CD4⁺T細胞在抗腫瘤過繼性免疫治療中作用的分析

[摘要] 目的 觀察并分析CIK細胞中CD4+T細胞的Th1/Th2亞群分布情況。方法 采用體外試驗大規模擴增CIK細胞，采用磁珠法對其中的CD4+T細胞進行純化處理。然后采用熒光定量RT-PCR、ELISA以及胞內染色法對培養前后Th1/Th2類細胞因子的基因表達變化和分泌量、Th1/Th2細胞亞群定的比例進行檢測。結果 富集CD4+T細胞的純度高達96%，在CIK細胞中，Th2亞群較PBMC顯著降低，而Th0和Th1亞群的比例顯著升高（P<0.05）。在CD4+TCIK細胞中，TGF-β和IL-10等Th2類細胞因子的分泌量明顯降低（P<0.05），而IFN-γ和IL-2等Th1類細胞因子的分泌量明顯增高（P<0.05）。結論 CIK細胞中的CD4+T細胞具有明顯的Th1優勢，有利于推動抗腫瘤免疫反應的發展。

[關鍵詞] CD4+T細胞；抗腫瘤過繼性免疫治療；臨床作用分析

[中圖分類號] R730.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）05（c）-0173-02

[Abstract] Objective Observation and analysis of CIK cells of Th1/Th2 CD4+T cell subsets distribution. Methods Large-scale expansion by in vitro test of CIK cells， by using the method of magnetic beads purification processing CD4+T cells. Then using fluorescence quantitative rt-pcr and ELISA and intracellular staining method to cultivate the Th1/Th2 cytokines gene expression before and after the change and production， the proportion of Th1/Th2 cells subsets for testing. Results Concentration is as high as 96%， the purity of CD4+T cells in CIK cells， the Th2 subsets， no significant change in the PBMC and Th0 and a significant increase in the proportion of Th1 subsets（P<0.05）. In TCIK CD4+cells， the TGF-beta and IL-10 Th2 type cytokines secretion decreased obviously（P<0.05）， while IFN-gamma and IL-2 class Th1 cytokine secretion increased obviously（P<0.05）. Conclusion CIK cells of CD4+T cells has obvious advantages of Th1， is beneficial to promote the development of antitumor immune responses.

[Key words] CD4+T cells；Anti-tumor adoptive immunotherapy； Clinical effect analysis

CIK細胞是一種群異質細胞，具有較高的殺瘤活性且增值速度非?？?，幾乎不會影響人體的正常造血，正因為憑借著這些特征，在臨床治療血液系統疾病時，CIK細胞顯著優于其他過繼性免疫治療方式，并且在臨床治療部分感染性疾病的過程中表現出了強大的優勢[1]。為觀察并分析CIK細胞中CD4+T細胞的Th1/Th2亞群分布情況，該研究選取2013年7月—2014年7月在該院進行治療的20例惡性實體瘤患者為研究對象進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2013年7月—2014年7月在該院進行治療的20例惡性實體瘤患者為研究對象，其中男性患者12例，女性患者8例，年齡分布為40～75歲，平均年齡為（57.5±0.5）歲。所有患者的腫瘤類型為：甲狀腺癌患者2例、直腸癌患者3例、乳腺癌患者4例、腎癌患者5例、肺癌患者6例。術后9例，晚期轉移11例。

1.2 方法

采用CS3000plus血細胞分離機富集所有患者的自體外周血于單個核細胞之后，用Ficoll淋巴細胞分離液把PBMC分離出來，應用濃度為5%的AB血清的1 640培養液調整細胞的濃度為1～3×106/mL。培養的第一天，加入1 000 u/mL的人重組IFN-γ、100 u/mL的人重組IL-1α以及100 ng/mL的抗人CD3單抗；在培養的第一天，加入300 u/mL的人重組IL-2，連續培養11 d左右之后進行細胞的收集。

1.3 統計方法

采用SPSS 19.0統計學軟件對該研究數據進行分析處理，計量數據用（x±s）進行表示，組間比較采用t值進行檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義[2]。

2 結果

2.1 CIK細胞中CD4+T細胞的純化以及Th1/Th2亞群的分布

經過純化，富集CD4+T細胞的亞群純度達到96%，存活率為95%。對比CIK和PBMC的CD4+T細胞中的Th1/Th2亞群分布情況：Th0和Th1亞群的比例顯著升高，數據差異有統計學意義（P<0.05），但Th2亞群無顯著變化（P<0.05），見表1。

2.2 CIK和PBMC細胞中CD4+T細胞培養上清中多種細胞因子的含量變化

在CD4+TCIK細胞中，TGF-β和IL-10等Th2類細胞因子的分泌量明顯降低（P<0.05），而IFN-γ和IL-2等Th1類細胞因子的分泌量明顯增高（P<0.05），見表2。

3 討論

Schmidt-Wolf GD等研究人員發現，細胞亞群同樣存在于小鼠體內，其功能各不相同，還能夠各自分泌出不同的細胞因子，該細胞亞群被稱之為輔助性T細胞（Th）[3]。之后，Fiorentino DF等研究人員進一步證實在人體內同樣存在和小鼠體內相似的Th細胞亞群[4]。也是因為該細胞亞群具有不同的功能，因而使得它們在部分疾病的病情發展變化當中具有不同的表現，該研究人員構思期望利用對細胞分化調控來打破細胞亞群的平衡狀態，通過這種方式實現預防某些疾病和治療某些疾病的目的[5-6]。

該研究結果顯示，20例惡性實體瘤患者經過11 d左右的多因子體外誘導之后，在CIK細胞中，Th2亞群中的TGF-β和IL-10含量分別為（302.0±61.9）和（530.4±407.0），較PBMC顯著降低，而Th0和Th1亞群的比例較PBMC顯著升高（P<0.05），特別是CD3+CD56+細胞、CD4+T細胞和CD8+T細胞的比例，對比培養前，數量顯著升高。由此表明，在CIK細胞中，CD4+T細胞具有明顯的Th1優勢。相關研究證明，張瑞萍等[7]研究人員證明，在CIK細胞中，殺傷性CD8+T細胞和雙陽性CD3+CD56+細胞屬于主要的效應細胞，能夠構成CIK細胞的強大殺瘤活性。但從目前的實際來看，在整個CIK細胞中，通過培養之后迅速升高的CD4+T細胞的作用機制還沒有得到充分明確，因而需要研究人員對CD4+T細胞進行進一步地研究[8]。

綜上所述，在CIK細胞中，CD4+T細胞具有顯著的Th1優勢，與更大的數量相結合，從而顯著提高實體瘤患者體內各種免疫效應細胞的功能，有助于促進抗腫瘤免疫反應的發展。

[參考文獻]

[1] 曾瑞紅，房桂珍.CD4+T細胞在腫瘤免疫治療中的作用[J].細胞生物學雜志，2011，33（1）：89-90.

[2] 于津浦，任秀寶.不同輸注途徑對CIK細胞治療后的體內分布的影響[J].中國免疫學雜志，2012，56（3）：77-79.

[3] Schmidt-Wolf GD，Negrin RS，Schmidt-Wolf IGH.Activated Tcells and cytokine- induced CD3+、CD56+ killer cells[J].AnnHematol，2011，74（2）：51-56.

[4] Fiorentino DF，Bond MW，Mosmann TR，et al.Two types ofmouse T helper cell[J].J Exp Med，2012，170（6）：2081-2095.

[5] 張維紅.CD40/CD40L交聯在CD4+T細胞誘導腫瘤細胞凋亡中的機制研究[J].中國免疫學雜志，2013，41（10）：66-68.

[6] 羅榮城.CIK細胞過繼性免疫治療對TACE術后肝癌患者免疫功能的影響[J].廣東醫學，2012，55（9）：91-93.

[7] 張瑞萍，金增強.表達嵌合T細胞受體的T淋巴細胞介導的腫瘤過繼性免疫治療作用研究[J].腫瘤，2011，41（10）：55-57.

[8] 任秀寶.樹突狀細胞對CIK細胞中CD4+CD25+T細胞數量及免疫調節作用的影響[J].中華醫學雜志，2012，66（44）：83-85.

（收稿日期：2015-02-21）