無償獻(xiàn)血者TP-ELISA檢測(cè)不合格標(biāo)本分析

陳紅

(九江市中心血站，江西 九 江332000)

梅毒是由梅毒螺旋體 (Treponema pallidum，TP)感染人體所引起的一種系統(tǒng)性、可累及人體多臟器，嚴(yán)重危害患者身心健康的疾病。近年來，在全球范圍內(nèi)發(fā)病率逐年提高，且有不斷蔓延的趨勢(shì)，尤其在東南亞等發(fā)展中國(guó)家發(fā)病率更高[1]。我國(guó)梅毒發(fā)病率也不斷增高，已居乙類法定傳染病的第三位[2，3]，全國(guó)平均每年以52.7%的增長(zhǎng)率增長(zhǎng)[4]。梅毒傳播除了性接觸外，非性接觸間傳播也占有重要的地位[5]。輸血是梅毒傳播的途徑之一，保證血液安全是我們血站工作人員的職責(zé)。獻(xiàn)血者梅毒檢測(cè)重要原因之一就是作為HIV的替代檢測(cè)指標(biāo)防范HIV的窗口期感染[6]。為了解梅毒試劑的使用情況，我們對(duì)本站2005年7月-2014年5月獻(xiàn)者血TP-ELISA檢測(cè)不合格的標(biāo)本用TP-PA試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)，回顧性分析檢測(cè)情況，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2005年7月-2014年5月九江地區(qū)無償獻(xiàn)血者，體檢合格后采血，同時(shí)留取5±1ml樣本在2~8℃冰箱保存，1600g離心 20min，48h內(nèi)完成TP-ELISA檢測(cè)，檢測(cè)陽性標(biāo)本共計(jì)1802份。

1.2 試劑與儀器 TP-ELISA檢測(cè)試劑盒由英科新創(chuàng)科技有限公司和北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供，均通過中國(guó)藥品生物制品檢定所批批檢合格；TP-PA檢測(cè)試劑盒由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供，所有試劑均在有效期內(nèi)使用；ELISA檢測(cè)儀器用瑞士HAMILTON全自動(dòng)加樣儀STAR和全自動(dòng)酶免儀FAME完成，在校驗(yàn)期內(nèi)使用。

1.3 檢測(cè)方法 用2種TP-ELISA試劑進(jìn)行檢測(cè)，每次檢測(cè)嚴(yán)格按試劑說明書操作，陰陽性對(duì)照成立，室內(nèi)質(zhì)控在控。任何1種試劑S/CO值≥1.0為反應(yīng)性,0.85≤S/CO值<1.0為灰區(qū)，任一種試劑檢測(cè)為反應(yīng)性或灰區(qū)的，則重取血袋導(dǎo)管血雙試劑雙孔平行復(fù)試，復(fù)試后任1種試劑任1孔呈反應(yīng)性或灰區(qū)的，判為陽性；吸取TP-ELISA檢測(cè)陽性標(biāo)本1.5~2ml，于-20℃冰箱保存，每月集中用TPPA檢測(cè)試劑進(jìn)行確證，嚴(yán)格按照試劑說明書要求操作和判定結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

見表1~3。

表1 2種ELISA試劑檢測(cè)結(jié)果

表2 2種TP-ELISA試劑檢測(cè)不合格標(biāo)本S/CO值分布

表3 TP-PA試劑確認(rèn)結(jié)果

3 討論

《血站技術(shù)操作規(guī)程》(2012版)明確規(guī)定：獻(xiàn)血者梅毒檢測(cè)應(yīng)采用2種不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑檢測(cè)梅毒特異性抗體[7]。TP-ELISA具有試劑價(jià)格便宜，操作簡(jiǎn)單，敏感性和特異性較高，穩(wěn)定性好，可自動(dòng)化進(jìn)行檢測(cè)和結(jié)果分析等諸多優(yōu)點(diǎn)[8-12]，但由于其方法學(xué)的原因，不可避免地導(dǎo)致TPELISA檢測(cè)存在一定程度的假陽性和漏檢的風(fēng)險(xiǎn)。從我們的試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析可以看出，1802份TPELISA檢測(cè)陽性的標(biāo)本，2種試劑均陽性的，TP-PA確證陽性率高達(dá)97.78%(1496/1530)，特別是S/CO值≥3.0的(A試劑98.9%，B試劑98.2%)，與其他文獻(xiàn)報(bào)道的95.38%(165/173)和96.22%(356/370)一致[13,14]；單試劑陽性的，TP-PA確證陽性率為25.69%(56/218)，與TP-PA吻合率低，但較其他文獻(xiàn)報(bào)道的12.28%(7/57)高[13]，提示單試劑檢測(cè)梅毒存在漏檢的風(fēng)險(xiǎn)；灰區(qū)標(biāo)本有42.59%(23/54)確認(rèn)試驗(yàn)為陽性或可疑，說明灰區(qū)的設(shè)置是有必要的，可以最大限度地保證血液安全，但灰區(qū)的設(shè)置范圍有待進(jìn)一步探討，以減少血液資源的不必要浪費(fèi)。表1、表2的數(shù)據(jù)顯示，2種試劑檢測(cè)結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但表1~3的數(shù)據(jù)同時(shí)也顯示TP-ELISA檢測(cè)單試劑或低值陽性的標(biāo)本存在較高的假陽性。大多數(shù)獻(xiàn)血者都是帶著一顆愛心來獻(xiàn)血，而且他們都比較關(guān)注自身的健康狀況，血站告知獻(xiàn)血結(jié)果不合格，剝奪了獻(xiàn)血者再次獻(xiàn)血的權(quán)力的同時(shí)，給獻(xiàn)血者造成很大的精神壓力。我們?cè)粉?1位獻(xiàn)血者，TP-ELISA檢測(cè)單試劑陽性，TP-PA檢測(cè)為陰性，間隔半年以后再次抽血體檢，TPELISA檢測(cè)雙試劑陰性，TP-PA檢測(cè)仍為陰性，這說明前次的TP-ELISA檢測(cè)為假陽性。造成假陽性的原因一方面可能是試劑批批之間靈敏度和特異性有差異，另一方面也可能是當(dāng)時(shí)獻(xiàn)血者體內(nèi)存在某種與梅毒抗體相似的物質(zhì)，造成試驗(yàn)假陽性。這些獻(xiàn)血者的淘汰造成了血液資源的浪費(fèi)。梅毒螺旋體抗體具有保護(hù)性，盡早治療，可以使其體內(nèi)獲得高含量的抗體，可增強(qiáng)對(duì)梅毒螺旋體的清除能力[15]。所以筆者認(rèn)為血站在2次TP-ELISA檢測(cè)的基礎(chǔ)上應(yīng)加做梅毒的TP-PA確證試驗(yàn)，在告知獻(xiàn)血者檢測(cè)結(jié)果時(shí)應(yīng)有所區(qū)別：確證試驗(yàn)陽性的在淘汰血液的同時(shí)淘汰獻(xiàn)血者，同時(shí)盡快告知獻(xiàn)血者檢測(cè)結(jié)果，建議到醫(yī)院檢查，爭(zhēng)取治療的時(shí)間；確證試驗(yàn)陰性的，僅淘汰血液而不淘汰獻(xiàn)血者，建立暫時(shí)屏蔽機(jī)制，建議獻(xiàn)血者間隔一段時(shí)間后再次體檢，并做好解釋工作以減輕獻(xiàn)血者的壓力，最大限度地保留獻(xiàn)血者。

[1]Srisupanant M,Wiwanitkit V.Screening for syphilis by serology of Thai workers going abroad [J].Travel Med Infect Dis,2009,7(3):169-170.

[2]徐剛,林壯,鄧健因,等.梅毒血清固定與 IL-2、IL-12及 IL-10 的相關(guān)性研究[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,32(6):690-691.

[3]包雅圖,于娜沙,曾抗,等.梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能研究[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2006,13(2):254-255.

[4]馬紅霞,周運(yùn)恒,楊藺,等.不同的梅毒血清學(xué)試驗(yàn)方法檢測(cè)1808例血清標(biāo)本結(jié)果分析[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2011,32(12):1350-1352.

[5]盧樹榮,何彪,黃之文.綜合二甲醫(yī)院HIV抗體和梅毒抗體檢測(cè)結(jié)果分析[J].實(shí)驗(yàn)與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),2014,32(1):81-83.

[6]Orton S.Syphilis and blood donors:what we know,what we do not know,and what we need to know[J].Transfus Med Rev,200,15(4):282-292.

[7]衛(wèi)生部.血站技術(shù)操作規(guī)程[S].中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,2012:13.

[8]古錦萍,楊榮,廖惠容,等.TP-ELISA陽性獻(xiàn)血者FTA-ABS檢測(cè)分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2011,13(2):153-154.

[9]田華.4394 例新生兒 HIV、HCV、HBV、TP 檢測(cè)結(jié)果分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(5):480-481.

[10]肖中華.1594例孕產(chǎn)婦梅毒與HIV抗體篩查結(jié)果的分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(5):502-505.

[11]Centers for Disease Control and Prevention (CDC).Discordant results from reverse sequence syphilis screening-five laboratories,U-nited States,2006-2010 [J].MMWR Morb Mortal Wkly Rep,2011,60:133-137.

[12]Castro R,Prieto ES,Santo I,et al.Evaluation of an enzyme immunoassay technique for detection of antibodies against Treponema pallidum[J].Clin Microbiol,2003,41(1):250-253.

[13]錢立瓊,蹇志偉,廖秀云.獻(xiàn)血者梅毒檢測(cè)不合格標(biāo)本TP-PA確證分析[J].中國(guó)輸血雜志,2014,27(8):845-846.

[14]陳紅,劉鵬,蘇娟,等.427例無償獻(xiàn)血者梅毒陽性標(biāo)本的調(diào)查分析[J].中國(guó)輸血雜志,2009,22(11):926.

[15]王薇薇,陳鑫,韓亞琴,等.梅毒螺旋體抗體含量與RPR檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2015,33(1):88-90.