電化學發(fā)光法檢測抗甲狀腺過氧化物酶抗體的性能驗證及其在甲狀腺疾病中的診斷價值

羅浩元，雷艷梅，劉集鴻，曾濤，梁金霞

(惠州市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣東 惠 州516001)

抗甲狀腺過氧化物酶抗體 (Thyroid peroxidase antibody TPOAb)作為診斷、鑒別診斷、療效評估自身免疫性甲狀腺疾病的重要指標，已廣泛應用于臨床[1，2]。為了保證患者檢測結果的可靠性，確立臨床對使用該項目檢驗報告的信心，本研究對羅氏Cobas e601配套的TPOAb試劑盒的性能進行了核實驗證，對TPOAb診斷自身免疫性甲狀腺疾病的臨床價值進行初步評價。

1 材料與方法

1.1 一般材料 高、低值濃度混合血清標本來自本院門診患者和健康體檢中心，樣本要求無溶血、黃疸和脂血。

1.2 儀器與試劑 德國Roche Cobas e601全自動電化學發(fā)光免疫分析儀及配套試劑(批號175454)、校準品(批號 168471、168301 和 172212)。

1.3 方法

1.3.1 精密度 參照CLSI EP15-A2[3]文件執(zhí)行。采用高、低值2個水平濃度混合血清，每批每天重復測定3次，共測定5d，分別統(tǒng)計批內不精密度(CV)和批間不精密度(CV)，并與廠商聲明的批內CV和批間CV進行比較，判斷標準：小于廠商聲明的不精密度則認為精密度符合要求。

1.3.2 準確度 對不同于當前使用校準品批號的另一校準品進行檢測，與被測校準品的靶值比較，計算相對偏差[4]。判斷標準：相對偏差在±10%以內。

1.3.3 線性范圍 參照CLSI EP6-A[5]文件執(zhí)行。收集覆蓋分析測量范圍的低濃度(L)和高濃度(H)的血清樣本， 將 L和 H樣本按 1L、0.8L＋0.2H、0.6L＋0.4H、0.4L＋0.6H、0.2L＋0.8H、1H 關系配制成 6 個系列樣本。每個樣本檢測2次取均值，以預期值為X，實測值為Y進行回歸統(tǒng)計，得出回歸方程Y=b1X＋b0。 判斷標準：斜率 b1在 0.97～1.03 范圍內，截距b0接近于0(作截距b0與0差異的t檢驗)，則直接判斷該測定方法的分析測量范圍在實驗已涉及濃度范圍。

1.3.4 生物參考區(qū)間 參照CLSI C28-A3[6]文件執(zhí)行。標本來自本院體檢中心(經體格檢查無心、肺、腎等重要臟器疾病；甲狀腺功能6項指標：血清TT3、FT3、TT4、FT4、TSH、TG 均正常； 經其他特檢排除甲狀腺疾病；排除甲狀腺疾病家族史患者)的空腹血清，男、女各20例，年齡在18～65歲。檢測結果只允許有不超過10%的數(shù)據在廠商聲明的生物參考區(qū)間之外。

1.3.5 臨床診斷實驗 對照組來自生物參考區(qū)間評價標本40例，疾病組來自本院已確診的甲狀腺疾病患者 144例，男 66例，女 78例，年齡在 16～68歲，其中自身免疫性甲狀腺疾病組91例(Graves病48例、橋本氏甲狀腺炎43例)；非自身免疫性甲狀腺疾病組53例，甲狀腺疾病組均符合《中國甲狀腺疾病診治指南》[7]的診斷標準，疾病組和對照組的年齡、性別構成比無顯著差異，檢測結果以TPOAb＞34IU／ml判為陽性。

1.4統(tǒng)計學分析 采用SPSS13.0軟件處理，陽性率比較用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 精密度實驗結果 實驗獲得低、高水平濃度混合血清的批內精密度和批間精密度均在廠家聲明的要求內，表明TPOAb精密度良好。精密度實驗結果見表1。

表1 TPOAb精密度實驗結果(IU／ml)

2.2 準確度實驗結果 檢測系統(tǒng)先用TPOAb批號為168471的校準品進行校準，再對批號為168301和172212的TPOAb校準品進行檢測，測定值與靶值比較，相對偏差在-3.01%～3.84%之間，表明檢測系統(tǒng)準確度高。準確度實驗結果見表2。

表2 TPOAb的準確度實驗結果(IU／ml)

2.3 線性范圍實驗結果 廠商聲明的線性為5～600IU ／ml。 選擇低(5.8IU／ml)、高(588.6IU ／ml)值新鮮混合血清，每份系列樣本重復測定2次，實測值和預期值見表3。以預期值為X，實測值為Y做線性回歸，得出回歸方程為Y=0.9861X+1.0995，r2=0.9999。 結果顯示，相關系數(shù) r2＞0.95，斜率在 0.97～1.03之間，截距1.0995與0比較不具有統(tǒng)計學意義(t＝-0.71，P＝0.52)，表明 TPOAb 在 5.8～588.6IU／ml之間線性良好。

表3 6個系列樣本實測值和預期值(IU／ml)

2.4 參考區(qū)間實驗結果 男性20個參考個體，TPOAb 在 9.2IU／ml～30.6IU／ml，檢測值均在廠商提供的生物參考區(qū)間(＜34IU／ml)之內；女性20個參考個體，TPOAb 在 7.8IU／ml～36.1IU／ml， 有 1 例檢測值超出廠商提供的生物參考區(qū)間，因不同性別組參考區(qū)間不存在差異(t=2.04，P＞0.05)，故可以合并統(tǒng)計。40個參考個體中只有1例觀測值超出廠商提供的生物參考區(qū)間，根據C28–A3文件，廠商聲明的參考區(qū)間在本實驗室可以轉移使用。

2.5 臨床診斷實驗結果 健康對照組與甲狀腺疾病組TPOAb陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2＝66.24，P＜0.01)；自身免疫性甲狀腺疾病組與非自身免疫性甲狀腺疾病組TPOAb陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2＝53.60，P＜0.01)。各組 TPOAb 陽性率見表4。

表4 健康對照組與甲狀腺疾病組TPOAb陽性率

3 討論

電化學發(fā)光免疫分析(ECLIA)是繼放射免疫、酶聯(lián)免疫、熒光免疫、化學發(fā)光免疫之后的新一代標記免疫分析技術，與傳統(tǒng)的 EIA、RIA、CLIA法相比較，具有靈敏度高、操作簡便、示蹤物穩(wěn)定、標準曲線范圍寬、不受樣品自然熒光干擾、無放射性污染、標記物存儲時間長等優(yōu)點[8]。臨床實驗室對配套檢測系統(tǒng)的精密度、準確度、線性范圍和生物參考區(qū)間進行驗證也是國內實驗室ISO15189認可的要求。利用CLSI EP15–A2文件可以使實驗室通過最小的努力即可核實廠家聲明精密度性能，表1結果顯示，實驗得出高、低值樣本批內和批間CV均小于廠商聲明的CV要求，表明檢測系統(tǒng)精密度良好。

保證檢驗結果的準確性是醫(yī)療衛(wèi)生工作的需要和臨床實驗室的工作目標，分析有證參考物質是評價準確度的主要方法之一，將實驗結果與靶值比較，判斷偏倚是否與廠商聲明或其他規(guī)定的性能要求一致[9]。由于目前TPOAb在 CLIA′88和生物學變異的分析質量要求中未提及，故參考其他腫瘤標志物來設定本實驗室TPOAb偏倚<10%。表2結果顯示，檢測4份校準品的偏倚在(-3.01%～3.84%)之間，均符合分析質量要求。在線性范圍評價中，TPOAb 在 5.8IU／ml～588.6IU／ml線性良好；由于TPOAb達到600IU／ml的血清標本一時無法獲得，最高檢測588.6IU／m1，略低于廠家的最高檢測值，還需補充驗證。

生物參考區(qū)間是臨床判斷健康與否的標準，實驗室必須保證給臨床提供的生物參考區(qū)間正確適用。最新的CLSI／國際臨床化學和檢驗醫(yī)學聯(lián)合會(IFCC)參考區(qū)間建立指南建議采用轉移、引用和驗證已經建立的參考區(qū)間[10]。CLSI C28–A3文件提供3種方法來評估轉移的參考區(qū)間在本實驗室是否適用：(1)系統(tǒng)性評審；(2)用20個參考值數(shù)據驗證；(3)用60個參考值數(shù)據驗證；本研究采用方法2進行驗證，結果顯示，廠商聲明的參考區(qū)間可以轉移使用。

為了評價TPOAb在甲狀腺疾病中的診斷價值，本研究選取144例已確診的不同類型甲狀腺疾病患者和40例健康人群進行TPOAb水平分析。實驗結果顯示，TPOAb陽性率在健康對照組與甲狀腺疾病組間差異有統(tǒng)計學意義 (χ2＝66.24，P＜0.01)，自身免疫性甲狀腺疾病與非自身免疫性甲狀腺疾病的TPOAb陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=53.60，P<0.01)，TPOAb 陽性率在自身免疫性甲狀腺疾病中達78.2%，尤其在橋本氏甲狀腺炎患者中陽性檢出率高達84.4%，與既往文獻報道一致[11]，表明TPOAb在自身免疫性甲狀腺疾病中具有重要臨床診斷價值。

綜上所述，羅氏Cobas e601電化學發(fā)光免疫分析儀檢測TPOAb的基本分析性能符合質量目標要求，檢測TPOAb在診斷自身免疫性甲狀腺疾病中具有重要臨床價值，值得臨床推廣應用。

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