環孢素A對免疫功能的影響

白鶴

環孢素A對免疫功能的影響

白鶴

目的 研究環孢素A對免疫功能的影響。方法 通過2, 4-二硝基氟苯(DNFB)誘導小鼠遲發型變態反應考察該藥對細胞免疫功能的影響；用L929作為靶細胞的MTT染色法測定該藥對小鼠腹腔巨噬細胞經脂多糖(LPS)刺激產生腫瘤壞死因子α(TNF-α)的影響。結果 環孢素A能明顯抑制DNFB誘導的小鼠遲發型變態反應；高劑量能促進小鼠腹腔巨噬細胞TNF-α生成。結論 環孢素A有較強的免疫抑制作用。

環孢素A；免疫功能；腫瘤壞死因子-α

環孢素A是目前廣為推薦的一種兼有抗有絲分裂和抗炎效應的強力免疫抑制劑［1］。主要選擇抑制T細胞活化, 對B細胞的抑制作用弱, 對巨噬細胞的抑制作用不明顯, 對自然殺傷(NK)細胞活力無明顯抑制作用, 但可間接通過干擾素(interferon-γ, INF-γ)的產生而影響NK細胞的活力［2］。本文就其對免疫功能的調節作用和對小鼠腹腔巨噬細胞TNF-α生成的影響進行初步研究, 為該藥的臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 30只昆明種小鼠隨機分為不致敏組、致敏組和環孢素組, 每組10只除不致敏組外, 每鼠腹部去毛, 面積約3 cm ×3 cm大小, 均勻涂抹1% DNFB溶液50 μl致敏, 次日強化1次。小鼠自致敏當日起給藥1次/d, 連續6 d, 于致敏第5天后, 各組小鼠左耳(兩面)均勻涂抹1% DNFB溶液10 μl進行攻擊。24 h后將小鼠頸椎脫臼處死, 剪下雙耳, 用直徑為8 mm的不銹鋼銃子分別在左右耳同一部位沖下圓耳片,電子天平分別稱重, 以左右耳片重量之差作為腫脹程度。同時取小鼠胸腺及脾臟稱重, 分別以小鼠每10 g體重的脾重(mg)和胸腺重(mg)作為脾臟指數和胸腺指數, 統計各組的差別, 并計算抑制率(%)。

1.2 方法 L929細胞MTT染色法測定樣品TNF-α活性。L929細胞長滿單層后, 用0.25%胰酶消化, 重懸細胞于RPMI-1640培養液中, 細胞計數后調濃度為1×105cells/ml接種到96孔平底培養板中, 200 μl/孔, 設3個復孔, 37℃, 5%CO2培養箱培養24 h。棄上清, 每孔加入含0.5 μg/ml放線菌素D的培養液100 μl, RPMI-1640培養基或上述待測樣品100 μl, 設3個復孔, 37℃, 5%CO2培養箱培養20 h后, 向上清中加入MTT(5 mg/ml) 20 μl, 繼續培養4 h。棄去上清, 100 μl/孔DMSO裂解10 min, 待細胞完全融解后置于酶標儀中570 nm處測定O.D.值。以1640培養基孔為對照, 以細胞毒百分率表示樣品所含TNF-α含量。

1.3 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 環孢素A對DNFB誘導小鼠遲發型變態反應的影響 環孢素A(80 mg/kg)經皮下注射給藥對DNFB誘導小鼠遲發型變態反應有顯著的抑制作用。見表1。

表1 環孢素A對DNFB誘導小鼠遲發型變態反應的影響±s)

表1 環孢素A對DNFB誘導小鼠遲發型變態反應的影響±s)

注： 與不致敏對照組比較,aP＜0.01,bP＜0.01,cP＜0.05；與模型組比較,dP＜0.05,eP＜0.01；括號內數值為抑制率(%)

組別例數耳腫脹度(mg)胸腺指數(mg/10 g體重)脾臟指數(mg/10 g體重)環孢素組(mg/kg, s.c, ×5 d)10 3.1±1.4e(73.2) 16.4±2.8e(43.0) 58.9±7.7d(18.1)致敏組1011.6±5.6b29.2±6.2a71.8±14.3c不致敏組1.3.1±2.837.3±4.859.1±6.3

2.2 環孢素A對小鼠腹腔巨噬細胞生成TNF-α的影響 初步實驗結果顯示, 環孢素A在劑量5 g/ml時對LPS刺激的小鼠腹腔巨噬細胞TNF-α分泌具有明顯的促進作用,增加率為127.6%。見表2。

表2 環孢素A對小鼠腹腔巨噬細胞TNF α分泌的影響

3 小結

環孢素A是一種兼有抗炎效應的免疫抑制劑, 主要用于器官移植排斥反應, 近年來發現它對角膜炎癥, 多發性心肌炎, 類風濕性關節炎均有一定的治療效果［3,4］。

本實驗結果表明, 環孢素A對免疫功能調節作用的實驗研究也表明該藥能明顯抑制DNFB誘導的小鼠遲發型變態反應, 表現為明顯減輕小鼠耳腫脹, 對胸腺和脾臟抑制作用顯著。

綜上所述, 環孢素A具有較強的免疫抑制作用。

［1］ 蔣催蓉, 左麗 , 鐘志強. 赤靈芝孢子粉對環孢素A免疫抑制模型小鼠固有免疫功能的影響.貴陽醫學院學報, 2009, 34(5): 546-549.

［2］ 李靖, 程桂芳, 朱秀媛. Gn類化合物對小鼠腹腔巨噬細胞產生腫瘤壞死因子α的影響. 藥學學報, 2000, 35(5):335-338.

［3］ Zhong M, Cheng GF, Wang WJ, et al. Inhibitory effect of resveratrol on interleukin 6 release by stimulated peritoneal macrophages of mice. Phytomedicine, 1999(6):79.

［4］ Zhang M, Yao Q, Sun BH, et al. Inducement and production of tumor necrosis factor by murine peritoneal macrophage. J Immunol, 1991(7):254.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.23.204

2015-03-13］

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