ESBLs、SSBL 的檢測及臨床應用

杜安玲

ESBLs、SSBL 的檢測及臨床應用

杜安玲

目的 了解對頭孢噻肟耐藥的大腸埃希菌產超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)、超超廣譜β-內酰胺酶(SSBL)的臨床分布及其對抗生素的敏感性。方法 利用雙紙片協同試驗及紙片法確證試驗檢測ESBLs及SSBL, 并用紙片擴散試驗和DL-96E測定抗生素的敏感性。結果 從頭孢噻肟最小抑菌濃度(MIC)≥2的大腸埃希菌檢出產ESBLs為62.5%；產SSBL為9.4%。產酶菌株對頭孢菌素高度耐藥,對氨曲南、慶大霉素、環丙沙星及復方新諾明耐藥率高, 對亞胺培南、美羅培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、頭孢哌酮/舒巴坦耐藥率低。結論 產生ESBLs、SSBL是大腸埃希菌對頭孢菌素類抗生素耐藥的重要機制, 實驗室應加強檢測, 為臨床合理使用抗生素提供依據。

抗生素；超廣譜β-內酰胺酶；超超廣譜β-內酰胺酶；耐藥性檢測

近年來發現大腸埃希菌對β-內酰胺類抗生素耐藥率升高的主要原因是細菌產生了ESBLs、SSBL和AmpC酶［1,2］,大腸埃希菌主要引起呼吸道、尿路系統、傷口等部位感染,是重要的醫院感染常見條件病原菌。為了解大腸埃希菌產ESBLs、SSBL在本所的分布情況, 正確理解細菌的不同耐藥機制, 掌握細菌耐藥率的變化, 為臨床合理使用抗生素提供依據。本試驗從臨床住院患者分離的對頭孢噻肟≥2的大腸埃希菌進行檢測ESBLs、SSBL酶, 現報告如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 選取本所2013年6月～2014年12月分離的菌株, 選擇對頭孢噻肟MIC≥2的大埃埃希菌160株。樣本主要來自痰、中段尿、胸腹水等。細菌鑒定為珠海迪爾DL-96細菌鑒定儀。

1.2 藥敏試驗 抗生素藥敏稀釋板(DL-96E)購自珠海迪爾公司。質控菌為大腸埃希菌ATCC25922。結果按2012年臨床和實驗室標準協會(CLSI)標準進行判讀。

1.3 超廣譜β-內酰胺酶檢測 雙紙片協同試驗及采用2012年CLSI推薦的初篩及確證試驗［3］。取頭孢西丁紙片抑菌環直徑≤18 mm的菌株, 轉種至胰酶大豆消化液中, 將生長至對數期的細菌培養物離心后, 取沉淀部分的菌細胞經反復凍融(-70℃及37℃交替水浴5次)制備酶的粗提物。按標準藥敏紙片擴散法在M-H瓊脂平板上涂布大腸埃希菌ATCC25922, 在平板中央放置30 mg的頭孢西丁紙片, 在距紙片邊沿5 mm處開使用無菌刀片向外呈放射狀挖一約20 mm × 2 mm的細槽, 將酶的粗提物加入細槽中, 于35℃培養過夜。表面細菌在細槽和頭孢西丁的抑菌環之間出現細菌生長為陽性, 證明所測菌產生SSBL酶。

2 結果

2.1 ESBLs、SSBL的檢測結果分析 當頭孢噻肟MIC=2、4、8、32時, 大腸埃希菌檢出產ESBLs比率分別為3.8%(6/160)、6.3%(10/160)、40.6%(65/160)、11.9%(19/160)；當頭孢噻肟MIC=2、4、8、32時, 大腸埃希菌檢出產SSBL比率分別為0、0、6.9%(11/160)、2.5%(4/160)。見表1。

表1 產ESBLs、SSBL大腸埃希菌與頭孢噻肟MIC檢出關系(n)

2.2 產ESBLs、SSBL大腸埃希對常用抗生素的敏感性 對亞胺培南敏感(100.0%)、美羅培南敏感(100.0%)、哌拉西林/他唑巴坦敏感(93.1%)、阿米卡星敏感(91.3%)、頭孢哌酮/舒巴坦敏感(78.8%)。產ESBLs大腸埃希菌對頭孢菌素類、單酰胺類、喹諾酮類、氨基糖苷類和復方新諾明抗生素高度耐藥, 僅部分菌株體外試驗顯示對四代頭孢吡肟敏感。

3 討論

由于廣譜三代、四代頭孢菌素在臨床的廣泛應用、患者免疫力下降及基礎疾病的增多, 細菌的耐藥率亦不斷增加, ESBLs和SSBL酶的產生則是目前認為大腸埃希菌對三代、四代頭孢菌素耐藥的主要機制。ESBLs大多數由TEM-1、TEM-2及SHV-1發生突變的衍生物, 能水解青霉素類、頭孢菌素類及單酰胺類, 能被克拉維酸等酶抑制劑所抑制, 對頭霉素及碳青霉烯類敏感, 多由質粒傳遞, 導致大腸埃希菌對三代頭孢菌素及酶抑制劑的耐受［4］, 以CTX型ESBLs占多數［5,6］。

本試驗中, 大腸埃希菌檢出產ESBLs、SSBL的比率分別為62.5%和9.4%, 表明大腸埃希菌對三代頭孢菌素耐藥的主要原因是產生ESBLs、SSBL, 大腸埃希菌對頭孢菌素類、喹諾酮類和單酰胺類抗生素高度耐藥, 對慶大霉素及復方新諾明耐藥率也較高, 而對頭孢哌酮/舒巴坦敏感(78.8%), 阿米卡星敏感(91.3%), 哌拉西林/他唑巴坦敏感(93.1%), 尚未發現對亞胺培南、美羅培南耐藥菌株。同時用頭孢噻肟、頭孢他啶和頭孢噻肟/克拉維酸、頭孢他啶/克拉維酸檢測ESBLs, 能起到互補作用, 能提高ESBLs的檢出率。結果顯示頭孢噻肟MIC值越大產ESBLs、SSBL率越高。

美國國家臨床標準化委員會認為產ESBLs、SSBL者, 雖體外測定對頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢吡肟等頭孢菌素敏感,但體內療效差, 實驗室應報告耐藥。本試驗中部分產ESBLs菌株顯示對頭孢他啶、頭孢吡肟體外敏感, 由于體內療效不好, 應視為耐藥。因此, 實驗室應積極開展對產酶菌的檢測,正確區分ESBLs和SSBL不僅是細菌耐藥監測的需要, 更具有分子流行病學意義, 而且對了解細菌耐藥機制, 合理選擇抗生素、為臨床合理使用抗生素提供重要依據和一定的指導作用。

［1］ 王輝, 劉穎梅, 王清濤.北京發現同時產DHA-1質粒AmpC型XRX-M型超廣譜β-內酰胺酶的肺炎克雷伯菌.中華微生物學和免疫學雜志, 2005, 25(5):419-422.

［2］ 沈定霞, 吳堅, 徐雅萍.產超廣譜β-內酰胺酶大腸桿菌的檢測及其耐藥表型和基因型.中華微生物學和免疫學雜志, 2000, 20(3):273-276.

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［4］ 凌宙貴, 劉濱, 劉衛, 等.產ESBLs動態監測及耐藥性分析.中華醫院感染學雜志, 2014, 24(17):4174-4176.

［5］ 張虎, 閆中強, 曹晉桂, 等.醫院感染肺炎克雷伯菌耐藥趨勢及b-內酰胺酶基因分型分析.中華醫院感染學雜志, 2014, 24(21):5207-5209.

［6］ 常燕子, 李巧云, 裘莉佩, 等.質粒介導的喹諾酮類耐藥基因在社區泌尿系感染大腸埃希菌中的分布.中國衛生檢驗雜志, 2010, 5(20):1092-1094.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.24.102

2015-04-23］

455000 安陽市結核病防治所