針刺大椎、足三里穴對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞影響的實(shí)驗(yàn)研究?

劉景玉，劉治中，馬俊楠，燕 平

(1.山西中醫(yī)學(xué)院，太原 030024;2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

針刺大椎、足三里穴對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞影響的實(shí)驗(yàn)研究?

劉景玉1，劉治中2，馬俊楠1，燕 平1

(1.山西中醫(yī)學(xué)院，太原 030024;2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

目的:從抗氧化系統(tǒng)、能量代謝系統(tǒng)等方面研究針刺大椎穴、足三里穴治療對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞的影響。方法:采用大鼠游泳訓(xùn)練模型，60只雄性大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為安靜對(duì)照組、運(yùn)動(dòng)對(duì)照組、運(yùn)動(dòng)+大椎穴+足三里穴組和運(yùn)動(dòng)+足三里穴組4組各15只。其中安靜對(duì)照組不進(jìn)行游泳訓(xùn)練也不針刺，其余3組每天進(jìn)行游泳訓(xùn)練60 min，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組運(yùn)動(dòng)后不進(jìn)行針刺，剩余2組運(yùn)動(dòng)后進(jìn)行針刺實(shí)驗(yàn)，連續(xù)5周。測(cè)定與運(yùn)動(dòng)性疲勞相關(guān)的生化指標(biāo)。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)表明針灸大椎、后三里能夠使大鼠血清乳酸、血清尿素氮和肝臟丙二醛水平降低，血糖和肝、肌糖原水平及肝臟內(nèi)超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶等抗氧化酶活性升高。結(jié)論:針刺大椎、后三里兩穴不僅能夠緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞，且其作用效果優(yōu)于單純針刺足三里穴。

針灸;大椎;足三里;自由基;能量代謝;運(yùn)動(dòng)性疲勞

近年來(lái)，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)針對(duì)運(yùn)動(dòng)中廣泛存在的運(yùn)動(dòng)性疲勞研究較多，而傳統(tǒng)中醫(yī)于此方面顯示出極大的優(yōu)勢(shì)，其中以安全有效為特色的針灸治療受到了廣泛的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)組查閱大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，關(guān)于針刺足三里穴抗運(yùn)動(dòng)性疲勞的研究較多，而同時(shí)配合針刺大椎穴的研究報(bào)道甚少。大椎穴又名百勞穴，匯聚手足三陽(yáng)的陽(yáng)熱之氣與督脈的陽(yáng)氣上行頭頸，從而有協(xié)調(diào)臟腑活動(dòng)的作用。刺激足三里和大椎穴可補(bǔ)氣補(bǔ)血、益精補(bǔ)腎、平衡陰陽(yáng)，故本實(shí)驗(yàn)旨在研究探討足三里與大椎穴配合刺激對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 體質(zhì)量150～180 g的6周齡SD雄性大鼠60只，山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，保持每天換飲水和加足飼料，室溫為20～25℃，相對(duì)濕度45%～60%左右。

1.1.2 試劑和儀器

2.1 試劑

戊巴比妥鈉、BUN、LAC、肝、肌糖、SOD、MDA、GSH-Px等試劑盒(購(gòu)于上海世儀生物科技有限公司)。

2.2 儀器

秒表、血糖儀(德國(guó)羅氏)，Enspire酶標(biāo)儀(美國(guó)PerkinElmer)，UV1601可見紫外分光光度儀(日本 瑞立)，AU5800生化分析儀(美國(guó) Beckman Coulter)，低溫臺(tái)式離心機(jī)(德國(guó)Heraeus)，WP7微波爐(順德市格蘭仕電器實(shí)業(yè)有限公司)，塑鋼玻璃游泳池150 cm×60 cm×70 cm(上海欣軟信息科技有限公司)。

2 方法

2.1 游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練模型

游泳訓(xùn)練分為適應(yīng)性訓(xùn)練(3周，周六周日不進(jìn)行游泳訓(xùn)練)和大強(qiáng)度耐力訓(xùn)練(2周，1周7 d)，每天60 min。

2.2 動(dòng)物分組及針刺

按隨機(jī)數(shù)字表法將60只雄性大鼠分為安靜對(duì)照組(Ⅰ)、運(yùn)動(dòng)對(duì)照組(Ⅱ)、運(yùn)動(dòng)加針刺大椎穴與足三里穴組(Ⅲ)和運(yùn)動(dòng)加針刺足三里穴組(Ⅳ)4組各15只，分籠飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)期間，安靜對(duì)照組不進(jìn)行運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練也不進(jìn)行針刺治療，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組只進(jìn)行運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練不進(jìn)行針刺治療，運(yùn)動(dòng)+大椎+足三里組與運(yùn)動(dòng)+足三里組每天游泳訓(xùn)練結(jié)束后進(jìn)行針刺治療。將大鼠俯臥于鼠固定器上，在所需針刺穴位［1］(大椎:第7頸椎與第1胸椎間，背部正中，足三里:小鼠膝關(guān)節(jié)外側(cè)腓骨小頭下3.5 mm)處剃毛，消毒后以32號(hào)0.5寸毫針直刺，持續(xù)捻轉(zhuǎn)2 min，留針3 min。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)與測(cè)試方法

于實(shí)驗(yàn)第32天全部實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行力竭性游泳訓(xùn)練，記錄力竭時(shí)間。力竭游泳參數(shù):塑鋼玻璃游泳池150 cm×60 cm×70 cm，水深50 cm，水溫(30± 1)℃，大鼠尾部系5%體質(zhì)量的重物;力竭判定指標(biāo):大鼠經(jīng)10 s后仍不能返回水面。力竭游泳結(jié)束30 min后，3%戊巴比妥鈉溶液麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈采血取血清待測(cè);取肝臟、股四頭肌液氮凍存待測(cè)，葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖含量;蒽酮法測(cè)定肝、肌糖原的含量;比色法測(cè)定LAC含量;酶偶聯(lián)速率法測(cè)定BUN含量;TBA比色法測(cè)定MDA含量;黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)含量，DTNB法測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)含量。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以 α＜0.05。

4 結(jié)果

4.1 針刺對(duì)大鼠力竭時(shí)間的影響

表1顯示，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組與安靜對(duì)照組大鼠力竭時(shí)間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明大鼠經(jīng)長(zhǎng)期游泳訓(xùn)練產(chǎn)生的運(yùn)動(dòng)性疲勞會(huì)使大鼠游泳力竭時(shí)間變短;運(yùn)動(dòng)+大椎+足三里組、運(yùn)動(dòng)+足三里組與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組大鼠力竭時(shí)間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明針刺治療延長(zhǎng)了大鼠力竭時(shí)間。運(yùn)動(dòng)+大椎+足三里組與運(yùn)動(dòng)+足三里組比較，大鼠力竭時(shí)間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明針刺大椎、足三里兩穴的大鼠比只針刺足三里穴的大鼠效果更好。

4.2 針刺大椎、后三里穴對(duì)大鼠血清LAC、BUN水平的影響

表2顯示，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組與安靜對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明經(jīng)長(zhǎng)期游泳訓(xùn)練的大鼠血清LAC、BUN水平升高;運(yùn)動(dòng)+大椎+足三里組、運(yùn)動(dòng)+足三里組與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明大鼠經(jīng)針刺治療后血清LAC、BUN水平恢復(fù);運(yùn)動(dòng)+大椎+足三里組與運(yùn)動(dòng)+足三里組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明大椎、足三里兩穴配合針刺大鼠血清LAC、BUN水平恢復(fù)優(yōu)于單純針刺足三里穴。

表1 各組大鼠力竭時(shí)間比較(±s)

表1 各組大鼠力竭時(shí)間比較(±s)

注:與安靜對(duì)照組比較:*P＜0.05;與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組比較:△P＜0.05;與運(yùn)動(dòng)+足三里組比較:#P＜0.05

組 別 鼠數(shù) 力竭時(shí)間(s) I 15 20.24±0.23 II 13 18.49±0.29*III 13 21.00±0.37△#IV 14 20.07±0.26△

表2 各組大鼠血清LAC、BUN水平比較(±s)

表2 各組大鼠血清LAC、BUN水平比較(±s)

注:與安靜對(duì)照組比較:*P＜0.05;與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組比較:△P＜0.05;與運(yùn)動(dòng)+足三里組比較:#P＜0.05

組 別 LAC(mmol/L) BUN(mmol/L) I 5.77±0.22 7.54±0.16 II 9.34±0.36* 11.02±0.24*III 5.67±0.16△# 7.21±0.25△#IV 6.38±0.28△ 8.31±0.39△

4.3 針刺對(duì)大鼠血糖和肝、肌糖原水平的影響

表3顯示，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組與安靜對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明運(yùn)動(dòng)疲勞大鼠血糖和肝、肌糖原水平降低;運(yùn)動(dòng)+大椎+足三里組、運(yùn)動(dòng)+足三里組大鼠與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明大鼠經(jīng)針刺治療后血糖和肝、肌糖原水平恢復(fù);運(yùn)動(dòng)+大椎+足三里組與運(yùn)動(dòng)+足三里組大鼠血糖水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明大椎、足三里兩穴配合針刺大鼠血糖水平恢復(fù)優(yōu)于單純針刺足三里穴。

表3 各組大鼠血糖、肝糖原和肌糖原水平比較(±s)

表3 各組大鼠血糖、肝糖原和肌糖原水平比較(±s)

注:與安靜對(duì)照組比較:*P＜0.05;與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組比較:△P＜0.05;與運(yùn)動(dòng)+足三里組比較:#P＜0.05

組 別 血糖(mmol/L) 肝糖原(mg/g) 肌糖原(mg/g) I 5.02±0.26 6.14±0.24 1.82±0.25 II 3.26±0.35* 3.08±0.26* 1.42±0.13*III 5.56±0.22△# 6.08±0.35△ 1.79±0.17△Ⅳ 4.87±0.35△ 6.10±0.28△ 1.80±0.20△

4.4 針刺對(duì)大鼠肝臟SOD、GSH-Px、MDA水平的影響

表4顯示，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組與安靜對(duì)照組大鼠肝臟SOD、GSH-Px、MDA水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明運(yùn)動(dòng)疲勞大鼠肝臟 SOD、GSH-Px水平降低，MDA水平升高;運(yùn)動(dòng)+大椎+足三里組、運(yùn)動(dòng)+足三里組大鼠與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組大鼠肝臟 SOD、GSH-Px、MDA水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明大鼠經(jīng)針刺治療后肝臟SOD、GSH-Px、MDA水平恢復(fù);運(yùn)動(dòng)+大椎+足三里組與運(yùn)動(dòng)+足三里組大鼠肝臟SOD、GSH-Px、MDA水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明大椎、足三里兩穴配合針刺，大鼠肝臟SOD、GSH-Px、MDA水平恢復(fù)優(yōu)于單純針刺足三里穴。

表4 各組大鼠SOD、GSH-Px、MDA水平比較(±s)

表4 各組大鼠SOD、GSH-Px、MDA水平比較(±s)

注:與安靜對(duì)照組比較:*P＜0.05;與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組比較:△P＜0.05;與運(yùn)動(dòng)+足三里組比較:#P＜0.05

組 別 SOD (U/mg pro) GSH-Px (U/mg pro) MDA (nmol/mg pro) I 358.10±16.55 61.02±3.05 7.42±1.12 II 286.57±14.76* 47.95±3.28* 9.84±1.55*III 375.83±18.38△# 53.63±4.72△# 6.82±1.34△#IV 347.25±18.56△ 59.24±4.37△ 7.02±1.26△

5 結(jié)論與討論

尿素氮是機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的最終產(chǎn)物，機(jī)體運(yùn)動(dòng)持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)(＞30 min)、強(qiáng)度較大時(shí)蛋白質(zhì)代謝較明顯，但其供能比例不超過18%，因此血清中尿素氮含量與運(yùn)動(dòng)機(jī)能狀態(tài)、疲勞程度以及運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的大小有關(guān)，并以此評(píng)定運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的強(qiáng)度［2］。當(dāng)運(yùn)動(dòng)肌肉糖原耗盡時(shí)，非運(yùn)動(dòng)肌肉中糖原不能及時(shí)補(bǔ)充肌細(xì)胞內(nèi)分隔存在的糖原，肌肉吸收較多的血糖供能，引起血糖降低進(jìn)而影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的能量供應(yīng)，乳酸堆積導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)性疲勞造成體能下降［3］。SOD可有效清除體內(nèi)超氧陰離子，其活性的變化反映體內(nèi)自由基的代謝和生成情況［4］。MDA反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度，同時(shí)亦為自由基生成及對(duì)膜脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)破壞的評(píng)定指標(biāo)。GSH-Px是一種可以分解過氧化物及過氧化氫的含硒的酶，通過阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)，從而保護(hù)膜結(jié)構(gòu)和功能的完整［5］。大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)使肝臟代謝異常或紊亂，破壞肝組織抗氧化系統(tǒng)，不能被及時(shí)清除氧自由基攻擊細(xì)胞膜形成的MDA，導(dǎo)致肝功能有所下降［6］。

中醫(yī)學(xué)的針刺療法對(duì)于消除和緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞具有良好的效果，且簡(jiǎn)便易行、無(wú)毒副作用。運(yùn)動(dòng)性疲勞是機(jī)體生理過程中不能持續(xù)其機(jī)能在一特定水平上或不能維持預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度［7、12］。運(yùn)動(dòng)性疲勞是一個(gè)很復(fù)雜的綜合性生理現(xiàn)象，它以中樞神經(jīng)的作用為主導(dǎo)，是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍組織相互影響下發(fā)生的神經(jīng)、感覺系統(tǒng)和運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)及內(nèi)臟器官的活動(dòng)而出現(xiàn)的復(fù)雜的相互聯(lián)系的變化［7］。中醫(yī)認(rèn)為，精(津)血為體力產(chǎn)生的物質(zhì)基礎(chǔ)，它的化生和運(yùn)行與中醫(yī)脾、腎、肝、心有密切關(guān)系［8］。由整體觀出發(fā)，運(yùn)動(dòng)性疲勞的本質(zhì)為臟腑功能失調(diào)或津血不足，因其為暫時(shí)性內(nèi)傷虛勞，故多可通過調(diào)養(yǎng)或自行恢復(fù)［9］，而脾虛、腎虛、氣虛、血虛等不同形式的虛證為運(yùn)動(dòng)性疲勞的主要表現(xiàn)。目前運(yùn)用中醫(yī)藥方法尤其是針灸療法防治運(yùn)動(dòng)性疲勞的相關(guān)研究，已成為運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)界的一大熱點(diǎn)。《通玄指要賦》有記載:“三里卻五勞之羸瘦。”足三里穴能補(bǔ)益中氣，又有回陽(yáng)固脫之效，因此前人將它列為回陽(yáng)九針穴之一。現(xiàn)代研究表明［4-10］，針灸足三里穴能夠延緩運(yùn)動(dòng)性疲勞發(fā)生。大椎穴為機(jī)體聯(lián)絡(luò)臟腑、協(xié)調(diào)表里內(nèi)外的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)(督脈)的重要穴位，《針灸甲乙經(jīng)》即言大椎為“三陽(yáng)督脈之會(huì)”，可代表督脈通過監(jiān)督調(diào)節(jié)各陽(yáng)經(jīng)上傳下達(dá)，從而達(dá)到統(tǒng)帥經(jīng)絡(luò)功能協(xié)調(diào)臟腑活動(dòng)的作用［11］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大椎與足三里兩穴配合作用不僅可以使運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后的大鼠血清LAC、BUN和肝臟MDA水平降低，血糖和肝、肌糖原水平及肝臟抗氧化酶SOD、GSH-Px活性升高，具有良好的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞效果，且作用效果優(yōu)于單純刺激足三里穴的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞效果。

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Experiment Study the Impact of Acupuncture Dazhui and Zusanli Point on Sports Fatigued Rats

LIU Jing-yu1，LIU Zhi-zhong2，MA Jun-nan1，Yan Ping1
(1．Shanxi University of Traditional Chinese Medicine，Taiyuan 030024，China; 2．Basic theory Institute，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China)

Objective:To study the impact of acupuncture Dazhui and Zusanli point on sports fatigued rats in terms of antioxidant system and energy metabolic system.Methods:The rat models of swimming training were used.60 male rats were randomized into four groups(n=15)，named a motionless control group，a motion control group，a motion + acupuncture Dazhui and Zusanli point group，a motion motion+acupuncture Zusanli point group.In the motionless group，no any motion exercise and acupuncture was applied.Other groups swimming training 60 minutes a day，in the motion control group no acupuncture was applied，in the remaining two groups after motion training corresponding acupuncture was applied for 5 weeks.Afterwards，the relevant biochemical indexes of sports fatigue were determined.Results:Acupuncture Dazhui and Zusanli point decreased the levels of serum lactic acid and urea nitrogen and liver malondialdehyde and increased the levels of blood glucose and some liver antioxidase activities such as superoxide dismutase and glutathione peroxidase.Conclusion:Acupuncture Dazhui and Zusanli point can be anti-sports fatigue，more effective than Acupuncture Zusanli acupoint only.

Acupuncture;Dazhui point;Zusanli point;Free Radicals;Energy Metabolism;Sports Fatigue

R245.31

:B

:1006-3250(2015)11-1435-03

2015-02-14

山西省科技廳自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2012011041-3)

劉景玉(1980-)，男，黑龍江人，講師，醫(yī)學(xué)碩士，從事體育教育、運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)的臨床與研究，E-mail:42519256@ qq.com。