鼠腹腔毛細(xì)管通透性，減少小鼠腹腔伊文思藍(lán)滲出量(P＜0.05)，其中黃酮苷元高劑量對(duì)炎癥的影響程度最高，但是其沒有萘普生組對(duì)腫脹的抑制作用強(qiáng)，各組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 黃酮苷元對(duì)冰醋酸誘導(dǎo)小鼠腹腔毛細(xì)管通透性的影響(±s)

表2 黃酮苷元對(duì)冰醋酸誘導(dǎo)小鼠腹腔毛細(xì)管通透性的影響(±s)

注：*表示與模型對(duì)照組比較，P＜0.05；△表示與萘普生組比較，P＜0.05。

組別 例數(shù) 劑量/(mg·kg-1） OD值空白對(duì)照組 10 0 0.474±0.06萘普生組 9 25 0.245±0.02*黃酮苷元高劑量組 9 336 0.316±0.03*△黃酮苷元中劑量組 8 168 0.343±0.02*△黃酮苷元低劑量組 10 84 0.421±0.04*△

2.3 對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹的影響 大鼠足跖蛋清致炎后，開始急性炎癥樣紅、腫等反應(yīng)，持續(xù)約6小時(shí)。在各時(shí)間點(diǎn)，黃酮苷元各劑量組均能明顯的抑制大鼠足跖腫脹，在2～4小時(shí)內(nèi)抑制效果最強(qiáng)，其中黃酮苷元高、中劑量組對(duì)腫脹抑制率均大于35%，與空白對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。但與萘普生組腫脹抑制率值相比較，作用明顯偏弱，其組間差異顯著，結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

2.4 對(duì)棉球致大鼠肉芽腫的影響 給藥各組對(duì)棉球致大鼠肉芽腫均有一定的抑制作用。與空白組比較有顯著性差異(P＜0.05)。不同劑量的黃酮苷元對(duì)大鼠肉芽腫的抑制有不同的影響，黃酮苷元低劑量對(duì)大鼠肉芽腫的抑制率為24.78%，而高劑量的抑制率則為45.72%，藥物對(duì)炎癥的影響程度應(yīng)與給藥劑量呈正相關(guān)。黃酮苷元各組與萘普生組比較，抑制率明顯偏低，組間比較差異顯著(P＜0.05)。見表4。

表3 黃酮苷元對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹的影響(±s)

表3 黃酮苷元對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹的影響(±s)

注：*表示與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；△表示與萘普生組比較，P＜0.05。

組別 例數(shù)劑量/(mg·kg-1） 腫脹抑制率/% 1小時(shí) 2小時(shí) 4小時(shí) 6小時(shí)空白對(duì)照組 8 0 8.39±1.48 13.50±1.72 7.75±1.87 6.06±1.82萘普生組 8 25 38.20±2.18* 43.12±2.12*49.49±2.43*32.23±1.97*黃酮苷元高劑量組 8 336 34.91±3.04*△37.49±1.56*△42.61±2.78*△19.75±2.24*△黃酮苷元中劑量組 8 168 32.82±1.79*△35.86±2.62*△40.02±2.37*△18.88±2.11*△黃酮苷元低劑量組 8 84 29.40±1.94*△36.33±1.35*△37.56±2.75*△17.48±2.70*△

表4 黃酮苷元對(duì)棉球致大鼠肉芽腫的影響

3 討論

本研究選擇二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹試驗(yàn)、冰醋酸誘導(dǎo)小鼠毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)、蛋清誘導(dǎo)大鼠足趾腫脹試驗(yàn)以及棉球引起的大鼠肉芽腫試驗(yàn)，通過(guò)物理性和化學(xué)性等多種炎癥模型，綜合考察黃酮苷元對(duì)大、小鼠免疫系統(tǒng)的影響。研究表明，黃酮苷元具有一定的抗炎作用，在本試驗(yàn)84～336mg/kg的范圍內(nèi)，抑制炎癥的強(qiáng)度與劑量呈正相關(guān)，劑量越高其抗炎效果越好。此研究結(jié)果也初步確定出從鐮形棘豆中提取的黃酮苷元是其抗炎作用的有效部位之一，但其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

［1］ 姜華，胡君茹，劉霞，等.藏藥鐮形棘豆的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2006，37(2)：314-315.

［2］Jiang，JR.Hu，WQ.Zhan，et al.Screening for f ractions of oxyt ropis falcata bunge with antibacterial activity［J］.Natural Product Research，2009，23(10)：953-959.

［3］ 王棟，楊歡，童麗，等.藏藥鐮形棘豆的鎮(zhèn)痛抗炎活性［J］.藥學(xué)與臨床研究，2008，16(2)：91-93.

［4］ 代現(xiàn)平，張光輝，班翠紅，等.鐮形棘豆總提取物的鎮(zhèn)痛抗炎作用［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2010，31(5)：313-315.

［5］ 瞿敏明，陳志鵬，蔡寶昌.鐮形棘豆經(jīng)皮給藥后抗炎鎮(zhèn)痛活性有效部位的篩選［J］.安徽醫(yī)藥，2011，15(1)：14-16.

［6］ 樓成華，王明艷，楊歡.鐮形棘豆中黃酮類化合物抗腫瘤活性的體外實(shí)驗(yàn)研究［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，25(1)：46-50.

［7］ 魏群，賀幼平，李經(jīng)才.鐮形棘豆總黃酮甙元對(duì)下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)的藥理作用［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，1979，59(11)：677-679.

［8］ 姜華，胡君茹，劉霞.HPLC法測(cè)定藏藥鐮形棘豆中鼠李檸檬素的含量［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2010，17(1)：44-45.

［9］ 李儀奎，金若敏，王欽茂，等.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.2版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2006：764-770.

Studieson Anti-inflammatory Effectsof Flavonoid Aglycones from Oxytropis Falcata

ZHANG Li1,JIANG Hua2△,HUANG Conglin3
1 Gansu College of Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China；2 Gansu Academy of Chinese Medicine；3 Gansu Hospital of Chinese Medicine

Objective:To investigate the anti-inflammatory effect of flavonoid aglycones extracted from Oxytropis falcata on them ice and rats.Methods:Kunm ingmice and Wistar ratswere divided into themodelgroup, the naproxen group (25mg/kg)and the flavonoid aglycones groups of high dose(336mg/kg),middle dose(168 mg/kg)and low dose(84mg/kg)and lavaged for 7 days.Animal inflammatorymodelswere established by the ear swelling induced by dimethylbenzene and abdominal capillary permeability induced by acetic acid form ice,the rat paw edema created by injection of albumen and ratgranuloma induced by cotton pelletwool respectively.Results: Different doses of flavonoid aglycones groups could reduce the inflammatory reaction.Compared w ith themodel group,the differenceshad the statisticalmeaning(P＜0.05).Conclusion:Flavonoid aglyconeshasa certain anti-inflammatory activity and isone of the importantbiological componentsofOxytropis falcata.

Oxytropis falcata;flavonoid aglycone;anti-inflammatory activity

R285.5

A

1004-6852(2015)02-0050-03

2014-06-25

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)81260633)。

張麗(1988—)，女，在讀碩士研究生。研究方向：中藥制劑工藝。

△通訊作者：姜華(1959—)，女，博士學(xué)位，碩士研究生導(dǎo)師，主任藥師，研究員。研究方向：中（藏）藥有效成分篩選及質(zhì)量分析。