卷柏炒炭前后對小鼠出血時間和凝血時間的影響*

楊瑞芳，吳宿慧，魏術會，張振凌，李寒冰，李根林(.河南中醫學院第二附屬醫院藥學部，河南 鄭州 45000; .河南中醫學院藥學院，河南 鄭州 450046)

·實驗研究·

卷柏炒炭前后對小鼠出血時間和凝血時間的影響*

楊瑞芳1，吳宿慧2，魏術會2，張振凌2，李寒冰2，李根林2
(1.河南中醫學院第二附屬醫院藥學部，河南 鄭州 450002; 2.河南中醫學院藥學院，河南 鄭州 450046)

目的：對照研究卷柏炒炭前后對小鼠出血時間和凝血時間的影響，為進一步探討卷柏炮制前后作用機制的研究提供前期的實驗基礎。方法：昆明種小鼠隨機機分為生理鹽水組、卷柏生品低劑量組、卷柏生品高劑量組、卷柏炭低劑量組和卷柏炭高劑量組5組，每組10只。將卷柏生品、卷柏炭分別制成1，0.5 g /mL兩種質量分數的藥液。各給藥組灌胃相應藥液，給藥劑量為20 μL/g,連續給藥3 d，1 d 1次。生理鹽水組灌胃等體積的生理鹽水作為對照。采用剪尾法取血，采用玻璃毛細管法和玻片法分別測定卷柏炭灌胃后對小鼠出血時間和凝血時間的影響。結果：與生理鹽水組對比，卷柏生品高劑量組出血時間、凝血時間延長，差別有統計學意義(P<0.05)。卷柏炭低劑量組與生理鹽水組、卷柏生品低劑量組對比，出血時間、凝血時間減少，差別有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。卷柏炭高劑量組與生理鹽水組、卷柏生品高劑量組對比，出血時間、凝血時間減少，差別有統計學意義(P<0.01)。卷柏炭高劑量組與卷柏炭低劑量組對比，出血時間、凝血時間有所減少，但差別無統計學意義 (P>0.05)。結論：卷柏生品具有抗凝血作用；卷柏炭具有促凝血作用，且隨著濃度的增加，效果更顯著。

卷柏；卷柏炭；出血時間；凝血時間；動物；小鼠

卷柏為蕨類卷柏科(Selaginellaceae)卷柏屬(Selaginella)植物卷柏Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring或墊狀卷柏Selaginellapulvinata(HooK.et Grev.)Maxim.的干燥全草[1-2]，又名長生不死草、九死還魂草等[3]。卷柏性味辛、平，歸肝、心經，早在《本經》中即有記載，被列為上品，述其“主治五臟邪氣，女子陰中寒熱痛，癥瘕血閉絕子”。 卷柏生用具有活血通經、破血散結之功效，用于經閉痛經，癥瘕痞塊，跌撲損傷；炒炭后可化瘀止血、用于吐血、崩漏、便血、脫肛[4]。中醫學認為：卷柏生用活血，炒炭止血。《本草求真》云:“卷柏，其治有分生熟。生則微寒，力能破血通經，故治癥瘕淋結等癥；炙則辛溫，能以止血，故治腸紅脫肛等癥。”《日華子本草》云:“生用破血，炙用止血。”[5]。《本草述》也有“燒存性”入藥的記載。現卷柏多炒炭用于止血，但有關卷柏炒炭后止血作用的研究尚少。本文對照研究了卷柏炒炭前后經灌胃給藥對小鼠凝血時間的影響，以期對卷柏制炭后促進凝血的作用機制的研究提供前期的實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 動 物

昆明種小鼠50只，體質量18～22 g，雌雄各半，河南實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(豫)2010-0001。

1.2 藥品、試劑與儀器

卷柏生品，購自河南省鄭州市本草國藥館，經河南中醫學院陳隨清教授鑒定為卷柏科卷柏屬植物卷柏[S.tamariseina(Beauv.)Spring]；卷柏炭，河南中醫學院炮制實驗室自行炮制。9 g/L生理鹽水,山東齊都藥業有限公司產品，批號20140926。BSA-220.4型電子稱，上海卓精電子科技有限公司產品；DZF-6050型真空干燥箱，上海博訊實業有限公司醫療設備廠產品；ST2106電磁爐，美的集團產品；揚帆牌載玻片(25.25 mm×75.25 mm)，鹽城市鹽都區潘黃鎮文禮玻璃儀器廠產品；玻璃毛細采血管(內徑1 mm ，長100 mm)，華西醫科大學儀器廠產品；其余小鼠灌胃器、手術剪、電子計時鐘、濾紙、注射用針頭等為常規實驗室用品。

1.3 藥品的制備

1.3.1 卷柏炭的制備

參照文獻方法[6]，取潔凈的卷柏，置鍋內用武火炒至外表焦黑色，內呈焦黃色，噴淋清水，取出，曬干。

1.3.2 兩種不同質量分數卷柏生品藥液的制備

將藥材洗凈，切成1 cm段，置烘箱中50 ℃干燥，稱量100 g。煎煮2次，第1次加10倍量水煮沸30 min，第2次加8倍量水煮沸20 min，合并煎液，過濾，濃縮成100 mL的藥液，即得質量分數為1 g /m L藥液。另稱量50 g，同法制得質量分數為0.5 g/mL卷柏生品藥液。

1.3.3 兩種不同質量分數卷柏炭藥液的制備

取卷柏炭，稱量100 g。煎煮2次，第1次加10倍量水煮沸 30 min，第2次加8倍量水煮沸20 min,合并煎液，過濾，濃縮成100 mL的藥液，即得質量分數為1 g/mL藥液。另稱量50 g，同法制得質量分數為0.5 g/mL卷柏炭藥液。

1.4 動物分組與給藥

將50只小鼠隨機分為生理鹽水組、卷柏生品低劑量組、卷柏生品高劑量組、卷柏炭低劑量組和卷柏炭高劑量組5組，每組10只。各給藥組分別灌胃相應藥液，給藥劑量為20 μL/g,連續給藥3 d，1 d 1次。生理鹽水組灌胃等體積的生理鹽水作為對照。

1.5 檢測指標

1.5.1 出血時間

采用剪尾法[7]：末次給藥1 h后，將小鼠驅入固定器中，露鼠尾于外，用剪刀剪去尾尖約3 mm，血自行溢出時開始計時。每隔20 s用濾紙輕輕吸取血滴1次，至以濾紙吸時濾紙上沒有血滴產生為止，所歷時間為出血時間。

1.5.2 凝血時間

分別采用玻璃毛細管法[8-10]和玻片法[8-10]測定。玻璃毛細管法：末次給藥1h后，立刻以玻璃毛細管插入剛被剪尾處理的小鼠左眼內眥球后靜脈叢，從血液流入玻璃毛細管內開始計時，血液注滿后將玻璃毛細管平放于桌上 ，每隔 20 s折斷毛細管0.5 cm,并緩慢向左右拉開 ，觀察折斷面是否有血凝絲,至血凝絲出現為止,所歷時間即為凝血時間。玻片法：末次給藥1 h后，毛細管取血，將毛細管中的血液滴2滴于載玻片兩端，血滴直徑 5～6 mm，開始計時，每隔 20 s用清潔針頭輕挑血絲1次，觀察有無血絲挑起，至挑起血絲止，所歷時間即為凝血時間。另一滴血供復檢。

1.6 統計學方法

采用SPSS 17.0統計分析軟件處理。數據以均數(x)±標準差(s)表示。均進行正態性檢驗和方差齊性檢驗，符合正態分布時進行單因素方差分析，非正態分布進行非參數檢驗。多組間比較用ANOVA分析，再用LSD進行多組比較。以P<0.05為差別有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組小鼠出血時間對比

與生理鹽水組對比，卷柏生品高劑量組出血時間增加，卷柏炭高、低劑量組出血時間減少，差別有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。卷柏炭高、低劑量組與生品相應劑量組對比，出血時間明顯減少，差別有統計學意義(P<0.01)。與卷柏炭低劑量組對比，高劑量組出血時間雖減少，但差別無統計學意義 (P>0.05)。見表1。

表1 各組小鼠出血時間對比n=10,x±s

注:與生理鹽水組對比，**P<0.05，***P<0.01 ；與卷柏生品相同質量分數組對比，##P<0.01；與卷柏炭高劑量組對比，△P>0.05。

2.2 各組小鼠凝血時間對比

玻璃毛細管法和玻片法測定結果一致：與生理鹽水組對比，卷柏生品高劑量組凝血時間延長，差別有統計學意義(P<0.05)。與生理鹽水組、生品低劑量組對比，卷柏炭低劑量組凝血時間縮短，差別有統計學意義(P<0.05)。與生理鹽水組、生品高劑量組對比，卷柏炭高劑量組凝血時間減少，差別有統計學意義(P<0.01)。與卷柏炭低劑量組對比，高劑量組凝血時間有所減少，但差別無統計學意義 (P>0.05)。見表2、表3。

表2 玻璃毛細管法所測各組小鼠凝血時間對比n=10,x±s

注：與生理鹽水組對比，**P<0.05，***P<0.01；與卷柏生品相同質量分數組對比，##P<0.05，###P<0.01；與卷柏炭高劑量組對比，△P>0.05。

表3 玻片法所測各組小鼠凝血時間對比n=10,x±s

注：與生理鹽水組對比，**P<0.05，***P<0.01；與卷柏生品相同質量分數組對比， ##P<0.05 ###P<0.01；與卷柏炭高劑量組對比，△P>0.05。

3 討 論

出血是指因凝血系統障礙而發生的出血現象,為臨床的常見癥狀，中醫較早稱之為“血癥”。止血中藥較多[11]，炭藥是其中的佼佼者，因中藥在制炭后常增加其收斂與吸附作用,有利于止血。卷柏,生則破血通經,炙則化瘀止血。本實驗結果顯示：卷柏生品水煎液能明顯延長小鼠的凝血時間和出血時間,具有抗凝血作用；而卷柏炭品能夠明顯縮短小鼠的凝血時間和出血時間。結果表明：卷柏炒炭后確實有明顯的止血作用。本實驗中玻璃毛細管法所測凝血時間與玻片法所測凝血時間基本一致,說明該實驗結果可靠、可信。此外，盡管沒有統計學意義上的差別，但卷柏炭高劑量組比低劑量組凝血用時短，表現出更強的促凝效果，與生理鹽水組和同質量分數的卷柏生品相比，差異更顯著，說明在一定濃度范圍內，藥液質量分數對卷柏的促凝血活性有一定影響。

制炭為我國傳統的炮制工藝, 炭藥可增強收斂、止血之功,可降低毒性、緩和藥性等，其止血的機制非常復雜,往往并非由單一因素發揮作用的,主要是通過抑制抗凝血因子的產生或者增強體內凝血因素而促進凝血[12]。化瘀止血炭藥主要用于瘀血阻滯、血不循經而外溢的各種出血癥，卷柏炭作為臨床常用的化瘀止血炭藥炒炭后止血效果增強，其化學成分的種類、數量，與止血相關的藥性、藥效及臨床應用和各個藥理環節也發生了不同程度的改變[13]。

為了能更正確地運用炮制技術、規范飲片質量、指導臨床用藥和新藥的開發[14-15]，需多學科多角度研究中藥炭藥止血的作用機制，對炭藥止血理論不斷加以充實、完善，以利于中醫藥產業的現代化，推動中醫藥事業的發展，此是中藥現代化的發展趨勢[16]。

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)12-0070-04

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.12.32

李根林，教授，河南中醫藥大學圖書館，lhb8899@163.com

金水區技術研究與開發經費支持項目[金科(2011)31號 項目序號：45]

2015-05-19；

2015-10-20