原發及轉移前列腺腺癌組織TMSG-1蛋白表達及意義

李敬敬，于文娟，張麗，項鋒鋼,

(青島大學醫學院,山東 青島 266021 1 病理學教研室； 2 附屬醫院病理科)

?

原發及轉移前列腺腺癌組織TMSG-1蛋白表達及意義

李敬敬1，于文娟2，張麗1，項鋒鋼1,2

(青島大學醫學院,山東 青島 266021 1 病理學教研室； 2 附屬醫院病理科)

目的 檢測腫瘤轉移抑制基因1(TMSG-1)蛋白在前列腺增生、原發性前列腺腺癌及轉移性前列腺腺癌組織的表達，探討其在腫瘤浸潤轉移中的作用及其與前列腺癌病人預后的關系。方法 采用免疫組織化學技術檢測TMSG-1蛋白在22例前列腺增生、38例原發性前列腺腺癌及18例轉移性前列腺腺癌組織中的表達。結果TMSG-1蛋白在前列腺增生(20/22)、原發性前列腺腺癌(34/38)及轉移性前列腺腺癌(10/18)組織中均有表達，原發性前列腺腺癌組織中TMSG-1陽性表達率明顯高于轉移性前列腺腺癌組織(χ2=6.707，P<0.05)；前列腺增生組織中TMSG-1陽性表達率高于轉移性前列腺腺癌組織(χ2=4.848，P<0.05)；前列腺增生組織中TMSG-1陽性表達率與原發性前列腺腺癌組織無差異(χ2=0.003，P>0.05)。原發性前列腺腺癌組織TMSG-1蛋白的表達與神經侵犯有關(P=0.034 7)，而與Gleason評分、鄰近組織侵犯及病人年齡均無關(P=0.306 8、0.051 2、0.123 8)。Kaplan-Meier生存分析結果表明，TMSG-1蛋白陽性組的生存時間和生存率明顯高于TMSG-1蛋白陰性組(χ2=5.153，P<0.05)。結論 TMSG-1蛋白在原發性前列腺腺癌組織的表達明顯高于轉移性前列腺腺癌，TMSG-1蛋白可能與原發性前列腺腺癌的轉移過程有關，其表達水平的高低可能作為一個預測前列腺腺癌轉移潛能大小的檢測指標。

前列腺腺癌；TMSG-1；腫瘤轉移；抑制基因；預后

前列腺腺癌是男性生殖系最常見的惡性腫瘤。在我國其發病率居男性惡性腫瘤第3位。由于缺乏有效的早期診斷的手段，我國大多數前列腺腺癌病人確診時已屬中晚期，特別是前列腺腺癌轉移嚴重威脅男性病人的健康和生命。因此，預測前列腺腺癌是否發生轉移，并采用相應的治療手段顯得尤為重要。腫瘤轉移抑制基因1(TMSG-1)是近年來新發現的腫瘤轉移抑制基因，已被證實在乳癌[1]、結直腸癌[2]、宮頸癌[3]及肝癌[4]組織中表達，與腫瘤浸潤、轉移相關。本研究采用免疫組織化學方法，檢測TMSG-1蛋白在原發性及轉移性前列腺腺癌組織表達，旨在探討TMSG-1表達是否可作為預測前列腺腺癌轉移的參考指標之一。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集青島大學附屬醫院病理科2009年1月—2014年1月存檔蠟塊，其中經手術切除的原發性前列腺腺癌38例，年齡52～82歲，中位年齡73歲。前列腺腺癌骨轉移18例，年齡39～83歲，中位年齡65歲。以上病例均經蘇木精-伊紅(HE)染色予以確診。另選取前列腺增生組織22例作為對照，病人年齡36～67歲，中位年齡48歲。對原發性及轉移性前列腺腺癌病人自明確診斷后至2014年1月全部進行隨訪，其中原發性前列腺腺癌病人存活26例，死亡4例，失訪8例；轉移性前列腺腺癌病人存活5例，死亡3例，失訪10例。

1.2 主要試劑及方法

蠟塊經3 μm厚連續切片后行免疫組織化學方法染色(PV-9000二步法)。組織切片經脫蠟、水化后，檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復15 min，體積分數0.03的H2O2滅活內源性過氧化物酶10 min。加入Ⅰ抗(鼠抗人TMSG-1單克隆抗體，美國Sigma公司產品，工作濃度1∶500)，置37 ℃水浴箱孵育1 h。加入通用型二抗(羊抗兔-鼠)，置37 ℃溫箱孵育20 min。DAB顯色、蘇木精復染、5 g/L鹽酸乙醇分化及10 g/L氨水返藍。常規脫水、透明、封片，光鏡下觀察。每批實驗用已知陽性的乳癌組織作陽性對照，PBS代替Ⅰ抗作為陰性對照。

1.3 結果判定標準

TMSG-1陽性主要是前列腺腺癌細胞的細胞質內出現棕褐色顆粒，極少數病例可出現細胞核著色。根據徐曉艷等[5]報道的判斷標準進行評分，分別在高倍鏡下隨機選擇5個視野計數，結合陽性細胞染色強弱及陽性細胞百分比兩個方面計算TMSG-1的免疫組織化學染色評分。染色強度評分標準：棕褐色3分，棕黃色2分，淡黃色1分，無著色0分。每張切片隨機選擇5個高倍視野，每個視野計數100個細胞，計算陽性細胞百分比(陽性細胞數/總細胞數)×100%。陽性細胞所占比例評分標準：陽性細胞數>75%為4分；51%～75%為3分；11%～50%為2分；1%～10%為1分；陰性位0分。將上述兩種得分相乘得到綜合得分：0～2分為陰性表達(-)，3分為(+)，4分為()，5分以上為()。(+～)均為陽性表達。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統計處理，計數資料比較用χ2檢驗及Fisher確切概率法，生存分析用Kaplan-Meier方法。以P<0.05為差異有顯著性。

2 結 果

2.1 TMSG-1蛋白在前列腺增生、原發性及轉移性前列腺腺癌組織中的表達

TMSG-1蛋白在前列腺增生、原發性及轉移性前列腺腺癌組織中均有表達，主要表達于細胞質，部分原發性前列腺腺癌組織中也可見少數細胞核著染(圖1)。原發性前列腺腺癌組織中TMSG-1陽性表達率(34/38)明顯高于轉移性前列腺腺癌組織(10/18)(χ2=6.707，P<0.05)，前列腺增生組織中TMSG-1陽性表達率(20/22)高于轉移性前列腺腺癌組織(10/18)(χ2=4.848，P<0.05)，前列腺增生組織中TMSG-1陽性表達率與原發性前列腺腺癌組織無差異(χ2=0.003，P>0.05)。見表1。

2.2 TMSG-1蛋白表達與臨床病理特征的關系

TMSG-1蛋白在原發性前列腺腺癌組織中的表達與神經侵犯有關(P=0.034 7)，而與Gleason評分、鄰近組織侵犯及病人的年齡均無關(P=0.306 8、0.051 2、0.123 8)。見表2。

2.3 TMSG-1蛋白表達與病人術后生存期的關系

Kaplan-Meier生存分析結果表明，原發性和轉移性前列腺腺癌組織中，TMSG-1蛋白陽性組生存時間和生存率明顯高于TMSG-1蛋白陰性組(χ2=5.153，P<0.05)。見圖2。

3 討 論

前列腺腺癌是威脅老年男性的主要惡性腫瘤。在我國，隨著人均壽命延長、膳食結構改變和診斷技術提高，前列腺腺癌發病率躍居第3位，病人死亡率也隨著不斷升高，且大部分病人因發生腫瘤轉移而死亡[6-7]。由于缺乏有效的早期診斷手段，前列腺腺癌病人確診時已屬中晚期。因此，預測前列腺癌是否發生轉移，并采用相應的治療手段顯得尤為重要。

TMSG-1蛋白是一種抑癌基因，目前有許多研究探討了其在采用體外培養細胞及人體組織中的表達和臨床病理意義。TMSG-1蛋白在前列腺腺癌低轉移細胞亞系中的表達明顯高于高轉移細胞亞系[5]，TMSG-1蛋白可以抑制乳癌、肺癌、肝癌等多種腫瘤細胞系的侵襲及轉移能力，與腫瘤細胞侵襲浸潤密切相關[8-10]。在結直腸癌中TMSG-1蛋白表達明顯低于正常結直腸組織，其表達與腫瘤浸潤程度、分化程度、淋巴結轉移及遠處轉移呈明顯負相關[2]；在胃癌組織中TMSG-1蛋白的表達較胃良性組織明顯下降，TMSG-1蛋白的表達與腫瘤的增殖浸潤明顯相關[11]。由此可見，TMSG-1蛋白與腫瘤的浸潤轉移密切相關。然而，TMSG-1蛋白是否與前列腺腺癌轉移有關尚未見相關報道。

我們的實驗結果顯示，TMSG-1蛋白主要表達于細胞質中，其陽性表達率在原發性前列腺腺癌組織及前列腺增生組織中明顯高于轉移性前列腺腺癌組織。結果提示TMSG-1蛋白表達減少有利于腫瘤轉移，TMSG-1蛋白可能起到抑制腫瘤轉移的作用。另外，TMSG-1蛋白在原發性前列腺腺癌組織的表達與神經侵犯密切相關，盡管與鄰近組織侵犯無統計學差異，但接近統計值，提示TMSG-1蛋白可能具有抑制腫瘤發生侵襲的作用。此外，Kaplan-Meier生存分析結果表明，TMSG-1蛋白陽性組生存時間和生存率明顯高于TMSG-1蛋白陰性組，提示TMSG-1可能與腫瘤的預后有關。本研究結果提示，TMSG-1蛋白的低表達可能是一個預測前列腺腺癌轉移的客觀參考指標。

A：在前列腺增生組織中呈陽性表達；B：在轉移性前列腺腺癌組織中呈陰性表達；C：在原發性前列腺腺癌細胞核中呈陽性表達，箭頭示細胞核表達；D：在原發性前列腺腺癌組織中呈陽性表達。PV-9000染色，200倍。

表1 TMSG-1蛋白在不同前列腺病變組織中的表達

表2 TMSG-1表達與原發性前列腺腺癌病人臨床病理特征關系(例)

圖2 TMSG-1蛋白的表達與前列腺腺癌病人的生存分析

另外，本研究結果還顯示，少數細胞核TMSG-1蛋白呈陽性表達，尤其見于原發性前列腺腺癌組織中，這與徐曉艷等[12]的研究結果一致，即與前列腺腺癌細胞系中可見少量TMSG-1核表達相一致。此種現象可能與TMSG-1的homeodomain結構域有關。有關研究的結果顯示，含有homeodomain結構域的基因屬于調節基因家族，失衡時可致腫瘤發生異常或造血系統發生異常，其調控細胞生長的作用可能與腫瘤的轉移有關[13-14]。另有研究表明，含有homeodomain結構域的TMSG-1截斷體能夠進入細胞核發揮轉錄因子的作用，推測與其腫瘤轉移抑制作用有關[15]。

徐曉艷等[5]研究結果表明，TMSG-1在前列腺腺癌組織中的表達明顯低于前列腺增生組織。本研究結果顯示，前列腺增生與原發性前列腺腺癌組織的TMSG-1蛋白陽性表達率無明顯差異，產生的主要原因可能與選擇病例的數量差異等有關，有待今后積累病例進行大樣本實驗驗證。本實驗結果還表明，TMSG-1蛋白在前列腺腺癌組織中的表達與Gleason評分及病人年齡無確切相關性，劉琳等[1]在對乳癌研究中也得出TMSG-1蛋白的表達與腫瘤病理分級和病人年齡無明顯相關性的結論。關于TMSG-1蛋白與腫瘤分化的確切關系，目前尚無定論，有待進一步深入研究。

總之，本研究結果表明，TMSG-1蛋白表達的高低與前列腺腺癌浸潤轉移有關，其表達水平的高低可能作為預測前列腺腺癌轉移潛能的一個參考指標。進一步的研究需探討TMSG-1能否作為前列腺腺癌的治療靶點。

[1] 劉琳,趙坡,張忠梅,等. 乳腺癌TMSG-1蛋白的表達及臨床病理意義[J]. 中國現代醫學雜志, 2013,23(13):59-61.

[2] 余澤炎,鐘武,陳利生. TMSG-1蛋白在結直腸癌中的表達及意義[J]. 結直腸肛門外科, 2012,18(1):7-10.

[3] SU J, YOU J F, WANG J L, et al. Overexpression of tumor metastasis suppressor gene 1 suppresses proliferation and invasion, but enhances apoptosis of human breast cancer cells MDA-MB-231 cells[J]. Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi, 2007,36(10):672-676.

[4] MESICEK J, LEE H, FELDMAN T, et al. Ceramide synthases 2,5, and 6 confer distinct roles in radiation-induced apoptosis in HeLa cells[J]. Cell Signal, 2010,22(9):1300-1307.

[5] 徐曉艷,張燕,楊京平,等. TMSG-1在人前列腺腺癌細胞株與前列腺腺癌組織中的表達及臨床意義[J]. 中華實驗外科雜志, 2011,28(6):868-870.

[6] 孫穎浩. 我國前列腺癌的研究現狀[J]. 中華泌尿外科雜志, 2004,25(2):77-80.

[7] 徐曉龍,陳長宜,王友寶,等. MIF與常見前列腺疾病相關性的研究進展[J]. 青島大學醫學院學報, 2015,51(2):244-246.

[8] 蘇靜,由江峰,王潔良,等. 人腫瘤轉移抑制基因1轉染對人乳腺癌細胞MDA-MB-231體外生物學行為的影響[J]. 中華病理學雜志, 2007,36(10):672-676.

[9] 邊巴,馬春樹,由江峰,等. TMSG-1基因轉染對腫瘤轉移表型的影響[J]. 北京大學學報:醫學版, 2003,35(1):18-22.

[10]唐寧,游海燕,金潔,等. 靶向LASS2基因的小干擾RNA對人肝癌細胞侵襲能力的影響[J]. 腫瘤, 2009,29(5):399-403.

[11]汪波. TMSG1 在胃癌中的表達及其臨床意義[J]. 中國實用醫藥, 2013,8(23):1-2.

[12]徐曉艷,由江峰,裴斐. 前列腺腺癌細胞系中TMSG-1的表達及其意義[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2011,27(1):40-43.

[13]CILLO C, FAIELLA A, CANTILE M, et al. Homeobox genes and cancer[J]. Exp Cell Res, 1999,248(1):1-9.

[14]TUPLER R, PERINI G, GREEN M R. Expressing the human genome[J]. Nature, 2001,409(6822):832-833.

[15]夏巖,王曰偉,于文娟,等. TMSG-1蛋白不同功能域重組質粒構建及亞細胞定位[J]. 齊魯醫學雜志, 2014,29(5):381-384.

(本文編輯 牛兆山 于國藝)

THE EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF TMSG-1 IN PRIMARY AND METASTATIC PROSTATE ADENOCARCINOMA TISSUES

LIJingjing,YUWenjuan,ZHANGLi,XIANGFenggang

(Department of Pathology, Qingdao University Medical College, Qingdao 266021 China)

ObjectiveTo investigate the expression of tumor metastasis suppressor gene 1 (TMSG-1) in benign prostatic hyperplasia (BPH), primary prostate adenocarcinoma (PPAC) and metastatic prostate adenocarcinoma (MPAC) and explore its effect on tumor infiltration and metastasis, as well as its association with the patient’s prognosis.MethodsThe expression of TMSG-1 was detected immunohistochemically in 22 cases of BPH,38 of PPAC, and 18 of MPAC.ResultsTMSG-1 expression was observed in BPH (20/22), PPAC (34/38) and MPAC (10/18), the expression of TMSG-1 was higher in PPAC versus the MPAC (χ2=6.707,P<0.05), and that in BPH was higher than that in MPAC (χ2=4.848,P<0.05); but no difference between BPH and PPAC (χ2=0.003,P>0.05). TMSG-l expression in PPAC was correlated with nerval invasion (P=0.034 7), but not with Gleason grade, adjacent tissue invasion and patient’s age (P=0.306 8, 0.051 2, 0.123 8). Kaplan-Meier survival analysis showed that the survival time of patients in TMSG-1-positive group was longer than those in TMSG-1-negative group (χ2=5.153,P<0.05).ConclusionThe expression of TMSG-1 in primary prostate adenocarcinoma is much higher than that in metastatic one. TMSG-1 protein may be associated with the metastasis of primary prostate adenocarcinoma. The level of TMSG-1 expression may be used as a helpful marker for predicting the potentiality of metastasis of this malignancy.

prostate adenocarcinoma; TMSG-1; metastasis; suppressor gene; prognosis.

2015-04-21;

2015-06-03

國家自然科學基金資助項目(81201654)

李敬敬(1988-)，女，碩士研究生。

項鋒鋼(1964-)，男，碩士，教授，碩士生導師。E-mail:xiangfenggang@163.com

R730.2

A

1008-0341(2015)04-0395-04