血清中結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測在肺結核診斷中的應用價值

辛茶香，陳超

(江西省胸科醫院檢驗科，江西 南 昌330006)

結核病是一種由結核分枝桿菌感染，嚴重危害人類健康的慢性傳染病。對肺結核做出快速準確的診斷一直是臨床工作中的一個難點。目前細菌學檢查仍是肺結核病診斷的金標準，但傳統的涂片抗酸染色敏感性低，分枝桿菌培養時間長(需6~8周)，基因診斷技術的PCR，由于實驗條件限制在很多基層單位不適合開展。因此尋找敏感、特異、快速、簡便的診斷方法十分重要[1-4]。本文利用膠體金法對活動性肺結核和非結核性肺部疾病患者血清中的結核分枝桿菌IgG/IgM抗體進行了檢測，并以臨床診斷作為金標準評價該方法的敏感性和特異性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 120例活動性肺結核病人均是

2015年1月至2015年4月在我院結核內科住院的患者，其中男86例、女34例，年齡21~73歲，平均39歲，結核病的診斷標準參照文獻[5]；40例非結核性肺部疾病患者均是2015年3月在我院腫瘤科和呼吸科住院的患者 (13例肺癌患者、16例COPD、11例急性支氣管炎患者)其中男31例，女9例；年齡34~80歲，平均47歲。全部病例的診斷依據為細菌學、病理學、細胞學、胸部X線、生化等指標來確診。30例健康獻血員由江西省血液中心提供。入選病例均留取晨痰和血清標本；健康獻血員只留取血清標本。本研究經我院倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 試劑 膠體金法檢測結核分枝桿菌IgG/IgM抗體試劑由北京健乃喜生物技術有限公司提供，批號：F0211L4G。改良羅氏培養基由我院檢驗科自配。

1.3 血清結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測 (1)在使用前，將試劑盒和待檢樣本取出平衡至室溫；(2)當準備好測試時，打開密封的鋁箔袋取出檢測卡平放于水平桌面上；(3)在檢測卡上標上患者的樣本號；(4)用滴管或加樣器從樣本管中取2~3滴或60~90μl血清的樣本滴加于檢測卡上的樣本孔內，滴加一滴樣本稀釋液，并保證操作過程中沒有氣泡產生；(5)加入樣本后10min內判讀結果；(6)結果判讀：在質控線C出現的前提下，如果只有T1反應線出現，說明抗結核IgM抗體陽性，如果只有T2反應線出現，說明抗結核IgG抗體陽性，如果T1和T2反應線都出現，說明抗結核IgG/IgM抗體都為陽性。如果僅出現一條質控線C，說明沒有檢測到結核抗體，結果為陰性。

1.4 痰涂片抗酸染色，分枝桿菌培養 操作方法參見《結核病診斷實驗室檢驗規程》[6]。

1.5 統計學處理 對試驗計數資料用χ進行分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 120例活動性肺結核病患者中菌陽 (涂陽或培陽)54例，菌陰66例。血清結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測菌陽肺結核的敏感性為79.6%(43/54)，菌陰肺結核的敏感性為69.7%(46/66)；診斷活動性肺結核的總敏感性為74.2%(89/120)，特異性為91.4%(64/70)。120例活動性肺結核病患者中血清結核分枝桿菌IgG/IgM抗體共檢出89例陽性，其中IgG抗體84例陽性，IgM抗體5例陽性，未見IgG和IgM抗體同時陽性。見表1。

表1 結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測結果分析

2.2 結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測與細菌學檢測結果比較 在120例活動性肺結核患者中，結核分枝桿菌IgG/IgM抗體陽性檢出率為74.2%(89/120)，遠高于細菌學陽性檢出率45.0%(54/120)，χ2=21.2，P<0.005，具有統計學意義。

3 討論

結核抗體檢測從方法可以分為ELISA法、免疫色譜法(DIG-FA)和免疫膠體層析法，而檢測的效果主要在于抗原表位的選擇及純化水平。目前結核抗體IgG主要選擇使用純化的結核菌細胞壁多糖，最常用的是結核菌LAM；基因工程表達的結核分枝桿菌特異性抗原、38KDa和16KDa蛋白等[7-11]。本實驗用膠體金免疫層析法，檢測條中含有膠體金標記的結核抗原和提取自新西蘭白兔的IgG，小鼠抗人IgM抗體，所用的結核抗原由重組DNA方法在大腸桿菌表達獲得，因此同時可檢測血清中結核分枝桿菌IgG/IgM抗體。

本實驗活動性肺結核血清中結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測的敏感性為74.2%，特異性為91.4%。其敏感性低于古翠姣等人報道的96.88%[12]。對菌陰活動性肺結核患者結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測的敏感性為69.7%，具有較高的輔助診斷價值。

結核病的發生、發展及轉歸與機體免疫功能密切相關。結核分枝桿菌再次刺激機體時，機體的漿細胞產生B淋巴細胞，由B淋巴細胞產生免疫球蛋白IgG、IgM抗體[13]，通常的結核抗體只對IgG進行檢測，本實驗對IgG檢測的同時增加了IgM的檢測，在實驗中120例活動性肺結核血清中結核分枝桿菌IgG抗體84例陽性，IgM抗體5例陽性，因此同時檢測患者IgG/IgM抗體可以提高陽性檢出率。

40例非結核呼吸疾病患者結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測陽性率為10%(4/40)，30例健康獻血員結核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測陽性率為6.6%(2/30)，其主要原因是：(1)血清中可能存在抗原抗體復合物，或機體發生混合感染等，造成結核抗體檢測的交叉反應；(2)全國有近半的人口感染了結核桿菌[14，15]，不排除受試者感染結核桿菌引起血液中結核抗體存在的可能。

綜上所述，利用膠體金法檢測結核分枝桿菌IgG/IgM抗體對肺結核的診斷具有快速、方便、簡單，較好的敏感性和特異性等特點。

[1]張慧慧,熊國亮.評價血清中結核桿菌特異蛋白抗體對診斷肺結核的應用價值[J].實驗與檢驗醫學,2013,31(5):419-420.

[2]熊國亮.液基夾層集菌技術檢測痰標本中抗酸桿菌對診斷肺結核的應用價值[J].實驗與檢驗醫學，2013,31(5):412-413.

[3]王盈.聚合酶鏈反應與涂片法檢測對診斷結核病的價值[J].實驗與檢驗醫學,2012,30(3):314-315.

[4]張周云,熊國亮.噬菌體生物擴增法對結核病臨床診斷的意義[J].實驗與檢驗醫學,2010,28(1):33-34.

[5]衛生部.肺結核診斷標準[S].中華人民共和國衛生行業標準,2008:1-5.

[6]中國防癆協會基礎專業委員會.結核病診斷實驗室檢驗規程[M].北京:中國教育文化出版社,2006:36.

[7]Kulshrestha A,Gupta A,Verma N,et al.Expression and purification of recombinant antigens of Mycobacterium tuberculosis for application in serodiagnosis[J].ProteinExprPurif,2005,44(1):75-85.

[8]Hoff ST,Abebe M,Ravn P,et al.Evaluation of Mycobacterium tuberculosis-specific antibody responses in populations with different levels of exposure from Tanzania,Ethiopia,Brazil,and Dermark[J].Clin Infect Dis,2007,45(5):575-582.

[9]畢愛笑，金文國，丁元生，等.TB-SA結核抗體檢測的臨床應用評價[J].同濟大學學報(醫學版),2008,29(2):86-88.

[10]Lalvani A.Diagnosing tuberculosis infection in the 21st century:new tools to tackle an old enemy[J].Chest,2007,131(6):1898-1906.

[11]張培元.肺結核診斷和治療指南[J].中華結核和呼吸雜志，2001，24（2）：70-74.

[12]古翠姣,白廣紅.結核抗體IgG與IgM聯合檢測在結核病診斷中的應用價值[J].吉林醫學2013,34(29):6004-6005.

[13]Uma Devi KR,Ramalingam B,Brennan PJ,et al.Specific and early detection of IgG,IgA and IgM antibodies to mycobacterium tuberculosis 38 kDa antigen in pulmonary tuberculosis[J].Tuberculosis,2001,81(3):249-253.

[14]Jasmer RM,Nahid P,Hopewell PC.Latent tuberculosis infection[J].N Engl Med,2002,347(23):1860-1866.

[15]Butt A,Kadeishvili K,Aronow WS,et al.Testing for tuberculosis infection[J].Comprehens Ther,2008,34(3):151.