高效液相色譜法測定小兒清熱口服液中綠原酸的含量

范友強

摘 要：本文以高效液相色譜為主要的檢測手段，來建立這種綠原酸檢測方法，具體研究如下文所述。

關鍵詞：高效液相色譜法；小兒清熱口服液；綠原酸；含量；測定

中圖分類號：R286 文獻標識碼：A

作為一種較為常見的小兒清熱退燒藥物，在小兒清熱口服液中，，綠原酸作為重要藥效成分，其含量的多少會對口服液的退熱效果產生直接影響，為此在生產小兒清熱口服液時，一般都會對綠原酸的含量進行有效控制，這就需要一種高效便捷的測量方法來檢測綠原酸的含量。現本文就以高效液相色譜為主要的檢測手段，來建立這種綠原酸檢測方法，具體研究如下文所述。

1 儀器和試藥

本試驗中所使用的儀器主要有高效液相色譜泵、檢測儀和數據處理機。這些儀器設備均為試驗室常用設備，且能夠滿足本試驗的研究需要。所使用的試藥為小兒清熱口服藥品，以及綠原酸對照品，這些藥品和對照品均由相關單位檢測合格，另外試驗中所使用的其他試劑均為分析純。

2 測定方法

2.1 色譜條件

YWG-C18柱（4.0mm×150mm， 10μm）；流動相甲醇-水-四氫吠喃-冰醋酸（2.5∶97∶5∶1.5）；流速1.5mm·min-1；檢測波長327nm；靈敏度0.05AUFS；紙速0.1mm·min -1。

2.2 綠原酸對照品溶液的配制

首先應該精密稱取一定的綠原酸對照品，以便于配制一定的對照品溶液。本試驗中稱取了10.1mg的對照品，并將其放在10mL的容量瓶里進行稀釋，稀釋溶液使用濃度為50%的甲醇，稀釋完后將溶液搖勻即可得到1號對照品溶液。之后再從1號對照品溶液中精密量取1mL，將其放置在10ml容量瓶中，繼續稀釋，搖勻，得到2號對照品溶液。

2.3 供試樣品液的配制

在配備完對照品溶液后，就要配制相應的供試樣品液。其配制方法與對照品溶液相同，均是精密量取后加50%甲醇進行稀釋，搖勻。

2.4 陰性液的配制

由于綠原酸主要存在于金銀花這一藥材中，為了排除其他藥材對綠原酸含量測量的影響，本實驗還專門配制了陰性液加以對比分析。陰性液的配制主要是按照小兒清熱口服液的制備工藝和相關工藝參數所制備出的不含金銀花的小兒清熱口服液，并以這一溶液為樣品，采用與對照品溶液制備相同的方法制備出陰性液。

2.5 藥材液的配制

同樣需要進行精密稱取，并將所稱取的0.15g藥材放置到到具塞錐形瓶中，加入50mL濃度為50%的甲醇溶液之后將瓶塞塞緊，然后稱量其重量，并對其進行時長為半個小時的超聲處理。然后待溶液冷卻后，再稱量其重量，并用50%甲醇將所損失的重量補充回來，并搖勻。

2.6 標準曲線的繪制

精密量取綠原酸對照品2號溶液2，4，5，6，8μl進樣測定，以綠原酸進樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪圖。其回歸方程為：Y=781483.90，X-15316.87， r=0.9999，綠原酸標準品在0. 201～0. 807μg與峰面積有良好的線性關系。

2.7 精密度試驗

按照測定方法重復進樣5次，綠原酸峰面積積分值相對標準偏差RSD = 1.33%。

2.8 重現性試驗

按照測定方法重復測定5份樣品，綠原酸含量的相對標準偏差RSD=0. 4%。

2.9 加樣回收率試驗

精密量取5份樣品（批號：110618）各0.5mL，置50mL，容量瓶中，精密吸取各樣品液，分別精密加入綠原酸對照品2號溶液0.90mL、1.09mL、1.00mL、1.04mL、1.00mL，用50%甲醇定容至刻度，搖勻即得。按上述色譜條件測定，以下式計算回收率，結果如表1結果表明，本方法具有良好的回收率。

2.10 樣品測定

精密量取樣品液l0μL進樣，依照上述色譜條件進行含量測定，結果見表2。

結語

由本實驗可以得知，在對小兒清熱口服液中的綠原酸含量進行測定時，采用高效液相色譜法是非常可行的。而其測定效果與效率在很大程度上與流動相有較大關聯。在本試驗中，最初使用的流動相：甲醇-水-乙腈-冰醋酸的比例為3：97：12：3，在測定期間發現在此流動相下樣品的分離效果不理想，很容易造成綠原酸峰拖尾問題，為此我們對流動相進行了一定的變動，將乙腈換位了四氫呋喃。在經過調整后，樣品的分離達到了理想效果。并為之后的綠原酸含量測定提供了良好條件。在對綠原酸進行含量測定時采用高效液相色譜法不但操作簡便，且檢測效果好，能夠使綠原酸和其他成分實現基線分離，保證了檢測結果的準確性。

事實上，綠原酸含量檢測不但對小兒清熱口服液的生產質量保證有很大意義，其在其他請熱類藥物的生產中也往往需要進行要有效檢測。因為綠原酸本身存在于金銀花中，所以只要藥物成分中有金銀花都會有綠原酸，綠原酸的殺菌功能較為顯著，在多種感冒清熱藥物中發揮積極作用，為此必須要確保這類藥物中綠原酸的含量符合相關要求。而高效液相色譜法完全可以作為一種檢測方法應用在這些藥物的綠原酸含量檢測中。

參考文獻

[1]崔嵐，祝德秋，王曉珉，羅啟劍，曹惠明.反相高效液相色譜法測定清炎顆粒中綠原酸的含量[J].中國藥房，2004（06）.

[2]趙霞，楊麗.HPLC法測定雙黃連顆粒中綠原酸的含量[J]. 中國藥事，2012（01）.