同型半胱氨酸及代謝酶基因遺傳多態(tài)性、葉酸和維生素B12與潰瘍性結腸炎的相關性

陳少文 吳東海 吉明柱

同型半胱氨酸及代謝酶基因遺傳多態(tài)性、葉酸和維生素B12與潰瘍性結腸炎的相關性

陳少文 吳東海 吉明柱

目的 觀察同型半胱氨酸(Hcy)及代謝酶基因遺傳多態(tài)性、葉酸和維生素B12與潰瘍性結腸炎(UC)之間的關系。方法 100例UC患者作為臨床研究對象, 并將其作為研究組, 另選同期行體檢的100例健康人員作為對照組。觀察兩組的Hcy、甲硫氨酸合成酶(MS)和亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)的基因多態(tài)性、葉酸及維生素B12水平。結果 治療前研究組患者的Hcy水平明顯高于對照組, 葉酸和維生素B12水平明顯低于對照組, 治療后研究組的Hcy水平明顯低于對照組, 葉酸和維生素B12水平明顯高于對照組, 差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率比較, 差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。經(jīng)Logistic回歸分析可得, UC患者的Hcy水平和維生素B12、葉酸、MS和MTHFR等因素之間有明顯的相關性(P＜0.05)。結論 UC與Hcy及代謝酶基因多態(tài)性、葉酸、維生素B12之間有著密切的聯(lián)系。

潰瘍性結腸炎；同型半胱氨酸；代謝酶基因遺傳多態(tài)性；葉酸；維生素B12

為了觀察Hcy在UC發(fā)病機制中的作用, 本次研究選取2012年10月～2014年10月深圳市大鵬新區(qū)南澳人民醫(yī)院、深圳市第二人民醫(yī)院、深圳市蛇口人民醫(yī)院收治的100例UC患者作為臨床研究對象, 對其臨床資料進行回顧性分析,現(xiàn)總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究選取2012年10月～2014年10月深圳市大鵬新區(qū)南澳人民醫(yī)院、深圳市第二人民醫(yī)院、深圳市蛇口人民醫(yī)院收治的100例UC患者作為臨床研究對象, 并將其作為研究組, 所有患者均經(jīng)病理檢查和內鏡檢查明確診斷［1］, 且均已排除具有慢性肝炎、糖尿病及其他癌癥疾病的患者, 其中男58例, 女42例；年齡51～79歲, 平均年齡(61.37±8.24)歲。另選同期于三家醫(yī)院進行體檢的100例健康體檢人員作為對照組, 其中男54例, 女46例；年齡54～82歲, 平均年齡(67.53±6.87)歲。兩組性別和年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 兩組均于清晨空腹狀態(tài)下抽取5 ml外周血作為血液標本, 給予肝素進行抗凝, 放置于低溫環(huán)境下, 以2500 r/min的速度進行10 min的離心, 然后取上清液待測。使用北京九強公司提供的Hcy試劑, 通過循環(huán)酶法［2］對Hcy的濃度進行測定；采用Waters公司產(chǎn)出的高效液相色譜儀器和德國拜耳公司提供的維生素B12試劑, 通過放射免疫法對葉酸和維生素B12進行測定。研究組患者在治療結束之后根據(jù)以上方法對相應的指標進行檢測, 注意試驗的所有步驟均嚴格遵循儀器和試劑的說明書進行操作。通過RT-PCR方法［3］對MS和MTHFR的基因多態(tài)性進行測定, 具體方法為：清晨空腹狀態(tài)抽取5 ml外周血, 提取DNA后采用紫外分光光度儀對其濃度進行檢測。試驗中采用德國QIAGEN公司生產(chǎn)的RT-PCR試劑盒和引物合成, 南京諾唯贊生物科技有限公司生產(chǎn)的總蛋白提取試劑盒, 深圳華因康基因科技有限公司生產(chǎn)的PCR儀；MS：A2756G引物序列：上游：5c-CATGAAGAATATGAAGATATTAGA-3c, 下游：5c-GAAC TAGAAGAGAGAAATTCTCTA-3c；MTHFR：C677T引物序列：上游：5c-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3c, 下游：5c-AGGACGGTCCGTGAGGTC-3c；分別進行2 min的91℃變性和預變性, 給予1 min的56℃退火, 45 s的74℃30個循環(huán), 5 min 72℃、12 h 4℃, 將cDNA的產(chǎn)物放在-20℃的環(huán)境下進行保存。分析利用3%濃度的瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產(chǎn)物。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；多因素采用Logistic回歸分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組Hcy、維生素B12及葉酸水平對比 治療前研究組患者的Hcy水平明顯高于對照組, 葉酸和維生素B12水平明顯低于對照組, 差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。治療后研究組的Hcy水平明顯低于對照組, 葉酸和維生素B12水平明顯高于對照組, 差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率對比 兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率比較, 差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

表1 兩組Hcy、維生素B12及葉酸水平對比( x-±s)

表2 兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率對比［n(%)］

2.3 Logistic回歸分析 將患者的Hcy水平作為因變量, 維生素B12、葉酸、MS和MTHFR等作為自變量, 采用Logistic回歸分析對研究組患者的各項指標進行分析得出, Hcy水平和維生素B12、葉酸、MS和MTHFR等因素之間有明顯的相關性(P＜0.05)。

3 討論

潰瘍性結腸炎簡稱潰結, 是臨床上一種侵及結腸和直腸的慢性非特異性炎癥, 其炎性病變會對結腸黏膜和黏膜下層造成損傷, 通常主要位于乙狀結腸與直腸上, 甚至也可以蔓延至整個結腸上［4］。目前, 臨床上對于UC的發(fā)病機制尚未明確, 其具有病程漫長、易反復發(fā)作等特點。Hcy是一種具有非常高的生物活性的分子, 其實質上是甲硫氨酸代謝的中間產(chǎn)物, 能夠通過誘導機體中的氧化應激反應而加快炎性反應的進程, 并且還可以引發(fā)內質網(wǎng)的應激反應而使機體長期維持在腸黏膜上皮炎癥狀態(tài)中, 同時Hcy還能夠對腸黏膜和腸道菌群間的相互作用進行調節(jié)［5］。目前, 相關學者對于Hcy及代謝酶基因多態(tài)性和UC之間的關系越來越重視。本次研究結果顯示, 研究組治療后的Hcy水平降低, 葉酸、維生素B12水平上升, UC患者Hcy水平的降低和葉酸、維生素B12之間呈負相關性, 當免疫力降低時, 葉酸、維生素B12水平會降低, 導致Hcy出現(xiàn)堆積現(xiàn)象［6］。此外, 兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率比較, 差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。這表明Hcy代謝的基因多態(tài)性會對其自身活性造成影響。而經(jīng)Logistic回歸分析顯示, UC患者的Hcy水平和維生素B12、葉酸、MS和MTHFR等因素之間有明顯的相關性(P＜0.05)。這表明在UC治療時增加患者的葉酸和維生素B12水平有助于降低Hcy水平。

綜上所述, UC與Hcy及代謝酶基因多態(tài)性、葉酸、維生素B12之間有著密切的聯(lián)系。

［1］ 阿衣努爾·買提斯迪克, 吾爾古麗·阿卜杜來海提, 哈木拉提·吾甫爾, 等.129例潰瘍性結腸炎患者維醫(yī)異常體液分型的量化診斷入選項專家咨詢研究.科技導報, 2013, 31(36):64-70.

［2］ 劉維新, 張紳, 任益, 等.潰瘍性結腸炎及潰瘍性結腸炎相關性結直腸癌小鼠模型中血管生成因子的表達及其與血管新生的關系.中國醫(yī)科大學學報, 2013, 42(3):231-234, 266.

［3］ 劉樹利, 常桂琴, 郭麗琴, 等.血清同型半胱氨酸與抗中性粒細胞胞質抗體對潰瘍性結腸炎的診斷意義.重慶醫(yī)學, 2014, 33(23):3069-3070.

［4］ 王敬軍.潰瘍性結腸炎患者血清同型半胱氨酸的檢測及其臨床意義.醫(yī)學理論與實踐, 2014, 19(20):2773-2774.

［5］ 蔣益, 趙杰, 徐昌隆, 等.亞甲基四氫葉酸還原酶G1793A基因多態(tài)性及高同型半胱氨酸血癥與潰瘍性結腸炎的相關性.中華內科雜志, 2010, 49(8):675-679.

［6］ 周旭軍, 關秀軍.潰瘍性結腸炎患者血清同型半胱氨酸與葉酸和維生素B12的相關性研究.北京醫(yī)學, 2015, 25(2):175-176.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.14.017

2015-04-01］

深圳市寶安區(qū)科技局(項目編號：2013241)

518121 深圳市大鵬新區(qū)南澳人民醫(yī)院內科

(陳少文)；深圳市第二人民醫(yī)院消化內科(吳東海)；深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院消化內科(吉明柱)